BCA (비신 코닌산) 단백질 분석 키트는 샘플에서 단백질 농도의 정량화에 널리 사용되는 방법입니다.. 이 분석은 구리의 비색 검출에 의존합니다(II) 알칼리성 조건 하에서 단백질에 의해 감소 된 이온. 생성 된 자주색의 강도는 단백질 농도에 비례합니다., 정확한 정량화를 허용합니다.
다음은 사용 방법에 대한 일반 안내서입니다. BCA 단백질 분석 키트:
필요한 재료:
- BCA 단백질 분석 키트
- 단백질 샘플 (표준 솔루션 또는 알려지지 않은 샘플)
- 마이크로 플레이트 또는 큐벳
- 마이크로 피펫 및 팁
- 마이크로플레이트 리더 또는 분광 광도계
- 증류수
절차:
- 단백질 표준의 준비:
- 알려진 농도로 일련의 단백질 표준을 준비하십시오. 이 표준은 정량화를위한 표준 곡선을 만드는 데 사용됩니다..
- 샘플 준비:
- 단백질 샘플을 표준 범위 내에서 농도로 희석하십시오.. 정확한 정량화를 위해 분석의 선형 범위 내에 샘플을 갖는 것이 중요합니다..
- BCA 작업 시약의 준비:
- BCA 시약을 혼합하십시오 (비신 코닌산 용액) 및 BCA 시약 b (구리(II) 설페이트 용액) a 50:1 비율. 철저한 믹싱을 보장하십시오.
- 잠복:
- 표준 및 샘플에 BCA 작업 시약 추가, 그런 다음 적합한 온도에서 반응 혼합물을 배양합니다. (일반적으로 37 ° C) ~을 위한 30 분. 이 기간 동안, 샘플의 단백질은 구리 이온을 감소시킵니다, 자주색 색상의 단지를 형성합니다.
- 측정:
- 인큐베이션 후, 주위의 파장에서 각 웰의 흡광도를 측정하십시오. 562 마이크로 플레이트 리더 또는 분광 광도계를 사용한 NM. 흡광도는 단백질 농도에 직접 비례합니다.
- 표준 곡선 생성:
- 표준 농도에 대한 표준의 흡광도 값을 표시하여 표준 곡선을 만듭니다.. 이 곡선은 알려지지 않은 샘플의 단백질 농도를 결정하는 데 사용됩니다..
- 알려지지 않은 샘플의 정량화:
- 알려지지 않은 샘플의 흡광도를 측정하고 표준 곡선을 사용하여 단백질 농도를 결정하십시오..
- 데이터 분석:
- 표준 곡선에 기초하여 단백질 농도를 계산하십시오. 대부분의 마이크로 플레이트 리더는이 프로세스를 자동화 할 수있는 소프트웨어를 가지고 있습니다..
- 결과:
- 적절한 단위로 샘플의 단백질 농도를보고 (예를 들어, mg/mL) BCA 분석에 기초합니다.
BCA 단백질 분석 키트 제조업체가 제공 한 특정 지침을 따르는 것이 중요합니다., 정확한 프로토콜은 키트마다 다를 수 있습니다. 추가적으로, 모든 시약이 올바르게 저장되어 있는지 확인하십시오, 그리고 분석은 정확하고 신뢰할 수있는 결과를 위해 권장 조건에서 수행됩니다..
BCA 단백질 분석 키트는 단백질에 기초하여 Cu2+를 Cu+로 감소시키고 BCA가 알칼리성 조건 하에서 Cu1+와 자주색 블루 복합체를 형성한다는 원리., 562nm에서 흡광도를 검출하고 표준 곡선과 비교하여 단백질을 정량화합니다..
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