메모: 테스트 전에 예측을 위해 2~3개의 서로 다른 샘플을 채취합니다..
운영장비: 분광 광도계
고양이 번호: BC0440
크기:50T/48S
구성요소:
제품 설명:
- 리벌 로스 1,5- 비스 포스페이트 카르 복실 라제/옥 시게나 제 (루비스코) 식물 광합성의 핵심 효소입니다.
- 그것은 이산화탄소 고정을 제어하고 캘빈 사이클 및 광도 주기로의 탄소 흐름을 조절합니다..
- Rubisco의 활동은 광합성 속도에 직접 영향을 미칩니다.
- Rubisco는 리볼 로스 -1,5- 디포 스페이트의 조합을 촉진합니다 (루프) 및 이산화탄소를 생성하여 3- 포스 포 글리세 레이트를 생성한다 (PGA).
- PGA는 글리 세르 알데히드 -3- 포스페이트로 더 전환된다, NAD+를 형성하기 위해 NADH 산화를 동반 하였다.
- NADH는 빛을 흡수합니다 340 nm, NAD+는 그렇지 않습니다.
- 이 키트에는, Rubisco 활동은 NADH 흡광도의 감소를 측정하여 결정됩니다. 340 nm.
필요하지만 제공되지 않는 시약 및 장비:
자외선 분광 광도계, 책상 원심분리기, 조절 가능한 피펫, 욕조, 1 mL 석영 큐벳, 모르타르/균질화기, 얼음, 증류수.
절차:
샘플 준비:
-
- 박테리아 또는 세포:
- 원심 분리 튜브에 박테리아 또는 세포를 수집하여 원심 분리하여 상청액을 폐기합니다..
- 추가하다 1 mL의 추출 용액 5 백만 박테리아 또는 세포.
- 초음파를 사용하십시오 (얼음에, 20% 힘, 3 초, 10 몇 초, 반복 30 타임스) 박테리아 또는 세포를 마련합니다.
- 원심분리기 10000 ×g 10 불용성 재료를 제거하고 테스트를 위해 얼음에 상청액을 수집하기 위해 4 ° C에서 분.
- 조직:
- 추가하다 1 mL의 추출 용액 0.1 g의 조직 (바람직하게는 신선한 식물 샘플) 그리고 얼음에 균질화.
- 원심분리기 10000 ×g 10 불용성 재료를 제거하기 위해 4 ℃에서 분을, 테스트를 위해 얼음에 상청액을 수집하십시오.
- 박테리아 또는 세포:
결정 절차:
-
-
-
- UV 분광 광도계를 예열하십시오 30 분은 파장을 조정합니다 340 nm. 증류수가있는 악기의 제로.
- 다음 시약을 추가하십시오:
-
-
| 시약 (μL) | 시험관 (티) | 빈 튜브 (비) |
| 견본 | 100 | – |
| 증류수 | – | 100 |
| 시약 III | 35 | 35 |
| 시약 IV | 35 | 35 |
| 작업 솔루션 | 900 | 900 |
흡수를 감지하십시오 340 20 대와 5Min20의 NM, 각각 A1 및 A2로 기록하십시오. ΔA(티)= A2(티)-A1(티), ΔA(비)= A2(비)-A1(비), ΔA = ΔA(티)-ΔA(비). 반응 동안 25 ℃에서 유지. 빈 튜브는 한 번 또는 두 번만 테스트하면됩니다..
계산:
실험예:
0.1g의 식물 잎을 복용하십시오, 추가하다 1 균질화를위한 추출 용액의 ML, 상층액을 취하다, 그런 다음 결정 단계에 따라 작동합니다..
마이크로 쿼츠 큐벳으로 측정하고 계산하십시오
ΔAT = AT1-AT2 = 1.279-1.206 = 0.073, ΔAB = AB1 – AB2 = 0.834-0.823 = 0.011,
ΔA = ΔAT -ΔAB = 0.073-0.011 = 0.062
루비 스코 활동 (U/g 질량) = 344 × ΔA ÷ W = 344 × 0.062 ÷ 0.1 = 213.28 u/g 질량.
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