Набор для обнаружения нуклеиновых кислот сальмонеллы

предмет номер：AP2308004 Спецификация：24Т/48Т Хранилище：-20℃

Внедрение продукции：

Salmonella is a common foodborne pathogenic bacterium that can lead to salmonellosis, with eggs, домашняя птица, and meat being common sources of transmission. This test kit utilizes real-time fluorescent quantitative ПЦР technology to selectively amplify specific DNA segments of Salmonella in samples such as water, фекалии, and suspected contaminated food. The presence of Salmonella in the sample can be determined by the Ct value, or the contamination level of Salmonella in the sample can be determined through a standard curve.

Содержание продукта：

Компоненты реагента	AP2308004-01（24T）	AP2308004-02（48T）
Sal Premix Solution	11.5мкл/лунка× 8 лунок/стрип× 3 стрипа	11.5мкл/лунка× 8 лунок/стрип× 6 стрипов
Sal Reaction Solution	290мкл	575мкл
Sal Positive control	100мкл	100мкл
Отрицательный контроль	100мкл	100мкл

Условия хранения：

Хранить при -20℃, срок годности не менее 12 месяцы.

Экспериментальная эксплуатация：

1. Базовые приготовления (Зона подготовки проб)

1.1 Образцы требований:

— Мазки из полости рта и клоаки: Возьмите стерильный ватный тампон., вставьте его в горло или клоаку птицы, повернуть три раза, поместите его в центрифужную пробирку, отрезать открытую часть, плотно закройте крышку, и пометить это. Образцы, которые можно быстро протестировать, следует хранить при температуре 2–8°C в течение 24 часы, и образцы, которые невозможно протестировать быстро, следует хранить при температуре -20°C..

— Цельная кровь: Используйте ЭДТА в качестве антикоагулянта., избегайте гепаринового антикоагулянта, используйте свежую цельную кровь, или хранить при температуре 2–8°C не более 7 дни, или хранить при температуре -20°C не более 3 месяцы, избегать повторных циклов замораживания-оттаивания.

— Салфетка: Возьмите свежую мышечную или органную ткань в количестве не более 100 мг., используйте 200-500 мкл стерильной воды для приготовления гомогената ткани, и приступаем к последующей подготовке проб.

1.2 Базовые приготовления:

According to the «GB 4789.4-2016 National Food Safety Standard — Food Microbiological Examination — Salmonella Test» section 5.1 or other applicable standards, process the sample by pre-enrichment, and prepare the bacterial suspension for later use. Weigh 25g (мл) of the sample and place it in a sterile homogenization cup containing 225mL of Buffered Peptone Water (BPW). Homogenize at 8000rpm/min to 10000rpm/min for 1min to 2min or place it in a sterile homogenization bag containing 225mL of BPW and homogenize with a stomacher for 1min to 2min. If the sample is liquid, homogenization is not necessary; shake it well. If pH measurement is required, adjust the pH to 6.8±0.2 using 1mol/mL sterile NaOH or HCl.Perform aseptic operations to transfer the sample to a 500mL conical flask. If using a homogenization bag, direct cultivation can be performed. Incubate at 36°C±1°C for 8h to 18h. If the sample is a frozen product, thaw at temperatures below 45°C for no more than 15min or at 2°C to 5°C for no more than 18h.Refer to the Sanshi Biological «Total DNA/Набор для экстракции РНК Руководство» (Каталог: DP201) or other nucleic acid extraction kits/methods that meet relevant requirements for nucleic acid extraction from processed samples. Place the extracted nucleic acid samples in an icebox and perform the detection as soon as possible. Хранить при температуре 4°C не более 7 суток или при температуре -20°С не более 6 месяцы.

2. Подготовка реакционной системы (Зона реакции)

2.1 Достаньте каждый компонент комплекта., полностью оттаять при комнатной температуре, центрифуга для 10 секунды, и центрифугируйте жидкость внутри стенки пробирки и крышки пробирки до дна пробирки.. Приготовьте реакционный раствор в соответствии с количеством образца. (п+2, где n — количество выборок, рекомендуется установить 1 положительный контроль и 1 отрицательный контроль для каждого эксперимента). Особый метод приготовления: Брать (п+2) reaction tubes containing Sal premix solution, добавьте в каждую пробирку по 11,5 мкл реакционного раствора PiHV., используйте пипетку, чтобы тщательно перемешать, 23мкл на лунку, и хранить в холодильнике.

