DNA 추출은 많은 분자 생물학 실험에서 중요한 첫 단계입니다.. 의료 진단에서 법의학에 이르기까지, 고품질 DNA를 얻는 것은 성공적인 다운 스트림 분석에 중요합니다. 그러나 전통적인 DNA 추출 방법은 지루할 수 있습니다, 시간이 많이 걸립니다, 독성 화학 물질의 사용이 필요합니다.
이것은 자기 구슬의 마법이 들어오는 곳입니다.! 자기 비드를 사용한 DNA 추출 방법에는 두 가지가 있습니다., 하나는 수동 추출입니다, 그리고 또 다른 방법은 a를 사용하는 것입니다 핵산 추출 기계.
혁명과 관련하여 이러한 도구와 초강력에 대해 모두 배우기 위해 계속 읽으십시오. DNA 정제.
자기 구슬은 무엇입니까??
자기 구슬, 자기 입자라고도합니다, 자철석과 같은 산화철로 만든 작은 구형 입자입니다.. 그들의 가장 중요한 기능? 그들은 자기장의 존재하에 자기가됩니다.. 이를 통해 자석을 사용하여 쉽게 조작하고 분리 할 수 있습니다..
자기 구슬의 몇 가지 주요 장점:
- 초라마하기 – 이것은 자기장에서 강력하게 자화하지만 필드가 제거되면 빨리 자화를 잃는다는 것을 의미합니다.. 따라서 덩어리 나 집계가 없습니다.
- 작은 크기 –일반적으로 나노 미터에서 마이크로 미터 사이, 결합 DNA를위한 높은 표면적을지지한다.
- 쉬운 분리 – 자석을 적용하면 원심 분리없이 빠른 분리를 용이하게합니다.
- 자동화 친화적입니다 – 자기 조작은 자동화에 적합합니다.
- 유연성 – 많은 표면 변형은 다른 생체 분자에 대한 특이성을 허용합니다.
이러한 특성은 자기 구슬을 실험실에서 DNA의 분리 및 정제를위한 다목적 도구로 만듭니다.. 그러나 그들은 어떻게 그들의 마술을 어떻게 일합니까?? 계속 읽으십시오!
자기 구슬은 DNA를 어떻게 정화합니까??
자기 비드는 DNA가 결합 할 수있는 고체 표면을 제공합니다., 다른 샘플 구성 요소와 분리 할 수 있습니다. 이것은 세 가지 주요 단계에서 발생합니다:
제본
이 중요한 첫 단계는 비드 표면에 DNA 흡착을 촉진하는 조건 하에서 DNA 샘플과 자기 비드를 배양하는 것과 관련이 있습니다.. 예를 들어, 수소 결합을 방해하는 채 초 트로픽 염.
세탁
일단 DNA가 구슬에 고정되면, 그들은 자석을 사용하여 분리 될 수 있습니다. 오염 물질과 불순물, 자기 구슬에 부착 된 깨끗한 DNA 뒤에 남겨 둡니다.
용출
마지막으로, 정제 된 DNA는 용리 단계 동안 구슬에서 방출됩니다.. 이것은 종종 낮은 소금 완충제를 사용하여 DNA가 비드 표면에서 분리됩니다.. 자기 구슬이 사라집니다, 순수하게 떠납니다, 다운 스트림 분석을위한 용액에서 농축 DNA.
결과? 빠른, 유기 용매 또는 에탄올 침전이없는 간단한 DNA 추출!
DNA 정제 자기 비드의 가장 일반적인 유형은 무엇입니까??
특성이 다른 다양한 자기 구슬이 상업적으로 이용 가능합니다.. 가장 인기있는 옵션을 살펴 보겠습니다:
실리카 코팅 자기 구슬
실리카 표면은 과아니 디늄 염화물 또는 요오드화 나트륨과 같은 채 초성 염의 존재하에 DNA에 쉽게 결합합니다.. 세척은 오염 물질을 제거합니다, DNA는 물 또는 낮은 소금 완충제를 사용하여 쉽게 용리됩니다.. 실리카 비드는 저렴하고 높은 DNA 회복을 제공합니다.
스트렙 타비 딘 코팅 자기 구슬
이들은 단백질과 같은 비 오티 닐화 분자에 결합한다, DNA, 및 항체. 그들은 종종 표적 DNA 캡처를 위해 비 오티 닐화 된 올리고 뉴클레오티드를 고정시키는 데 사용됩니다.. 스트렙 타비 딘 코팅 비드는 낮은 비특이적 결합 및 빠른 결합 동역학을 갖는다.
카르 복실 코팅 자기 구슬
음으로 하전 된 카르 복실 표면은 단백질과 같은 생체 분자에서 양으로 하전 된 그룹과 강력하게 상호 작용합니다.. 이것은 DNA와 같은 아미노 그룹 함유 분자의 선택적 농축을 허용합니다.. 카르 복실 비드는 효소 또는 항체의 공유 커플 링에 유용합니다..
아민 코팅 된 자기 구슬
이들은 종종 DNA 또는 올리고 뉴클레오티드의 공유 커플 링에 사용됩니다., 사용자 정의 수정을위한 표면 제공. 아민 비드는 비특이적 결합이 낮습니다.
