Набор для экстракции ДНК в ткани, встроенный в парафин

1. Компоненты набора реагентов

Технические характеристики	50Т	100Т
Кот. Нет.	SN0251	SN0252
Колонки для экстракции ДНК (набор)	50 (набор)	100 (набор)
Реагент буфер IV	20 мл	2 × 20 мл
Реагентный буфер C	30 мл	2 × 30 мл
Реагент буфер ff	60 мл	2 × 60 мл
Промывной буфер 1	15 мл	2 × 15 мл
Элюирующий буфер	20 мл	20 мл
Протеиназа К	1мл	2х1мл
РНКазаА	1мл	2х1мл
Инструкция по эксплуатации	1	1

2. Хранилище

Этот набор реагентов следует хранить при комнатной температуре. (15-25℃) и в сухих условиях, со сроком годности 12 месяцы. Колонки для экстракционной очистки ДНК можно хранить в течение 1 год в прохладной и сухой среде. протеиназа К и РНКаза А содержат консерванты, возможность транспортировки при комнатной температуре, но для длительного хранения, их следует хранить при -20 ℃.

3. Инструкции по использованию набора реагентов

3.1 Этот набор реагентов предназначен для исследований в области молекулярной биологии и не должен использоваться для диагностики или лечения заболеваний..

3.2 Некоторые компоненты набора реагентов содержат раздражители.. Рекомендуются защитные меры, такие как ношение защитной одежды и очков..

3.3 Во время использования этого набора реагентов, высокоскоростная центрифуга, водяная баня (металлическая ванна), вихревой смеситель, безводный этанол, стерильная деионизированная вода, и EP-трубки должны быть подготовлены пользователем..

4. Знакомство с набором реагентов

 

Парафиновая ткань очистка ДНК Комплект обеспечивает быстрый и эффективный раствор для очистки ДНК для образцов в парафиновых срезах. Ткани собираются после растворения парафина с использованием выделенного раствора DeWaxing, и ДНК образца получается посредством последующих процессов экстракции.

 

Этот комплект может извлекать ДНК образца из парафиновых срезов внутри 30 минуты, и весь процесс очистки не требует использования токсичных реагентов типа фенол-хлороформа.. Выделенная ДНК может быть непосредственно использована для ПЦР, Саузерн-блоттинг, и другие приложения.

5. Экспериментальные принципы и процедуры

6. Процесс экстракции

Прежде чем начать эксперимент:

А. Реагент буфер ff:Этот буфер должен храниться в долгосрочной перспективе в среде между 2 ° C и 8 ° C.

Б. Реагент Буферы IV и C может выпадать в осадок в условиях низких температур. Рекомендуется нагревать при температуре 65°C. 5 минуты. После растворения осадка, Решение можно использовать обычно.

С. СтиратьБуфер 1 Должен иметь указанное количество безводного этанола, добавленного перед использованием, как указано на этикетке флакона с реагентом.. Проверьте этикетку с меткой, чтобы указать добавление безводного этанола.

Д. Элюирующий буфер представляет собой 0.1х ТЕ решение с минимальным количеством ЭДТА. Если ЭДТА повлияет на последующие эксперименты, Желательно заменить буфер элюции стерильной деионизированной водой.

 

1. Образец обработки:

Выбирать 5-10 парафиновые секции (1толщина мм-3 мм), Используйте ножницы, чтобы удалить лишний воск, и разрезать встроенный образец ткани на мелкие кусочки. Поместите их в 1,5 мл центрифужную трубку, добавлять 800мкл Реагент буфер ff, инкубировать при 75 ° C для 5 минут до тех пор, пока весь парафин не распущен. Центрифуга при 12000 об / мин для 5 минуты, выбросить супернатант.

2. Добавлять 400мкл Реагент Буфер IV, 20мкл протеиназы К (10 мг/мл), и 10 мкл RNASEA (10 мг/мл) к осаждению с предыдущего шага. Дайджест при 65 ° C., помешивая каждый 6-7 раз до завершения пищеварения.
3. Добавьте равный объем Реагентный буфер Cи равный объем безводного этанола, Тщательно перемешать с помощью пипетки.

(Например: Если вы добавите 400 мкл буфера реагента IV, Приблизительно добавление 430 мкл реагента буфер C и 430 мкл безводного этанола. Некоторые осадки могут возникнуть после добавления буфера реагента C, но это не влияет на последующие эксперименты.)

4. Добавьте полученную жидкость в колонку для экстракционной очистки ДНК. (или картридж) (примерно 650-700 мкл каждый раз), пусть он стоит при комнатной температуре для 2 минуты, центрифуга при более чем 8000 об / мин для 1 минута. Выбросьте собранные отходы и повторно вставьте пробирку для сбора в колонну очистки для следующего шага..
5. Повторить шаг 4, добавление оставшейся жидкости в колонку для экстракционной очистки ДНК (или картридж), центрифуга при более чем 8000 об / мин для 1 минута, Отбросьте отходы и трубку для сбора.
6. Поместите колонку для очистки экстракции ДНК (или картридж) в коллекторную трубку, добавлять 300мкл СтиратьБуфер 1, центрифуга при более чем 8000 об / мин для 1 минута. Отбросьте отходы и повторно вставьте колонку для очистки в трубку для следующего шага.

(Примечание: Подтвердить, что безводной этанол был добавлен в Стирать Буфер 1.)

7. Добавлять 500мкл СтиратьБуфер 1 в колонку очистки экстракции ДНК (или картридж), центрифуга при 14 000 оборотов в минуту (20000×г) для 2 минуты. При необходимости продлить время центрифугирования для сушильной мембраны.
8. Поместите колонку для очистки экстракции ДНК (или картридж) в новой центрифужной трубе, открыть крышку, инкубировать при 65 ° С для 2 минуты. При необходимости продлить этот шаг, чтобы испарить этанол, чтобы предотвратить воздействие остаточного этанола вниз по течению экспериментов.
9. Приостановить добавление 50-100мкл элюирующего буфера к мембране, центрифуга при 12 000 об / мин для 2 минуты.

(Примечание: 1. Использование буфера элюирования 50 мкл для элюирования ДНК может увеличить концентрацию ДНК, но уменьшает общий выход ДНК. 2. Элюированную ДНК можно повторно нанести на колонку для экстракционной очистки ДНК., центрифугированы при 12000 об / мин для 2 Протокол снова, чтобы увеличить выход ДНК.)