Соларбио глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназа(GAPDH) Набор для анализа активности

Глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназа(GAPDH) Набор для анализа активности

Примечание: Перед тестированием возьмите два или три разных образца для прогнозирования..

Инструмент обнаружения: Спектрофотометр

Кот нет: BC2210

Размер: 25T/24 ; 50Т/48С

Компоненты:

Экстракт раствора: 60 мл×1. Хранить при 4℃.

Реагент I: Порошок×1. Хранить при -20℃.

Реагент II: 50 мл×1. Хранить при 4℃.

Реагент III: 30 мкл × 1. Хранить при 4℃. Жидкость помещается в пробирку EP в бутылке реагента. В соответствии с дозировкой и объемным соотношением реагента III: дистиллированная вода 3:100, хорошо перемешать, Используйте и подготовьтесь сейчас.

Описание продукта:

GAPDH (ЕС 1.2.1.12) катализирует окисление глицеральдегида 3-фосфата до 1,3-дифосфоглицерида. Это ключевой фермент пути гликолиза. Это тесно связано с пути глюконеогенеза, поддержание концентрации глюкозы в крови и возникновение диабета. Это играет важную роль в расстройствах глюкозы, липидный и белковый метаболизм.

3-Фосфоглицерат-киназа может катализировать продукцию 1,3-дифосфоглицерида из трифосфата и АТФ. GAPDH обратно катализирует образование глицеральдегида-3-фосфата, неорганический фосфор и NAD+ из 1,3-дифосфоглицеридов и NADH. Уменьшение NADH, измеренное в 340 НМ может отражать активность GAPDH.

Требуемый материал

Столовая центрифуга, Ультрафиолетовый спектрофотометр, Постоянная температурная водяная ванна, ступка/гомогенизатор, 1 мл кварцевая кювета, трансфертер, лед и дистиллированная вода.

Процедура:

я. Образец Добыча:

1. Образец ткани:

В соответствии с массой ткани (г): объем раствора экстракта (мл) является 1: 5~10. Предложенный 0.1 г ткани с 1 мл раствора экстракта. Полностью размолоть на льду, центрифуга в 8000 G и 4 ℃ для 20 мин. Супернатант помещается на льду для тестирования.

2. Бактерии или клетки:

В соответствии с количеством ячеек (104): объем раствора экстракта (мл) является 500 ~ 1000: 1. Рекомендую 5 миллион с 1 мл раствора экстракта. Используйте ультразвуковое значение для разделения бактерий или клеток (власть 20% или 200 Вт, время работы 3с, интервал 10 с, повторить для 30 раз). Центрифуга в, 8000 G и 4 ℃ для 10 мин. Супернатант помещается на льду для тестирования.

3. сыворотка (плазма): прямое измерение.

II. Определение процедура:

• Разогрейте ультрафиолетовый спектрофотометр 30 мин, Отрегулируйте длину волны до 340 нм, установить ноль с помощью дистиллированной воды.
• Подготовка рабочего решения: Вылейте весь реагент II в одну бутылку реагента I. Полностью растворяется. Разогрейте определенное количество 37 ℃ (млекопитающее) или 25℃ (другие виды) для 10 мин по мере необходимости. Неиспользованные реагенты должны храниться в 20 ℃ после подзарядки. Избегайте многократного замораживания и оттаивания.
• Добавьте реагенты из следующего списка:

Название реагента (мкл)	Пробирка (Т)	Пустая трубка (Б)
Образец	30
Дистиллированная вода		30
Реагент III	20	20
Рабочее решение	950	950
Добавить вышеупомянутые реагенты в 1 ML Quartz Cuvette соответственно. Тщательно перемешать. Измерить значение поглощения A1 в 340 NM для 10 с. Быстро положите его в водяную баню или инкубатор на 37 ℃ (млекопитающее) или 25℃ (другие виды) для 5 мин. Уберите и высушите его быстро. Измерьте значение поглощения A2 в течение 5 мин10. Рассчитайте ΔAt = a1t- A2T, ΔAB= А1В- А2Б, ΔA = ΔAt — ΔAB. Пустая трубка должна проверить только 1–2 раза.

