Печеночная липаза (Hl) Набор для анализа активности

Примечание: Перед тестированием возьмите два или три разных образца для прогнозирования..

Операционное оборудование: Спектрофотометр

Кот нет: BC2380

Размер:50Т/24С

Компоненты:

Реагент I: 100 мл×1. Хранение при 4℃.

Реагент II: 3 мл×1. Хранение при 4℃.

Реагент III: Порошок×1. Хранение при 4℃. Перед использованием, добавлять 30 мл дистиллированной воды, полностью растворить.

Реагент IV: Порошок×2. Хранение при -20℃. Перед использованием, добавлять 2 мл дистиллированной воды до одной, полностью растворить. Растворенный реагент может храниться в -20 ° C после переупаковки. Избегайте повторяющихся циклов замораживания-оттаивания;

Стандартный: Порошок×1. Перед использованием, 6.94 мл ацетон добавлен для подготовки 10 мкмоль/мл α-нафтол

стандартное решение, который был полностью распущен перед использованием.

Описание продукта:

Печеночная липаза (Hl) является липолитическим ферментом, синтезированным в паренхиматовых клетках печени. Он присутствует на поверхности синусоидальных эндотелиальных клеток печени и поверхности микровилли гепатоцитов в синусоидальном пространстве, и может гидролизовать различные липопротеины. Триглицериды (ТГ) и фосфолипиды (Пл) В среде изменяется размер и плотность различных частиц липопротеинов. Когда HL и его активность в плазме увеличиваются, это может привести к липопротеину низкой плотности (LDL) уровни в плазме, увеличить и ускорить возникновение и развитие атеросклероза.

HL-гидролизует α-нафтилацетат для получения α-нафтола, который может сформировать пурпурно-красное соединение азо с быстрой синей B солью. Он имеет характерный пик поглощения в 595 нм, и его глубина цвета положительно коррелирует с активностью эстеразы печени в определенном диапазоне.

Требуемые реагенты и оборудование, которые не входят в комплект поставки:

Спектрофотометр, водяная баня, баланс, центрифуга, Регулируемый передача, 1 стеклянная кювета мл, ступка/гомогенизатор, Ультразвуковая дробилка, лед и дистиллированная вода.

Процедура:

я. Фермент добыча

1. Салфетка

В соответствии с массой ткани (г): объем реагента I (мл) является 1:5~ 10 для извлечения. Рекомендуется добавить 1 мл реагента I 0.1 г ткани, и полностью гомогенизировать ледяную ванну. Центрифуга в 10000G для 10 минуты в 4 ℃ для удаления нерастворимых материалов, и возьмите супернатант на льду перед тестированием.

2. Бактерии или клетки

В соответствии с бактериями или клетками (104): объем реагента I (мл) 500 ~ 1000:1. Рекомендуется добавить 1 мл реагента I 5 миллионов бактерий или клеток. Используйте ультразвуковое значение для разделения бактерий и клеток (помещенный на лед, Ультразвуковая мощность 300 Вт, Рабочее время 3с, интервал 7 секунд, общее время 3 мин). Центрифуга в, 10000G для 10 Протокол в 4 ℃, чтобы удалить нерастворимые материалы и взять супернатант на льду перед тестированием.

3. Культуральная среда или другая жидкость: Обнаружение напрямую.

II. Обнаружение

• Предварительно разогрейте спектрофотометр для 30 минуты, отрегулировать длину волны, чтобы 595 нм, установить ноль с помощью дистиллированной воды.
• Разогрейте реагент III при 30 ℃ для более чем 20 минуты.
• Стандартный: Разбавить стандартный раствор 10 мкмоль/мл 1.25, 0.625, 0.3125, 0.15625, 0.078мкмоль/мл с реагентом I.
• Добавьте следующие реагенты в 1.5 мл EP пробирки:

	Контрастная трубка (С)	Пробирка (Т)	Стандартная трубка (С)	Пустая трубка (Б)
Образец (мкл)	100	100	—	—
Стандартное решение (мкл)	—	—	100	—
Реагент I (мкл)	450	400	400	500
Реагент II (мкл)	—	50	50	50
Смешать и реагировать на 10 Мой на 30 ℃			—	—
Реагент III (мкл)	400	400	400	400
Реагент IV (мкл)	50	50	50	50
Тщательно перемешайте и обнаружите поглощение при 595 нм, Запись как ac, В, Как и ab соответственно. ΔAt =(АТ-АС), ΔAS =(АС-АБ). Для каждой пробирки требуется контрастная трубка, и стандартная кривая должна быть проверена только один или два раза.

