Solarbio 총 항산화 능력 (T-AOC) 분석 키트

총 항산화 능력 (T-AOC) 분석 키트

메모: 테스트 전에 예측을 위해 2~3개의 서로 다른 샘플을 채취합니다..

운영장비: 분광 광도계

고양이 번호: BC1310

크기：50T/48S

구성요소:

용액 추출: 액체 50 밀리리터×1. 4℃에서 보관, 사용하기 전에 precool.

시약 I: 액체 35 밀리리터×1. 4℃에서 보관.

시약 II: 액체 20 밀리리터×1. 그림자에서 4 shadow에 저장.

시약 III: 액체 5 밀리리터×1. 그림자에서 4 shadow에 저장.

기준: 가루×1, 10 FESO4 · 7H2O의 Mg. 작업 솔루션: 추가하다 0.9 증류수의 ml 및 20μl의 농축 황산 (H2SO4) 형태 40 µmol/ml FESO4 표준 솔루션. 용액 혼합물 (솔루션이 사용되는시기를 준비하십시오): 시약 I : 시약 II: 시약 III = 7:1:1, 사용하기 전에 37 ℃에서 배양하십시오.

제품 설명:

이 키트는 샘플에서 산화 방지제 및 항산화 효소의 총 항산화 수준을 감지하는 데 사용됩니다.. 그것은 주로 생물학적 연구에 사용됩니다, 항산화 용액의 총 항산화 용량을 감지하기위한 의료 및 제약 연구.

산성 환경에서, Fe3+ -tptz는 파란색 Fe2+ -tptz로 감소됩니다. 색 반응은 총 항산화 용량을 반영합니다.

필요하지만 제공되지 않는 시약 및 장비:

분광 광도계, 항온수욕, 저온 원심분리기, 1 ML 유리 큐벳 및 증류수.

절차:

나. 샘플 준비:

1. 혈청, 혈장, 타액, 또는 소변 샘플

혈장 (헤파린 또는 시트 레이트 나트륨으로 항 응고, EDTA를 사용하지 마십시오), 원심분리기 5000 RPM/분 10 분, 상청액을 테스트하십시오. 혈청을 가져 가십시오, 직접 결정을위한 타액 또는 소변 샘플. 또한, -80 ℃에서 저장하고 내부를 감지 할 수 있습니다 30 날.

2. 세포 또는 조직 견본

가져가다 1-2 백만 세포 또는 0.1 g의 조직, 추가하다 1.0 mL의 추출 용액. 균질 키 또는 초음파를 사용하여 세포를 완전히 분해하고 항산화 제를 방출합니다., 원심분리기 10000 r/min 및 4 4 5 분, 상청액을 테스트하십시오. 필요한 경우 단백질의 농도를 측정하십시오.

II. 결정 절차:

1. 묽게 한 40 μmol/ml FESO4 표준 솔루션 0.1, 0.05, 0.025, 0.0125, 0.00625, 0.003125 μmol/mL, 가져가다 500 표준 용액의 μl (블랭크 컨트롤을 위해 증류수), 추가 500 시약 II의 μL. 철저히 섞으십시오 10 분, 흡광도를 감지하십시오 593 nm, ΔA = AS-AB를 계산하십시오. (처럼: 표준 솔루션 튜브, AB: 빈 제어 튜브.) Fe2+의 최종 농도는입니다 0.05、0.025、0.0125、0.00625、

0.003125、0.00156 μmol/mL.

2. 분광 광도계를 예열하십시오 30 분, 파장을 조정하다 593 nm, 증류수로 0으로 설정
3. 다음 목록으로 시약을 추가하세요.:

시약 이름	빈 튜브 (AB)	시험관 (에)
용액 혼합물 (μL)	900	900
견본 (μL)		30
이중 증류수 (μL)	120	90
철저히 섞어 반응합니다 10 분, 증류수로 0을 설정하다, 흡광도를 감지하십시오 593 nm. ΔA '= AT를 계산하십시오 – AB. (메모: 빈 튜브는 모든 실험에서 한두 번 테스트해야합니다.)

III. 계산:

1. 표준곡선 생성

Fe2+ ​​최종 농도를 x 축으로 취하십시오, a a 축으로 a, 표준 곡선을 만듭니다, 선형 회귀 방정식 y = kx+ b를 가져옵니다, ΔA를 가져 가십시오’ x를 얻기위한 방정식으로 (μmol/mL).

2. 단위 정의: 샘플 항산화 용량은 동일한 흡광도 변화에 필요한 표준 액체 이온 농도로 표시됩니다.(ΔA).

ㅏ. 단백질 집중:

총 항산화 능력 (μmol/mg prot) = x × vrv ÷ (vs × cpr) = 34 × x ÷ CPR

비. 견본 무게

총 항산화 능력 (μmol/g 중량) = x × vrv ÷ (vs ÷ vsv × w) = 34 × x ÷ w

씨. 셀 양

총 항산화 능력 (μmol/104cell) = x × vrv ÷ (vs × vsv ÷ n) = 34 × x ÷ n

디. 해결책 용량

총 항산화 능력 (μmol/mL) = x × vrv ÷ vs = 34 × x

로프: 총 반응 부피, 1.02 밀리리터; 대: 샘플량, 0.03 밀리리터;

VSV: 추출량, 1 밀리리터; 여: 샘플 중량, g;

심폐소생술: 샘플 단백질 농도, mg/mL;

N: 셀 양, 기반 단위 104 (만).

메모:

1. 시약 II는 인체에 ​​자극을받습니다, 실험실 옷과 라텍스를 착용하십시오
2. 샘플은 산성 상태에서 파란색으로 나타나지 않아야합니다., 또는 샘플 결과를 간섭합니다
3. 트윈과 같은 세제, 트리톤, NP-40 및 DTT와 같은 환원제, Mercapto 에탄올을 첨가해서는 안됩니다
4. 샘플에 의해 결정된 흡광도 값이 표준 곡선 범위를 초과하는 경우, 샘플은 전에 제대로 희석하거나 농축해야합니다
5. 키트는 AT2-8 ℃를 보관해야합니다.

예:

1. 1ml 추출 용액에 0.1g Shamrock을 추가하고 ICE를 철저히 갈아냅니다., 상청액을 가져 가십시오, 결정 절차를 따라 운영하십시오, 계산할 96- 웰 플랫 버전 플레이트: ΔA = a(티)-ㅏ(비)= 0.909-0.148 = 0.761, 표준 곡선: y = 21.056x-0.0087, x = 0.037을 계산하십시오, 총 항산화 용량을 계산하기 위해 샘플 질량에 따라 (μmol/g 질량) = 34 × x ÷ W = 34 × 0.037 ÷ 0.1 = 12.85 μmol/g 질량.

참고자료：

[1] Pellegrini n, Serafini m, 살바토레 s, 외. 향신료의 총 항산화 용량, 말린 과일, 견과류,

펄스, 시리얼, 그리고 세 가지 다른 시험 관내 분석법으로 평가 된 이탈리아에서 소비 된 과자[제이]. 분자 영양 & 식품 연구, 2006, 50(11): 1030-1038.

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