III. Расчет:

Рассчитано по микро -кварцевой кювете

• Рассчитывается концентрацией белка:

Определение единицы измерения: Одна единица активности ферментов определяется как количество ферментов потребляет 1 NMOL NADH в реакционной системе в минуту, Каждый белок мг.

GAPDH активность (Ед/мг прот) = ΔA ÷(ε×d)× VRV × 109 ÷(Против × cpr)÷ t = 1072 × ΔA ÷ cpr

• Рассчитано по весу выборки

Определение единицы измерения: Одна единица активности ферментов определяется как количество ферментов потребляет 1 NMOL NADH в реакционной системе в минуту, каждый образец G..

GAPDH активность (U/g свежий вес) = ΔA ÷(ε×d)× VRV × 109 ÷(Против × w ÷ vst)÷ t = 1072 × ΔA ÷ w

• Рассчитывается по бактериям или количеству клеток:

Определение единицы измерения: Одна единица активности ферментов определяется как количество ферментов потребляет 1 NMOL NADH в реакционной системе в минуту, каждый 104 бактерии или клетки.

GAPDH активность (Ячейка U / 104) = ΔA ÷(ε×d)× VRV × 109 ÷(Против × 500 ÷ vst)÷ t = 2,14 × ΔA

• Рассчитывается по объему культурной среды:

Определение единицы измерения: Одна единица активности ферментов определяется как количество ферментов потребляет 1 NMOL NADH в реакционной системе в минуту, каждая жидкость мл.

GAPDH активность (Ед/мл) = ΔA ÷(ε×d)× vrv × 109 ÷ vs ÷ t = 1072 × ΔA

 

е: коэффициент молярного вымирания NADH: 6.22× 103 л/моль/см; д: легкий путь кювета, 1 см;

Шнур: Общий объем реакции, 0.001 л;

ПРОТИВ: Объем образца в реакционной системе, 0.03 мл; VST: объем извлечения раствор добавлен, 1 мл; КПР: концентрация белка в образце, мг/мл;

Вт, масса образца, г;

Т: время реакции, 5 мин;

109: коэффициент преобразования, 1 моль = 109 НМОЛ;

500: Количество ячеек, 5 миллион.

Примечание:

1. Когда А1 меньше, чем 0.8 или ΔA больше, чем 0.7, перед определением рекомендуется разбавить пробу.
2. Пустая трубка - это пробирка для тестирования качества каждого компонента реагента. При нормальных условиях, изменение не превышает 01.

Экспериментальный пример:

1. Взять 0,1 г кроличьей почки, добавлять 1 мл раствора экстракта, гомогенизировать в ледяной ванне, Затем центрифуга на 8000 г, 4℃ для 20 мин, Возьмите супернатант и положите его на лед, Затем работайте с микро -кварцевой кюветой в соответствии с этапами определения, измерить и рассчитать: ΔAT = A1T-A2T = 0,815-0,158 = 0,657, ΔAB= А1В — A2B = 0,865-0,864 = 0,001, ΔA = ΔAt — ΔAB = 656.

GAPDH активность (Ед/г массы) = 1072 × ΔA ÷ w = 7032.32 Ед/г массы.

2. Взять 0,1 г клевера, добавлять 1 мл раствора экстракта, гомогенизировать его в ледяной ванне, затем центрифугируйте его в 8000 г и 4 ℃ для 20 мин, Возьмите супернатант и положите его на лед, Затем работайте в соответствии с этапами определения, Измерьте и рассчитайте его с помощью микро -кварцевой кюветы, ΔAt = a1t — A2T = 1,026-1,017 = 0,009, ΔAB = A1B — A2B = 0,865-0,864 = 0,001, ΔA = ΔAt — ΔAB = 008.

GAPDH активность (Ед/г массы) "=" 1072 × ΔA ÷ w = 85,76 мк/г массы.

сопутствующие товары：

BC0990/BC0995 Набор для анализа содержания хлорофилла растений

BC4330/BC4335