Solarbio 슈퍼옥사이드 디스뮤타제 (잔디) 활동 분석 키트

과산화물 제거효소 (잔디) 활동 분석 키트

메모: 예측하는 것이 필요하다 2-3 공식적인 결정 이전에 큰 차이가 있는 표본.

운영장비: 분광 광도계

고양이 번호: BC0170

크기: 50T/24S

구성요소:

추출시약: 60 밀리리터×1. 4℃에서 보관.

시약Ⅰ: 15 밀리리터×1. 4℃에서 보관.

시약 Ⅱ: 160 μL×1. 4℃에서 보관. 원심분리 후 피펫팅하여 혼합.

시약 Ⅲ: 11 밀리리터×1. 4℃에서 보관.

시약 Ⅴ: 가루×1. 4℃에서 보관.

시약 V: 2 밀리리터×1. 4℃에서 보관. 사용 전 시약V에 시약IV를 첨가하고 오실레이터로 흔들어 잘 섞이도록 한다.. 보관할 수 있어요 3 개월.

제품 설명:

과산화물 제거효소 (잔디, EC 1.15.1.1) 동물에게서 널리 발견된다, 식물, 미생물과 배양세포. H2O2와 O2를 형성하기 위해 과산화물 음이온을 촉매합니다.. SOD는 과산화물 음이온 소거효소 뿐만 아니라, 뿐만 아니라 주요 H2O2 생산 효소이기도 합니다., 생물학적 항산화 시스템에서 중요한 역할을 하는.

과산화물 음이온 (O2-) 크산틴과 크산틴 산화효소 반응 시스템에 의해 생성됩니다.. O2- 블루 테트라졸을 감소시켜 블루 포르마잔을 생성할 수 있습니다., 흡광도를 가지고 있는 것 560 nm. SOD는 O2를 제거할 수 있습니다.- 메티오닌의 형성을 억제합니다.. 반응 용액의 파란색이 진해질수록, SOD의 활성이 낮을수록. 반응 용액의 푸른색이 밝을수록, SOD의 활동이 높을수록.

필요하지만 제공되지 않는 시약 및 장비:

분광 광도계, 테이블 원심분리기, 이송 피펫, 1 mL 유리 큐벳, 모르타르/균질화기, 얼음과 증류수.

작업 단계:

나. 샘플 준비:

1. 박테리아 또는 세포: 박테리아 또는 세포를 원심분리 튜브에 수집, 원심분리 후 상청액 폐기. 박테리아나 세포의 비율에 따라 (104 세포): 추출액량 (밀리리터) ~의 1:5-10 추출하다. 다음과 같이 제안됩니다. 5 1mL의 추출 시약으로 수백만 개의 박테리아 또는 세포 양. 초음파 처리로 박테리아 또는 세포 분리 (얼음 위에 놓음, 초음파 출력 200W 또는 20%, 근무 시간 3초, 간격 10초, 반복하다 30 타임스). 원심분리기 8000 ×g 10 4℃에서 1분 동안 불용성 물질 제거, 시험하기 전에 얼음에 상등액을 채취하십시오..
2. 조직: 조직 무게의 비율에 따라 (g): 추출액량 (밀리리터) ~의 1:5-10 추출하다. 다음과 같이 제안됩니다. 0.1 g의 티슈 1 mL의 추출 시약 및 얼음 위에서 완전히 균질화됨.
3. 원심분리기, 8000 ×g 10 4℃에서 1분 동안 불용성 물질 제거, 시험하기 전에 얼음에 상등액을 채취하십시오..
4. 혈청 (혈장) 견본: 샘플을 직접 감지.

II. 결정 절차:

1. 분광 광도계를 예열하십시오. 30 분, 파장을 조정하다 560 nm, 증류수로 0으로 설정.
2. 시약Ⅰ 유지, 시약 Ⅲ, 수조에 시약 V를 1회 이상 담가 두십시오. 5 37℃에서 분(포유 동물) 또는

25℃ (다른 종).

3. 다음 목록으로 시약을 추가하세요.:

시약 (μL)	시험관 (티)	컨트롤 튜브 (씨)	빈 튜브 (지하 1층)	빈 튜브 (지하 2층)
견본	90	90	–	–
시약Ⅰ	240	240	240	240
시약 Ⅱ	6	–	6	–
시약 Ⅲ	180	180	180	180
증류수	480	486	570	576
시약 V	30	30	30	30

완전히 혼합하고 혼합물을 실온에서 1시간 동안 배양합니다. 30 분. 혼합물을 1mL 유리 큐벳에 추가합니다., 각 튜브의 흡광도 값을 감지합니다. 560 nm. ΔAT=AT-AC，ΔAB=AB1-AB2. 바닥에 강수량이 있는 경우, 잘 섞은 후 계량하세요.

