Solarbio Cell Contating Contating Kit 50t | 48С

Cell Iron Content Assay Kit

Примечание: Необходимо предсказать 2-3 Большие образцы разности перед формальным определением. Операционное оборудование: Спектрофотометр

Кот нет: BC5310

Размер:50Т/48С

Компоненты:

Экстракт раствора: Жидкость 30 мл×1. Хранить при температуре 2-8℃..

Реагент I: Жидкость 15 мл×1. Хранить при температуре 2-8℃.. Реагент II: Жидкость 35 мл×1. Хранить при температуре 2-8℃.. Реагент III: Жидкость 6 мл×1. Хранить при температуре 2-8℃..

Стандартный: Жидкость 1 мл×1. Хранить при температуре 2-8℃.. 1 μmol/mL of Fe3+ standard solution. Add 200μL distilled water to 200μL Fe3+ standard solution of 1 мкмоль/мл перед применением, and mix well to form the Fe3+ standard solution of 0.5 мкмоль/мл.

Описание продукта:

Iron is one of the essential trace elements in the human body, which is the main component of hemoglobin, myoglobin, cytochrome, and other enzyme systems. Iron can assist in the transport of oxygen and promote fat oxidation. Iron deficiency can easily cause anemia, and metabolic disorders, and affect the immune function of the body.

Fe3+ is reduced by hydroxylamine hydrochloride to Fe2+. Fe2+ could react with Phenanthroline Monohydrate to form a kind of orange compound under weak acid conditions, which has an absorption peak at 510 нм. According to the measure, absorbance at 520 nm can reflect cell iron concentration.

Требуемые реагенты и оборудование, которые не входят в комплект поставки:

Спектрофотометр, настольная центрифуга, регулируемая пипетка, 1стеклянная кювета мл, cell ultrasonic crusher, лед, дистиллированная вода.

Процедура:

1. Базовые приготовления:
2. Собирайте бактерии или клетки в центрифужную трубку, and discard the supernatant after centrifugation. According to the proportion of bacteria or cell number (104): Извлеките объем раствора (мл) из 500-1000-1 для извлечения. Предполагается, что 5 million bacteria or cells amount to 0.5mL of Extract solution. Split the bacteria or cell with ultrasonication (помещенный на лед, Ультразвуковая власть 200 Вт, Рабочее время 3с, интервал 7 секунд, повторить 30 раз). Центрифуга в 8000 G для 10 минуты в 4 ℃ для удаления нерастворимых материалов, and take the supernatant on ice before
3. Ultrasonication working time could be prolonged properly if samples are fungi, бактерии, or other microorganisms with cell

II. Определение процедура:

1. Предварительно разогрейте спектрофотометр для 30 минуты, отрегулировать длину волны, чтобы 510 нм, and set zero with distilled
2. Add reagents with the following:

Реагент (мкл)	Пробирка (В)	Пустая трубка (АБ)	Стандартная трубка (КАК)
Образец	100	—	—
Дистиллированная вода	—	100	—
Стандартное решение (0.5 мкмоль/мл)	—	—	100
Реагент I	200	200	200
Реагент Ⅱ	600	600	600
Реагент Ⅲ	100	100	100
Тщательно перемешать, and place at 25℃ for 10 минуты. Take 1mL of reaction solution in 1mL glass cuvette. Измерьте поглощение при 510 нм, recorded as AT, АБ, and AS. ΔAT = AT-AB, ΔAS=AS-AB. Blank tubes and standard tubes only need to be tested once or twice.

III. Cell Iron Content Расчеты

• Bacteria/cells number

Cell iron content (ng/104 cell) "="(Cs×ΔAT÷ΔAS)×VE×103×55.845÷500=27.922×ΔAT÷ΔAS

2) Белок концентрация

Cell iron content (ng/mg prot)

"="(Cs×ΔAT÷ΔAS)×VE×103×55.845÷(Cpr×VE)=27922.5×ΔAT÷ΔAS÷Cpr

Cs: Concentration of Fe3+ standard solution, 0.5мкмоль/мл;

ВЕ: Извлеките объем раствора, 0.5 мл;

103: Unit conversion factor, 1 μmol=103 nmol;

55.845: Relative molecular mass of Fe, 55.845ng/nmol; 500: Общее количество бактерий или клеток, 5 миллион;

КПР: Концентрация белка супернатанта, мг/мл.

Примечание:

1. If ΔAT＜01, it is recommended to increase the sample supernatant size before determination. If AT＞1, it is recommended to dilute the sample supernatant with distilled water before determination. And modify the calculation formula.
2. Sample supernatant protein concentration needs to be measured by yourself if cell iron content is calculated by protein

Экспериментальный пример:

1. Брать 5 миллион клеток, добавлять 0.5 мл раствора экстракта, and split with ultrasonication. Centrifuge and take the supernatant. Then operate according to the determination steps, calculate ΔAT=AT-AB= 0.171- 0.000=0.171, ΔAS=AS-AB=0.573-0.000=0.573. The result is calculated according to cell numbers: Cell iron content (ng/104 cells) =27.922×ΔAT÷ΔAS=8.333ng/104 cell

сопутствующие товары：

BC1730/BC1735 Serum Ferri Ion Content Assay Kit

BC2860/BC2865 Serum Total Iron Binding Capacity(TIBC) Набор для анализа

BC4350/BC4355 Tissue Iron Content Assay Kit