2.2 Затем последовательно добавьте 2 мкл отрицательного контроля., выделенная нуклеиновая кислота образца, and Sal positive control to the reaction solution. Закройте крышку тюбика, сделать запись, а общий объем каждой реакции составляет 25 мкл.. Тщательно перемешать, центрифуга для 10 секунды, и проводить эксперименты по амплификации на приборе ПЦР.

3. ПЦР-амплификация (Область амплификации и анализа продуктов)

Предварительная денатурация при 95°C для 2 минуты; Денатурация при 95°C для 10 секунды, отжиг и удлинение при 60°C для 35 секунды, 40 циклы. Соберите сигналы флуоресценции при 60 ° C.. Выберите канал флуоресценции FAM. (использовать инструменты количественной флуоресцентной ПЦР в реальном времени, такие как серия ABI, если необходимо, обратитесь к производителю или добавьте корректирующий краситель ROX; в противном случае, следовать обычным процедурам).

4. Интерпретация результата

4.1 Условия достоверности эксперимента:

Положительный контроль: Ct value in the FAM channel < 28 and the appearance of an «С»-фигурная кривая усиления. Отрицательный контроль: Нет значения Ct или значение Ct ≥ 40 и нет «С»-фигурная кривая усиления. The experiment results are valid under these conditions; в противном случае, повторите эксперимент. If repeated testing is still invalid, пожалуйста, свяжитесь с техническим персоналом производителя.

4.2 Интерпретация результатов проб:

Значение Ct ≤ 35 with an «С»-shaped amplification curve is considered positive for Salmonella nucleic acid. Значение Ct между 35 и 40 считается подозрительным, and retesting is recommended. This may be due to substandard nucleic acid extraction or the presence of strong inhibitory substances (such as residual disinfectants, антикоагулянты, и т. д.). It is suggested to reprocess the sample for nucleic acid extraction and amplification. Первый, exclude «ложно положительный» results caused by aerosol contamination, then re-extract and test the nucleic acid. Если, after excluding aerosol contamination, the FAM channel retest shows a Ct value < 35 с четкой кривой усиления, это считается положительным; в противном случае, это считается негативным.

Нет значения Ct или значение Ct ≥ 40 и нет «С»-shaped amplification curve is considered negative for Salmonella nucleic acid.

Меры предосторожности：

• Чтобы предотвратить загрязнение, эксперимент должен быть строго разделен, и физическая изоляция между перегородками предпочтительна во избежание перекрестного загрязнения из-за человеческого фактора.. Во время эксперимента надевайте лабораторные халаты и латексные перчатки., использовать инструменты самостоятельно в разных областях, при необходимости меняйте перчатки и лабораторные халаты. После ПЦР, не открывайте крышку сразу; откройте его после достаточного охлаждения, чтобы свести к минимуму аэрозольное загрязнение..
• Полностью разморозьте реагенты перед использованием., но избегайте повторных циклов замораживания-оттаивания. В комплект входят пробирки для ПЦР-реакций емкостью 0,2 мл.; если нужна замена, перенос после полного оттаивания. Строго следуйте инструкциям по приготовлению реагентов и добавлению проб.. Рабочие станции, центрифуги, пипетки, и другие инструменты следует регулярно дезинфицировать хлорсодержащими дезинфицирующими средствами., алкоголь, средства обеззараживания нуклеиновых кислот, или УФ-свет.
• Отрицательный результат не обязательно означает, что хозяин не заражен вирусом.. Плохое качество образца, низкая вирусная нагрузка, или наличие сильных ингибирующих веществ (например, алкоголь, дезинфицирующие средства, антикоагулянты, и т. д.) может привести к неудачному извлечению нуклеиновой кислоты (обнаружение) и «отрицательный» результат. Следуйте критериям интерпретации результатов, и когда есть подозрительные результаты, сначала исключить аэрозольное загрязнение. Если есть другие вопросы, обратитесь к техническому персоналу производителя.
• Этот продукт предназначен только для одноразового использования. Компоненты реагента чувствительны к естественному свету.; избегать воздействия света во время упаковки и хранения. После упаковки, не замораживать-оттаивать повторно. Только для научных исследований; не для клинической диагностики или других целей.