Набор для экстракции РНК супер-PUR (Тризол)

1. Компоненты набора реагентов

Технические характеристики	50Т	100Т
Кот. Нет.	SN0303	SN0304
Колонки для экстракции РНК (набор)	50 (набор)	100 (набор)
ДНКаза I	1мл	1мл
10 × реакционный буфер	1 мл	2 × 1 мл
Тризол буфер	50 мл	2 × 50 мл
Буфер удаления ингибитора	30 мл	2 × 30 мл
Промывной буфер 1	15 мл	2 × 15 мл
Элюирующий буфер	20 мл	2 ×20 мл
Инструкция по эксплуатации	1	1

 

2. Хранилище

Этот набор реагентов следует хранить при комнатной температуре. (15-25℃) в сухой среде и устойчиво для 12 месяцы. DNASE I содержит консервант, возможность транспортировки при комнатной температуре, но для длительного хранения, его следует хранить при -20 ℃.

3. Инструкции по использованию набора реагентов

3.1 Этот набор предназначен для исследовательских целей в области молекулярной биологии и не должен использоваться для диагностики или лечения заболеваний..

3.2 Некоторые компоненты набора содержат раздражители.; желательно принять необходимые меры предосторожности (например, носить защитную одежду и очки).

3.3 Для использования этого комплекта требуется дополнительное оборудование, такое как высокоскоростная центрифуга., водяная баня (металлическая ванна), вихревой смеситель, безводный этанол, жидкий азот, хлороформ, стерильная деионизированная вода, и EP трубки.

4. Знакомство с набором реагентов

Этот комплект для очистки РНК использует традиционный тризол в сочетании с методом колонки мембраны для быстрой очистки растения, животное, салфетка, клетка, Микробная РНК, и грибковые гифу РНК. Подходит для большинства видов. Этот набор для очистки РНК может быть применен к превышению тканей растений 100 мг. РНК, извлеченная с помощью этого комплекта, имеет чрезвычайно низкое содержание ДНК. Если чувствительность к ДНК в экспериментах вызывает беспокойство, Рекомендуется использовать пищеварение DNASE I на столбце.

РНК -набор для быстрой очистки может извлекать общую РНК из образцов (включая ядерную РНК и цитоплазматическую РНК) в пределах 1 час. Экстрагированную РНК можно напрямую использовать для RT.-ПЦР, Нозерн-блоттинг, и другие приложения.

5. Экспериментальные принципы и процедуры

6. Процесс экстракции

Меры предосторожности перед началом эксперимента:

А. Перед использованием, добавьте указанное количество абсолютного этанола в СтиратьБуфер 1 Согласно этикетке на бутылке реагента, и установите флажок на этикетке, чтобы указать, что абсолютный этанол был добавлен.

Б. Элюирующий буфер представляет собой 0.1х ТЕ решение содержащий минимальное количество ЭДТА. Если ЭДТА повлияет на последующие эксперименты, рекомендуется заменить элюционный буфер стерильной деионизированной водой..

1. Образец обработки:

А. Салфетка: Если свежие материалы нельзя использовать немедленно, Поместите их в жидкий азот и храните их при -80 ° C. Высушенные материалы можно хранить при комнатной температуре.. Измельчить 30 ~ 80 мг ткани в жидком азоте и добавить 1 ML Trizol Buffer Для гомогенизации.

Б. Монослойные культивируемые клетки: Аспирировать культуральную среду и добавить 1 ML Trizol Buffer Для гомогенизации.

С. Клеточная суспензия: Центрифуга для сбора клеток и добавления 1 ML Trizol Buffer Для гомогенизации.

2. После добавления Тризол буфер к образцу, Тщательно перемешать с помощью пипетки, Разрешить полное лизис образцов, и инкубировать при комнатной температуре в течение 5 минуты.

3. Добавить хлороформ в соотношение 200 мкл за 1 мл буфера Тризола, энергично встряхнуть 30 секунды, и инкубировать при комнатной температуре в течение 2 минуты.

4. Центрифуга лизат при 4 ° С, 12,000 об/мин для 10 минуты. РНК будет присутствовать в верхней водной фазе.

5. Осторожно перенесите супернатант в новую центрифужную пробирку., Избегая коллекции средних и нижних слоев. (Примечание: Примерно 400 мкл жидкости можно переносить, что может быть меньше для некоторых видов.)

6. Добавить равный объем предварительно охлажденного абсолютного этанола, Смешайте быстро. (Например, добавлять 400 мкл лизата, добавлять 400 мкл абсолютного этанола. Если объем лизата меньше 400 мкл, уменьшить количество абсолютного этанола пропорционально. Небольшой осадок может образовываться после добавления этанола, но это не влияет на последующие эксперименты.)

7. Перенести полученную жидкость в колонку очищения РНК (примерно 650-700 мкл за время), центрифуга при более чем 8,000 об/мин для 1 минута, выбросить собранные отходы, и снова вставьте пробирку для сбора в колонку очистки для следующего шага..

8. Повторить шаг 7, Добавление оставшейся жидкости в колонку очищения РНК, центрифуга при более чем 8,000 об/мин для 1 минута, Отбросьте отходы и трубку для сбора.

9. Поместите колонку очистки РНК в новую трубку для сбора, добавлять 300 мкл буфера удаления ингибитора, центрифуга при более чем 8,000 об/мин для 1 минута, выбросить отходы, и повторно включить колонку очищения РНК в трубку для следующего шага.

10. Добавлять 80 мкл ДНКазы IРабочее решение для колонки очистки РНК, инкубировать при 20 ° C до 30 ° C для 15 минуты. (Подготовьте DNASE I Рабочего решения: 62 icl rnase без вода, 8 мкл 10 × реакционный буфер, и 10 мкл ДНКаза i, примириться 80 icl dnase i Работающий раствор.)

11. Добавлять 300 мкл буфера удаления ингибиторак колонке очистки РНК, центрифуга при более чем 8,000 об/мин для 1 минута, выбросить отходы, и повторно включить колонку очищения РНК в трубку для следующего шага.

12. Добавлять 700 мкл промывочного буфера 1к колонке очистки РНК, центрифуга в 14,000 об/мин (20,000×г) для 2 минуты, При необходимости продлить время центрифугирования для более сухой мембраны. (Примечание: Подтвердите добавление этанола в промывочный буфер 1; Наличие этанола значительно влияет на последующие эксперименты. Убедитесь, что мембрана сухая после центрифугирования перед элюированием. Выбросьте отходы и пробирку для сбора.. После использования буфера для стирки 1, Мембрана на колонке очистки РНК должна иметь только небольшой цвет. Осторожно удалить колонку очищения РНК после центрифугирования, Обеспечение того, чтобы он не касался трубки сбора, чтобы избежать загрязнения этанолом.)

13. Поместите колонку для очистки РНК в новую центрифужную трубку, капать 100 мкл элюирующего буферана мембрану, инкубировать при комнатной температуре в течение 5 минуты (15° C до 25 ° C.), и центрифуга в более чем 8,000 об/мин для 1 минута. (Примечание: Элюирование РНК с помощью 50 мкл буфера элюции может увеличить концентрацию РНК, но снизить общий выход РНК.)

14. Повторите предыдущий шаг. (Примечание: Новая центрифужная трубка может быть использована для сбора РНК, элюированной во второй раз или продолжить использование оригинальной коллекционной трубки для сбора РНК.)