Набор для экстракции ткани/РНК

1. Компоненты набора реагентов

Технические характеристики	50Т	100Т
Кот. Нет.	SN0329	SN0330
Колонки для очистки ДНК (набор)	50 (набор)	100 (набор)
Колонки для экстракции РНК (набор)	50 (набор)	100 (набор)
Экстракция РНК Буфер I	30 мл	2×30 мл
Буфер экстракции РНК IV	30 мл	2×30 мл
Буфер удаления ингибитора	2×30 мл	4×30 мл
Промывной буфер 1	2×15 мл	3×15 мл
Элюирующий буфер	20 мл	20 мл
Протеиназа К	1мл	2х1мл
Инструкция по эксплуатации	1	1

 

2. Хранилище

Этот набор реагентов следует хранить при комнатной температуре. (15-25℃) в сухом состоянии и устойчиво для 12 месяцы. Протеиназа K содержит стабилизатор, позволяя его транспортировать при комнатной температуре; однако, для длительного хранения, его следует хранить при -20 ℃.

3. Инструкции по использованию набора реагентов

3.1 Этот набор предназначен для исследовательских целей в области молекулярной биологии и не должен использоваться для диагностики или лечения заболеваний..

3.2 Некоторые компоненты набора содержат раздражители.; желательно принять необходимые меры предосторожности (например, носить защитную одежду и очки).

3.3 Для использования этого комплекта требуется дополнительное оборудование, такое как высокоскоростная центрифуга., водяная баня (металлическая ванна), вихревой смеситель, безводный этанол, жидкий азот, хлороформ, стерильная деионизированная вода, и EP трубки.

4. Знакомство с набором реагентов

Образец ДНК/РНК одновременный изоляция и очистка. Этот комплект предлагает два набора систем лизиса, Подходит для различных тканей и клеток образца, в том числе большинство растений, животные, бактерии, и т. д..

Набор для быстрого очистки ДНК/РНК может извлекать общую ДНК/РНК из образцов внутри 1 час. Извлеченная ДНК/РНК может быть непосредственно использовать для RT-ПЦР, Нозерн-блоттинг, и т. д.. Весь процесс очистки не требует использования токсичных реагентов типа фенол-хлороформа..

5. Экспериментальные принципы и процедуры

6. Процесс экстракции

Меры предосторожности перед началом эксперимента:

А. Перед использованием, добавьте указанное количество абсолютного этанола в СтиратьБуфер 1 Согласно этикетке на бутылке реагента, и отметьте проверку на этикетке, чтобы указать добавление абсолютного этанола.

Б. Элюирующий буфер представляет собой 0.1х ТЕ решение с минимальным количеством ЭДТА. Если ЭДТА повлияет на последующие эксперименты, рекомендуется использовать стерильную деионизированную воду вместо элюирующего буфера..

С. Буфер экстракции РНК I предназначен для извлечения образцов растений и грибков, В то время как буфер экстракции РНК IV в основном используется для тканей животных, кровь, и другие образцы тканей.

1. Образец обработки:
2. Растение/животные тканевые материалы: Собирать образцы с использованием жидкого азота, Измельчить собранный материал непосредственно в жидком азоте, и приступить к шагу 2 (рекомендуется использовать буфер экстракции РНК I).
3. Клеточные ткани: Центрифуга и собирать <107 суспендированные клетки в 1.5 центрифужная пробирка мл, Быстро поступайте на шаг 2 (Рекомендуется использовать буфер экстракции РНК III).
4. Добавлять 500Буфер экстракции РНК мкл буфер экстракции РНК IV IV, 10мкл протеиназы К, вихрь и тщательно перемешать. Обеспечить нежное смешивание на этом этапе, чтобы предотвратить механическую резку ДНК ткани и снизить выход ДНК.
5. Перенести лизат в очистка ДНК столбец, центрифуга в 13,000 об/мин для 2 минуты, собрать фильтрат (РНК присутствует в фильтрате). В этот момент, ДНК адсорбируется на колонне ДНК и может кратко храниться при 4 ° С, одновременно собирая РНК на следующих этапах.

(Примечание: Если образец - это растительная ткань, центрифуга в 13,000 об/мин для 10 минуты, и добавить супернатант в колонку связывания ДНК.)

4. Точно оценить объем фильтрата, добавлять 5 Времена обход абсолютного этанола, тщательно перемешать. Если выпадут осадки, это не влияет на последующие эксперименты.
5. Добавьте полученную жидкость в колонку экстракционной очистки РНК. (примерно 650-700 мкл каждый раз), центрифуга при более чем 8,000 об/мин для 1 минута, выбросить собранную отработанную жидкость, и снова вставьте пробирку для сбора в колонку очистки для следующего шага..
6. Повторить шаг 5, добавьте оставшуюся жидкость в колонку для экстракционной очистки РНК, центрифуга при более чем 8,000 об/мин для 1 минута, Откажитесь от отходов жидкости и сбора, Поместите колонку очистки экстракции РНК в новую трубку для коллекции, и подготовиться к одновременной сборе ДНК.
7. Добавлять 600мкл буфера для удаления ингибитора к колонке очистки ДНК экстракции и столбца очистки экстракции РНК, центрифуга при более чем 8,000 об/мин для 1 минута, выбросить отработанную жидкость, и повторно включить колонку очистки ДНК/РНК в трубку для сбора для следующего шага.
8. Добавлять 700мкл промывочного буфера 1 к колонке очистки ДНК экстракции и столбца очистки экстракции РНК, центрифуга в 14,000 об/мин (20,000×г) для 2 минуты. Продолжите время центрифугирования надлежащим образом, чтобы убедиться, что мембрана полностью высушена.

(Примечание: Убедитесь, что в промывочный буфер добавлен абсолютный этанол. 1. Наличие этанола оказывает значительное влияние на последующие эксперименты, поэтому сушка мембраны имеет решающее значение. После центрифугирования, Убедитесь, что этанол не присутствует до элюирования, Затем откажитесь от отходов и трубки для сбора.

После промывки промывочным буфером 1, Мембрана колонки очищения РНК должна иметь только небольшой цвет. После центрифугирования, Осторожно удалить колонку очищения РНК, обеспечение отсутствия контакта с трубкой для сбора, чтобы избежать помех этанола.)

9. Поместите колонку очистки ДНК/РНК в новую центрифужную трубку, капать 50-100 мкл элюирующего буфера на мембрану, инкубировать при комнатной температуре в течение 5 минуты (15° C-25 ° C.), центрифуга при более чем 8,000 об/мин для 1 минута.

(Примечание: Элюирующие нуклеиновые кислоты с 50 in elution buffer может увеличить концентрацию нуклеиновой кислоты, но уменьшить общий выход нуклеиновой кислоты.)

• Примечание:

1. В целом, Большие объемы элюирования приводят к повышению эффективности элюирования, но для увеличения концентрации нуклеиновой кислоты, объем элюирования может быть уменьшен, но не внизу 50 мкл.
2. РНК, В присутствии буфера экстракции РНК I/РНК буфер экстракции III III, не деградируется РНКазой, но следует отличать от ДНК в последующих экспериментах. Используйте расходные материалы без РНКазы для разделения РНК, когда это возможно.