단백질 A/G 자기 구슬
이들은 재조합 단백질 A 또는 단백질 G로 코팅됩니다., 이는 항체의 FC 영역에 결합한다. 비드는 면역 침전 적용을위한 항체를 선택적으로 고정시키고 정제 할 수 있습니다..
이 다양한 마그네틱 비드 범위는 거의 모든 샘플 유형에서 DNA 추출을위한 정제 프로토콜을 설계 할 수있는 유연성을 제공합니다.!
DNA 정제 자기 비드의 일부 적용은 무엇입니까??
자기 구슬이 간소화됩니다 DNA 정제 많은 분자 생물학 기술에서:
- DNA 추출 – 피에서, 세포 배양, 조직, 식물, 토양 – 당신은 그것을 지명합니다!
- 플라스미드 제조 – 고품질을 빠르게 분리하십시오 플라스미드 DNA 박테리아에서.
- PCR 대청소 – 프라이머를 제거합니다, 뉴클레오티드, 및 PCR 제품의 효소.
- 크기 선택 – 차세대 시퀀싱을 위해 샘플을 준비하는 것과 같은 DNA 단편을 분별합니다.
- 시퀀싱을위한 샘플 준비 – 정리 Sanger 또는 NGS 시퀀싱 반응.
- DNA 강화 – 표적 DNA 서열을 선택적으로 정제한다.
- 면역 침전 – DNA- 단백질 복합체를 분리하십시오.
- 세포 분리– 항체-코팅 된 자기 비드는 순환 종양 세포와 같은 특정 세포 집단을 포획 할 수있다..
DNA 추출에 자기 구슬을 사용하면 어떤 이점이 있습니까??
전통적인 DNA 추출은 지루한 강수량 또는 기둥 분리 단계를 포함합니다.. 자기 구슬은 몇 가지 장점을 제공합니다:
간단
자기 구슬을 시작하는 것은 바람입니다. 그들의 사용은 여러 원심 분리기 또는 진공 단계를 제거합니다, 긴 프로토콜, 위험한 유기 용매. 샘플을 추가하십시오, 비드를 배양합니다, 자석, 씻다, 그리고 용리 – 완료!
속도
DNA 결합은 빠르게 발생합니다. 자기 분리는 원심 분리 또는 여과에 비해 분리 속도를 크게 높입니다.. 정제는 거의만큼 완료 될 수 있습니다 10-15 분.
높은 회복
DNA 회복은 지속적으로 높습니다 (일반적으로 60-90%) 최적화 된 바인딩 버퍼 및 세척 단계 덕분에.
확장성
자기 분리 기술은 개별 준비부터 96- 웰 플레이트와 같은 고 처리량 자동 형식에 이르기까지 쉽게 확장 가능합니다..
저렴한 비용
자기 입자는 스핀 컬럼 또는 여과 시스템에 대한 저렴한 대안입니다.. 자동화 친화적 인 가공은 인건비를 줄입니다.
DNA 무결성
온화한 정제는 DNA 크기와 안정성을 보존합니다. 기계적 전단력의 부재는 긴 DNA 단편의 분해를 방지합니다..
다재
다양한 비드 유형 및 표면 화학은 다양한 샘플 유형 및 정제 요구를 수용합니다..
오토메이션
자기 조작은 액체 처리 로봇 및 자기 분리기를 사용하여 자동화에 완벽하게 적합합니다.. 이를 통해 고조파 고 처리량 DNA 추출을 허용합니다.
이러한 장점으로 인해 자기 구슬이 가장 먼저 선택된 선택이됩니다., 많은 실험실 및 응용 분야의 고품질 DNA 추출!
자기 비드 DNA 추출 프로토콜 개요
이제 우리는 자기 비드 DNA 추출의 기본 사항을 다루었습니다., 일반 프로토콜 단계를 간단히 살펴 보겠습니다:
- 세포 용해 –물리를 사용하여 세포를 방해합니다, 화학적인, 또는 효소 용해성. 이것은 DNA를 용액으로 방출합니다.
- 제본 – 자기 비드와 결합 완충액을 추가하십시오. DNA가 자기 비드에 흡착하도록 허용하도록 배양합니다..
- 자기 분리 – 자석을 사용하여 비드 바운드 DNA를 분리하고 상청액을 제거하십시오..
- 씻다 – DNA가 여전히 구슬에 고정화되어 있습니다, 알코올 세척 완충제로 오염 물질과 불순물을 씻어 내십시오..
- 용출 –낮은 소금 용리 완충액의 재현 펜드 비드를 용액으로 정제 된 DNA를 방출합니다..
- 자기 분리 – 다시 자화하십시오, 순수한 DNA를 함유 한 용기를 신선한 튜브로 전달합니다..
그리고 그게 다야! DNA는 이제 PCR과 같은 다운 스트림 애플리케이션에 대한 준비가되었습니다., 시퀀싱, 유전자형, 그리고 더. 이 기본 프로토콜을 다른 샘플 또는 처리량 요구에 적응시키는 것은 약간의 최적화로 간단합니다..
