Solarbio 글리세르알데히드-3-인산염 탈수소효소(갭DH) 활동 분석 키트

글리세르알데히드-3-인산염 탈수소효소(갭DH) 활동 분석 키트

메모: 테스트 전에 예측을 위해 2~3개의 서로 다른 샘플을 채취합니다..

탐지 장비: 분광 광도계

고양이 번호: BC2210

크기: 25T/24 ; 50T/48S

구성요소:

용액 추출: 60 밀리리터×1. 4℃에서 보관.

시약 I: 가루×1. -20℃에 보관.

시약 II: 50 밀리리터×1. 4℃에서 보관.

시약 III: 30 μL×1. 4℃에서 보관. 액체는 시약 병의 EP 튜브에 배치됩니다.. 투여 량과 시약 III의 부피 비에 따라: 증류수 3:100, 잘 섞다, 지금 사용하고 준비하십시오.

제품 설명:

갭DH (EC 1.2.1.12) 글리 세르 알데히드 3- 포스페이트의 산화를 1,3- 디 포스 포 글리세리드로 촉매한다. 그것은 당분 해 경로의 핵심 효소입니다. 그것은 글루코 네오 제네시스의 경로와 밀접한 관련이있다, 혈당 농도의 유지 및 당뇨병 발생. 포도당 장애에서 중요한 역할을합니다., 지질 및 단백질 대사.

3-포스 포 글리 용산 키나제. GAPDH는 Glyceraldehyde-3- 포스페이트의 형성을 역전시킨다, 1,3- 디 포스 포 글리세리드 및 NADH로부터의 무기 인 및 NAD+. NADH의 감소 340 NM은 GAPDH의 활동을 반영 할 수 있습니다.

필요한 자료

책상 원심 분리기, 자외선 분광 광도계, 항온수욕, 모르타르/균질화기, 1 mL 석영 큐벳, 트랜스페터, 얼음과 증류수.

절차:

나. 견본 추출:

1. 조직 샘플:

조직의 질량에 따르면 (g): 추출 용액의 부피 (밀리리터) ~이다 1: 5~10. 제안 0.1 g의 티슈 1 mL의 추출 용액. 얼음 위에 완전히 갈아 둡니다, 원심분리기 8000 G와 4. 20 분. 상청액은 테스트를 위해 얼음 위에 놓습니다.

2. 박테리아 또는 세포:

세포 수에 따르면 (104): 추출 용액의 부피 (밀리리터) ~이다 500 ~ 1000: 1. 추천하다 5 백만 1 mL의 추출 용액. 초음파를 사용하여 박테리아 나 세포를 분할하십시오 (힘 20% 또는 200W, 작업시간 3초, 간격 10초, 반복하다 30 타임스). 원심분리기, 8000 G와 4. 10 분. 상청액은 테스트를 위해 얼음 위에 놓습니다.

3. 혈청 (혈장): 직접 측정.

II. 결정 절차:

• 자외선 분광 광도계를 예열하십시오 30 분, 파장을 340 nm로 조정하십시오, 증류수로 0을 설정하다.
• 작업 솔루션의 준비: 모든 시약 II를 한 병의 시약 I에 붓습니다.. 완전히 용해. 일정량의 37 ℃를 예열하십시오 (포유 동물) 또는 25℃ (다른 종) ~을 위한 10 필요에 따라 최소. 사용하지 않는 시약은 서브 충전 후 20 ℃에서 보관해야한다.. 반복적 인 동결과 해동을 피하십시오.
• 다음 목록으로 시약을 추가하세요.:

시약명 (μL)	시험관 (티)	빈 튜브 (비)
견본	30
증류수		30
시약 III	20	20
작업 솔루션	950	950
위의 시약을 1 mL 석영 큐벳 각각. 잘 섞어주세요. 흡광도 값 A1을 측정하십시오 340 NM 10 초. 37 ℃ ℃에 수조 나 인큐베이터에 빨리 넣으십시오. (포유 동물) 또는 25℃ (다른 종) ~을 위한 5 분. 꺼내서 빨리 말리십시오. 5MIN10의 흡광도 값 A2를 측정하십시오. ΔAT = A1T를 계산합니다- A2T, ΔAB= A1B- A2B, ΔA = ΔAT – ΔAB. 빈 튜브는 1-2 번만 테스트하면됩니다.

