Solarbio лактатдегидрогеназа (ЛДГ) Набор для анализа активности

Лактатдегидрогеназа (ЛДГ) Набор для анализа активности

Примечание: Перед тестированием возьмите два или три разных образца для прогнозирования..

Операционное оборудование: Спектрофотометр/считыватель микропланшетов

Кот нет: BC0685

Размер:100Т/48С

Компоненты:

Экстракт раствора: 60 мл×1. Хранение при 4℃；

Реагент I: 7 мл×1. Хранение при 4℃.

Реагент II: Порошок × 1. Хранение при -20℃. Рабочее решение: раствориться с 1.3 мл дистиллированной воды перед использованием. Его можно разделить на трубку после сопоставления, который можно сохранить в течение двух недель при -20 ℃. Избегайте повторных циклов замораживания и оттаивания.

Реагент III: 7 мл×1. Хранение при 4℃.

Реагент IV: 25 мл×1. Хранение при 4℃.

Стандартный раствор пирувата натрия: 1 мл (2 мкмоль/мл) × 1. Хранение при 4℃.

Описание продукта:

Лактатдегидрогеназа (LDH или LD) является терминальным ферментом пути гликолиза, который обнаруживается почти во всех живых клетках (животные, растения, и прокариоты). LDH катализирует превращение лактата в пировиновую кислоту и спину, Когда он преобразует NAD+ в NADH и обратно.

NAD+ и молочная кислота окисляются до пировиночной кислоты в результате катализа LDH. Пируват также реагировал с 2,4-динитрофенилгидразидом с образованием пирувата динитробензона, который показывает коричневый красный цвет в щелочном растворе, а глубина цвета пропорциональна концентрации пирувата.

Требуемые реагенты и оборудование, которые не входят в комплект поставки:

Спектрофотометр/считыватель микропланшетов, Термостат водяная баня, настольная центрифуга, регулируемая пипетка, микро-стеклянная кювета/96-луночный планшет с плоским дном, ступка/гомогенизатор, лед, дистиллированная вода.

Процедура:

я. Образец подготовка:

1. Бактерии, клетки, или образец ткани:

Бактерии или клетки:

Сбор бактерий или клеток в центрифужную трубку. Жидкость в верхнем слое отбрасывается после центрифугирования. Соотношение бактерий/количества клеток (104): Извлеките объем раствора (мл) 500 ~ 1000:1(предлагается взять на себя 5 миллион бактерий/клетки и добавить 1 мл раствора экстракта). Бактерии и клетки разделяются ультразвуковыми (помещенный на лед, 200Вт, время работы 3с, интервал 10 с, повторить для 30 раз). Центрифуга в 8000 RPM 4 ℃ для 10 минуты, Возьмите супернатант и поставьте его на лед для тестирования.

Салфетка:

Одногенность ледяной баты проводится в соответствии с соотношением массы тканей (г): Извлеките объем раствора (мл) "=" 1: 5~10 (рекомендуется взять на себя 0.1 г ткани и добавить 1 мл раствора экстракта). Гомогенизация ледяной ванны. Центрифуга в 8000 rpm и 4 ℃ для 10 минуты, Возьмите супернатант и поставьте его на лед для тестирования.

2. сыворотка (плазма)образец:

Обнаруйте образец напрямую.

II. Процедура:

1. Разогрейте спектрофотометр/считывание микропланшета 30 минуты, отрегулировать длину волны, чтобы 450 нм, установить ноль с помощью дистиллированной воды.
2. Стандартный раствор пирувата натрия: брать 100 мкл стандартного раствора, разбавить 1, 5, 0.25, 0.125, 0 мкмоль/мл, и использовать 2, 1, 0.5, 0.25, 0.125, 0 мкмоль/мл в качестве стандартной кривой.

3. Образец теста

Название реагента (мкл)	Пробирка(В)	Контрольная трубка(переменный ток)	Стандартная трубка(Как)
Образец	10	10	—
Стандартное решение	—	—	10
Реагент I	50	50	50
Реагент II	10	—	—
Дистиллированная вода	—	10	10
Тщательно смешано, инкубировать в 37 ℃(млекопитающее) или 25℃(другие виды) водяная баня для 15 минуты.
Реагент III	50	50	50
Тщательно смешано, инкубировать в 37 ℃(млекопитающее) или 25℃(другие виды) водяная баня для 15 минуты.
Реагент IV	150	150	150

Тщательно смешано, поместить при комнатной температуре на 3 минуты. Брать 200 мкл реакционного раствора в микроклассной кювете/96 сквозной пластины с плоской двойной., измерил поглощение в 450 нм, ΔA = At-AC. Каждая пробирка должна установить управляющую трубку.

III. ЛДГ Расчеты.

1. Образец содержание пирувата натрия
2. Установите стандартную кривую, ось Y как стандартная концентрация, мкмоль/мл, x-ось как 450 nm поглощение. Put ΔA(Икс) в стандартную кривую, Рассчитайте y(мкмоль/мл)
3. сыворотка (плазма) Образец активности LDH

Определение единицы измерения: Одна единица активности фермента определяется как количество ферментов, катализирующих продуцирование 1 нмоль пировиновой кислоты в минуту, Каждый миллилитр сыворотки.

ЛДГ(Ед/мл)= y ÷ t × 103 = 66,7 × y

4. Салфетка, Активность LDH бактерий или культивируемых клеток

А. Концентрация белка:

Определение единицы измерения: Одна единица активности фермента определяется как количество ферментов, катализирующих продуцирование 1 нмоль пировиновой кислоты в минуту, каждый миллиграмм белка.

ЛДГ(Ед/мг прот)= y ÷ t ÷ cpr × 103 = 66,7 × y ÷ cpr

Б. Вес образца

Определение единицы измерения: Одна единица активности фермента определяется как количество ферментов, катализирующих продуцирование 1 нмоль пировиновой кислоты в минуту, в каждом грамме ткани. ЛДГ(Ед/г)= y ÷ t ÷ w × 103 = 666,7 × y

С. Количество ячеек

Определение единицы измерения: Одна единица активности фермента определяется как количество ферментов, катализирующих продуцирование 1 нмоль пировиновой кислоты в минуту каждый 10000 клетки.

ЛДГ(U/104 Cell)= y ÷ t ÷ 500 × 103 = 0,133 × y

Против: Сверхнациональный том (мл), 0.01 мл; Всв: Извлеките объем раствора, 1 мл; Т: Время реакции, 15 минуты;

КПР: Концентрация белка образца, мг/мл; Вт: Вес образца, 0.1 г;

500: Общее количество бактерий или клеток, 5 миллион; 103: 1 мкмоль/мл = 103 нмоль/мл.

Рекомендации

[1] Huang P h, FU L C., Huang c s, и другие. Поглощение олигогалактуронида и его влияние на ингибирование роста, Активность лактатдегидрогеназы и высвобождение галактин-3 раковых клеток человека[Дж]. Пищевая химия, 2012, 132(4): 1987-1995.

сопутствующие товары

BC0740/BC0745 Гексокиназа(HK) Набор для анализа активности

BC0540/BC0545 Пируваткиназа(Пк) Набор для анализа активности

BC2250/BC2255 фосфоглицератная киназа(PGK) Набор для анализа активности

BC2270/BC2275 фруктозо-бисфосфат альдолаза(FBA) Набор для анализа активности