III. 계산:

1. 억제율:

억제율=[ΔAB -ΔAT]¼ΔAB× 100%

억제율은 30%~70%이어야 합니다. (에 가까운 값 50% 좀 더 정확한 결과가 나오겠죠). 계산된 억제율이 다음보다 작은 경우 30% 또는 그 이상 70%, 일반적으로 시료 첨가량을 조정하고 다시 결정해야 합니다.. 억제율이 너무 높은 경우, 샘플을 적절하게 희석해야 합니다.. 억제율이 너무 낮은 경우, 샘플은 더 높은 농도로 다시 준비되어야 합니다.

2. 단위 정의: 효소 활성의 1단위는 다음의 억제를 촉매하는 효소의 양으로 정의됩니다. 50% 위 잔틴의 반응계에서
3. 계산

ㅏ. 혈청 (혈장)견본

잔디 (U/mL)=[P ¼(1-피)×Vrv]¶Vs×F=11.4×P¶(1-피)×F

비. 조직, 박테리아 또는 배양된 세포

ㅏ) 단백질 농도:

잔디 (U/mL prot) = [P ¼(1-피)×Vrv]¶(VS×심폐소생술)×F=11.4×P²(1-피)¶Cpr×F

비) 샘플 중량

잔디 (U/g 중량) = [P ¼(1-피)×Vrv]¶(W×Vs²sv)×F=11.4×P²(1-피)¼W×F

씨) 박테리아 또는 세포의 양

잔디 (U/104 셀)=[P ¼(1-피)×Vrv]¶(500×Vs│Vsv)×F=0.0228×P²(1-피)×F

로프: 총 반응량, 1.026 밀리리터; 대: 샘플량, 0.09 밀리리터;

VSV: 추출량, 1 밀리리터;

심폐소생술: 샘플 단백질 농도, mg/mL; 여: 샘플 중량, g;

500: 박테리아와 세포의 총 수, 5 백만. 피: 억제율, %;

에프: 샘플 희석 배수.

메모:

1. Sample과 Reagent Ⅱ는 다음과 같은 경우 얼음 위에 놓아야 합니다.
2. 샘플이 많을 때, 작동하는 솔루션 (시약 I 포함, II 및 III) 표에 따라 구성 가능. 시약 V를 추가해야 합니다.
3. 반응이 완료된 후, 강수량이 형성될 수 있습니다, 그 이후에 결정될 수 있는 것

실험예:

1. 1 g의 Echinochloa crusgalli가 추가됩니다. 1 균질화를 위한 추출 시약 mL. 상층액을 취한 후, 결정 단계에 따라 작업이 수행됩니다.. 결과는 ΔAT = AT로 나타났다. – AC = 0.335-0.012 = 0.323, ΔAB = AB1 – AB2 = 0.957-0.003 = 0.954. 억제율 = (ΔAB- ΔAT)¼ ΔAB × 100% = 72%, 효소 활성은 샘플 질량에 따라 계산됩니다..

SOD 활동 (U/g 질량) = 11.4 × 억제율 (1-억제율) × 승 = 293.14 U/g 질량.

2. 1 mL의 추출 시약을 첨가합니다. 0.1 균질화를 위한 쥐 비장 g. 상층액을 취한 후, 결정 단계에 따라 작업이 수행됩니다.. 결과는 ΔAT= AT인 것으로 나타났다.- AC = 0.563-0.213 = 0.35, ΔAB= AB1- AB2= 0.957-0.003 = 0.954, 억제율 = (ΔAB -ΔAT)¼ ΔAB×100% =31%

SOD 활동 (U/g 질량) = 11.4 × 억제율 (1-억제율) ×W = 196.71 U/g 질량.

3. 10 백만 개의 세포를 추출하고 원심분리합니다. 1 mL의 추출 시약, 그런 다음 결정 단계에 따라 작업이 수행됩니다.. 결과는 다음과 같습니다: ΔAT =AT – AC=614-0.015 = 0.599, ΔAB= AB1- AB2= 0.944-0.005 = 0.939, 억제율 = (ΔAB- ΔAT) ×ΔAB× 100% = 36.21%

SOD 활동 (U/104 셀) = 억제율 ¶ (1-억제율)× VTS]¶(1000× VS ¼ VTS) = 0.0065 U/104 셀.

참고자료:

• 스피츠 DR, 오벌리 패 승. 포유류 조직 균질액의 슈퍼옥사이드 디스뮤타제 활성 분석[제이]. 분석 생화학, 1989,179(1):8-18.
• Masayasu M, 히로시 Y. 임상용 슈퍼옥사이드 디스뮤타제 활성의 단순화된 분석 방법[제이]. 클리니카 치미카 액타, 1979,92(3):337-342.

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