III. 계산:

Micro Quartz Cuvette에 의해 계산됩니다

• 단백질 농도에 의해 계산됩니다:

단위 정의: 효소 활성의 한 단위는 효소의 양이 1 분당 반응 시스템에서 NADH의 NMOL, 모든 mg 단백질.

GAPDH 활동 (U/mg 프로트) =ΔA π(ε×d)×VRV×109¶(VS×심폐소생술)÷ t = 1072 × ΔA ÷ CPR

• 샘플 중량으로 계산됩니다

단위 정의: 효소 활성의 한 단위는 효소의 양이 1 분당 반응 시스템에서 NADH의 NMOL, 모든 g 샘플.

GAPDH 활동 (U/g 신선 중량) =ΔA π(ε×d)×VRV×109¶(vs × w ÷ vst)÷ t = 1072 × ΔA ÷ w

• 박테리아 또는 세포 양에 의해 계산됩니다:

단위 정의: 효소 활성의 한 단위는 효소의 양이 1 분당 반응 시스템에서 NADH의 NMOL, 모든 104 박테리아 또는 세포.

GAPDH 활동 (U/104 셀) =ΔA π(ε×d)×VRV×109¶(vs × 500 ÷ VST)÷ t = 2.14 × ΔA

• 배양 배지의 부피에 의해 계산됩니다:

단위 정의: 효소 활성의 한 단위는 효소의 양이 1 분당 반응 시스템에서 NADH의 NMOL, 모든 ml 액체.

GAPDH 활동 (U/mL) =ΔA π(ε×d)× VRV × 109 ÷ VS ÷ t = 1072 × ΔA

 

이자형: NADH의 어금니 멸종 계수: 6.22×103L/몰/cm; 디: 큐벳의 가벼운 경로, 1 센티미터;

코드: 총 반응 부피, 0.001 엘;

VS: 반응 시스템의 샘플 부피, 0.03 밀리리터; VST: 추출 솔루션의 부피가 추가되었습니다, 1 밀리리터; 심폐소생술: 샘플 단백질 농도, mg/mL;

여, 샘플 질량, g;

티: 반응 시간, 5 분;

109: 변환 계수, 1 mol = 109 nmol;

500: 셀 수, 5 백만.

메모:

1. A1이 적은 경우 0.8 또는 ΔA는보다 큽니다 0.7, 결정 전에 샘플을 희석하는 것이 좋습니다.
2. 빈 튜브는 각 시약 성분의 품질을 테스트하기위한 테스트 튜브입니다.. 정상적인 조건에서, 변경이 01을 초과하지 않습니다.

실험예:

1. 토끼 신장 0.1g을 복용하십시오, 추가하다 1 mL의 추출 용액, 얼음 목욕에서 균질화, 그런 다음 8000g에서 원심 분리하십시오, 4℃ 20 분, 상청액을 가져다가 얼음 위에 올려 놓으십시오, 그런 다음 결정 단계에 따라 Micro Quartz Cuvette로 작동합니다., 측정 및 계산: ΔAT = A1T-A2T = 0.815-0.158 = 0.657, ΔAB= A1B – A2B = 0.865-0.864 = 0.001, ΔA = ΔAT – ΔAB = 656.

GAPDH 활동 (U/g 질량) = 1072 × ΔA ÷ W = 7032.32 U/g 질량.

2. 0.1g의 클로버를 복용하십시오, 추가하다 1 mL의 추출 용액, 얼음 욕조에서 균질화하십시오, 그런 다음 8000g 및 4 ℃로 원심 분리하십시오 20 분, 상청액을 가져다가 얼음 위에 올려 놓으십시오, 그런 다음 결정 단계에 따라 작동합니다, Micro Quartz Cuvette로 측정하고 계산하십시오, ΔAT = A1T – A2T = 1.026-1.017 = 0.009, ΔAB = A1B – A2B = 0.865-0.864 = 0.001, ΔA = ΔAT – ΔAB = 008.

GAPDH 활동 (U/g 질량) = 1072 × ΔA ÷ W = 85.76 U/G 질량.

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