III. Расчет:

1.Стандартная кривая

Концентрация стандартного раствора в виде оси x, ΔAs как ось Y., получить уравнение y = kx+b. Возьмите ΔAT в уравнение, чтобы приобрести x (мкмоль/мл) ценить.

2. Расчет

• Концентрация белка ткани

Определение единицы измерения: Одна единица ферментной активности определяется как количество фермента, который катализирует гидролиз α-нафтилацетата для генерации 1 мкмоль α-нафтола каждый мг белка в реакционной системе в минуту при 40 ℃.

HL активность (Ед/мг прот)= x × vs ÷ (против × cpr) ÷ t = 0,1x ÷ cpr

• Вес ткани

Определение единицы измерения: Одна единица ферментной активности определяется как количество фермента, который катализирует гидролиз α-нафтилацетата для генерации 1 мкмоль α-нафтола каждый грамм ткани в реакционной системе в минуту при 40 ℃.

HL активность (Е/г веса) = x × vs ÷(W × vs ÷ ve)÷ t = 0,0333x ÷ w

• Жидкость

Определение единицы измерения: Одна единица ферментной активности определяется как количество фермента, который катализирует гидролиз α-нафтилацетата для генерации 1 мкмоль α-нафтола каждый миллилитр образца жидкости в реакционной системе в минуту при 40 ℃.

HL активность (Ед/мл) = x × vs ÷ vs ÷ t = 0,1x

• Бактерии или культивируемые клетки

Определение единицы измерения: Одна единица ферментной активности определяется как количество фермента, который катализирует гидролиз α-нафтилацетата для генерации 1 мкмоль α-нафтола каждый 104 клетки или бактерии в реакционной системе в минуту при 40 ℃.

HL активность (U/104 Cell) = x × ve ÷ количество ячейки ÷ t = 0,1x ÷ Компания ячейки

Против: Объем образца (мл), 0.1 мл; ве: Извлеките объем раствора, 1 мл;

КПР: Концентрация белка супернатанта (мг/мл); Т: Время реакции (мин), 10 минуты;

Вт: Вес образца, г;

Количество ячеек: 10 тысяча как единица.

Примечание:

1. Если образец - печень животных, Рекомендуется разбавить образец реагентом I больше, чем 25 раз до тестирования, и умножить коэффициент разбавления в расчете
2. Если образец - сыворотка или плазма от животных с ожирением, Рекомендуется разбавить образец реагентом I больше, чем 5 раз до тестирования, и умножить коэффициент разбавления в расчете
3. Когда ΔA больше, чем 0.8, Рекомендуется измерить образец после разбавления его реагентом, и умножьте его на коэффициент разбавления в расчете

Экспериментальный пример:

1. 1G Крысиная печень была взята для обработки образца, и супернатант разбавляется 24 раз, Затем операция выполняется в соответствии с этапами операции. Измеряется и рассчитывается 96 колодезная пластина: ΔA = at-ab = 0,713-0,001 = 0,712, и стандартная кривая: y = 0,6381x — 0.0005, Рассчитайте x = 1.1166

HL активность (Ед/г массы) = x × vs ÷ (W × vs ÷ vst)÷ t × 48 = 53.597 Ед/г массы.

2. После того, как сыворотка индейки была разбавлена 6 раз, Операция была выполнена в соответствии с этапами операции. Измеряется и рассчитывается 96 колодезная пластина: ΔA = at-ab = 0,572-0,003 = 0,569, и стандартная кривая: y = 0,6381x — 0.0005, Рассчитайте x = 892

HL активность (Ед/г массы) = x × vs ÷ (W × vs ÷ vst)÷ t × 12 = 1.071 Ед/г массы

сопутствующие товары：

BC2340/BC2345 Липаза(ЛПС) Набор для анализа активности

BC0620/BC0625 Триглицерид(ТГ) Набор для анализа содержания

BC2440/BC2445 Липопроинлипаза(LPL) Набор для анализа активности

BC0320/BC0325 Plant Lipoxygenase(Локс) Набор для анализа активности

BC0590/BC0595 Свободные жирные кислоты(FFA) Набор для анализа содержания