| 기인하다 | 세부 |
|---|---|
| 고양이 번호 | SN0020 |
| 크기 | 50t/100t |
| 저장 | 저장 4 짧은 저장의 경우 ° C. 더 긴 스토리지, 키트는 보관할 수 있습니다 -20 ° C 또는 -80 ℃. |
키트 구성품
| 구성요소 | 50티 | 100티 |
| 용해 완충액 | 100밀리리터 | 200밀리리터 |
| 시약 A | 2.5밀리리터 | 5밀리리터 |
| 중간 버퍼 | 25밀리리터 | 50밀리리터 |
| 버퍼를 저장하십시오 | 5밀리리터 | 10밀리리터 |
제품 설명
- 동물 세포와 조직으로부터 순수한 핵을 분리한다 (부드러운: 간/뇌, 딱딱한: 근육, 세련된)
- 응용: 세포 사망 (아 pop 토 시스), 신호, 대사 & 단백질 연구
- 단백질이없는 핵 & 뉴 클레아 제 오염
규약
샘플 준비:
- 조직:
- 100-200mg 신선한 조직을 섭취하십시오 (간, 뇌, 마음)
- PBS/식염수로 씻으십시오, 마른, 작은 조각으로 자릅니다
- 1ML 사전 냉각 된 Ly10IS 버퍼로 균질화 & 50µL 시약 a (얼음 목욕, 20엑스)
- 배양 세포:
- 세포를 소화하고 세척하십시오
- 원심분리기 (5-10분, 800g), 상층액을 폐기하다, 모으다 & 셀 개수 계산
- 재현범 5×10^1ml 사전 냉각 용해 완충액의 7 셀
- 50μl 시약을 추가하십시오, 균질화 (얼음 목욕, 20-30엑스)
핵 분리:
- 균질 물을 1.5ml 원심 분리 튜브로 옮깁니다.
- 원심분리기 (5분, 700g, 4℃), 상층액을 폐기하다 (핵 펠렛이 남아 있습니다).
- 0.5ml의 사전 냉각 용해 완충제와 핵 펠렛을 재현 탁합니다.
- 0.5ml 중간 완충액을 함유 한 새로운 튜브로 옮깁니다 (조심스럽게 계층화되었습니다).
- 원심분리기 (5분, 700g, 4℃), 상층액을 폐기하다 (핵 펠렛이 남아 있습니다).
- 5ml 중간 완충액으로 핵 펠렛을 재현 탁합니다.
- 원심분리기 (10분, 1000g, 4℃), 상층액을 폐기하다 (정제 된 핵 펠렛).
저장:
- 50-100μl 저장고 버퍼 또는 원하는 완충액에서 정제 된 핵 재현 펜.
- 핵은 사용할 준비가되었거나 -70 ° C에서 저장할 수 있습니다.
노트:
완전한 핵 보장:
- 저온: 저온에서 전체 절차를 수행하십시오.
- 속도: 프로세스 전체에서 빠르게 작동합니다.
- 세포 중단: 열쇠는 소기관을 손상시키지 않고 세포를 파괴하는 것입니다.
- 조직: 효율적인 균질화를 위해 꽉 끼는 유봉이있는 소규모 유리 균질화 제를 사용하십시오..
- 배양 세포: 부착 된 세포를 깨는 것은 더 어려운 일입니다. 최적의 결과를 위해 작은 균질화 및 단단한 유봉을 활용하십시오..
원심 분리:
- 올바른 원심 속도를 계산하십시오 (RPM) 원하는 상대 원심력에 기초한다 (RCF 또는 G-Force) 공식 사용:
- g = 1.11 x 10^-5 x r x (RPM)^2
- G: RCF (g)
- RPM: 분당 회전 (제곱)
- 아르 자형: 로터 반경 (센티미터)
다운스트림 애플리케이션:
-
- 웨스턴 블롯 및 2D 페이지의 경우, 하중 완충액을 추가하여 핵 샘플을 직접 용해하십시오.
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