2× 프로브 qPCR 믹스
제품 번호：EH002 사양：1mL 저장: -20°C에서 보관
제품소개：
이 제품은 프로브 방법을 사용하여 실시간 QPCR을위한 특수 시약입니다.. 그것은 저온에서 프라이머 잘못 알림 또는 프라이머 이량 체 형성으로 인한 비특이적 증폭을 효과적으로 억제하는 항체-차단 된 뜨거운 시작 효소를 함유한다., 따라서 증폭 반응의 특이성을 향상시킨다. 이 제품은 높은 증폭 효율 및 검출 감도를 나타냅니다, 광범위한 정량화 범위에서 강력한 표준 곡선을 생성 할 수 있습니다., 정확한 정량화 가능. 게다가, 그것은 다양한 형광 정량과 호환됩니다 PCR 악기, Applied Biosystems의 것들을 포함합니다, Eppendorf, 바이오 라드, 로슈, 그리고 다른 국내 브랜드.
상품 내용：
| 구성요소 | EH002-02 |
| 2× 프로브 qPCR 믹스 | 1밀리리터 |
메모：ROX 참조 염료는 특정 회사의 실시간 PCR 앰프에서 웰 간 형광 신호 불일치를 수정하기 위해 별도로 또는 제조업체를 통해 얻을 수 있습니다.. ROX 참조 염료 I은 ABI PRISM 7000/7700/7300/7900HT 및 1 단계 플러스 실시간 PCR 시스템에 적합합니다., 등. ROX 참조 염료 II가 적합합니다 7500 실시간 PCR 시스템, 7500 빠른 실시간 PCR 시스템, 스트라타겐 MX3000p, MX3005P, 및 MX4000, 등. ROX 기준 염료 I 및 II의 최종 농도는 1x입니다.. LightCycler와 같은 실시간 형광 정량적 PCR 증폭기, 열 사이클러 주사위 실시간 시스템 II, 그리고 스마트 사이클러 시스템은 ROX 참조 염료를 사용할 필요가 없습니다..
저장:
-20°C에서 보관, 최소 유효 기간이 있습니다 12 개월.
활동 정의:
템플릿/프라이머로 활성화 된 Mahi-Mahi 정자 DNA를 사용합니다, 활동은 다음과 같이 정의됩니다 1 단위 (유) 산이적 불용성 물질의 통합, 차지함으로써 10 내부 뉴클레오티드의 NMOL 30 74 ° C에서 분.
품질 관리:
이 제품은 품질 테스트를 거쳤으며 Deoxyribonuclease endonuclease 활성이 없습니다., 데 옥시 리보 뉴 클레아 제 Exonuclease 활성, 리보 뉴 클레아 제 오염. 숙주 게놈 DNA 잔류 함량은 다음과 같습니다 10 사본.
제품 사용:
실시간 형광 정량적 단일 플렉스 또는 멀티 플렉스 (2-4 채널) qPCR (프로브 방법) DNA 또는 cDNA의 증폭; 절대 정량화 qpcr.
사용 지침:
- 완전히 용해 될 때까지 실온에서 필요한 시약을 평형화합니다., 잘 섞으십시오 (와류가 아닙니다), 과도한 거품 형성을 방지하기 위해 간단한 원심 분리 후 사용, 반복적 인 동결-해동주기를 피하십시오. 자주 사용하는 경우, 4 ° C에 저장하십시오. 아래에 나열된 성분에 따라 PCR 반응 혼합물을 준비하십시오. (얼음 상자에 반응 혼합물을 준비하십시오):
| 시약 | 25μlsystem 볼륨 | 최종 농도 |
| 2× 프로브 qPCR 믹스 | 12.5μL | 1× |
| 프라이머 i (10µm) | 0.5-2.5μL | 0.2-1.0μm |
| 프라이머 II (10µm) | 0.5-2.5μL | 0.2-1.0μm |
| 조사 (10µm) | 0.25-1μL | - |
| ROX 참조 염료 I 또는 ROX 참조 염료 II | 0.5μL 또는 0.25μL | 1× |
| 템플릿 DNA | 1-5μL | - |
| DDH2영형 | 최대 25μl | - |
메모：반응 시스템의 각 구성 요소의 양은 실제 요구 사항에 따라 조정할 수 있습니다.. 사용자는 사용중인 실제 모델을 기반으로 ROX 참조 염료를 추가할지 여부를 결정해야합니다..
- 일반적으로, 반응에 2 단계 방법을 사용할 수 있습니다; 2 단계 증폭이 만족스럽지 않은 경우, 3 단계 방법을 사용하여 PCR 반응 프로그램을 설정할 수 있습니다..
| 방법/단계 | 2 단계 실시간 PCR | 3 단계 실시간 PCR | 사이클 |
| 95℃ (사전 결연) | 2-5분 | 2-5분 | 1 |
| 95℃ (변성) | 10-20비서 | 10-20비서 | 35-45사이클 |
| 55℃ -65 5 (가열 냉각) | 20비서 – 1최소 (형광 수집) | 10-20비서 | |
| 72℃ (확대) | - | 20비서 – 1최소 (형광 수집) |
메모: 실제 요구 사항에 따라 반응 조건을 조정하고 최적화 할 수 있습니다..
- 반응이 완료된 후, 실험 결과를 분석하십시오. 자세한 분석 방법, PCR 증폭 기기 작동 매뉴얼을 참조하십시오.
지침:
- 사용 된 프라이머의 농도는 0.2-1.0 μm, DNA 템플릿은 농도에 따라 적절하게 조정할 수 있습니다..
- 적절한 어닐링을 선택하십시오 (확대) 프라이머 설계를 기반으로 한 온도. 일반적으로, 프라이머의 TM 값은 약 60 ° C로 설계되었습니다.. 어닐링 온도가 낮거나 긴 조각을 증폭시키는 프라이머의 경우 200 bp, 3 단계 방법이 권장됩니다.
- 사용 된 프로브의 농도는의 범위 내에서 최적화 될 수 있습니다. 0.1-0.4 μm. 프라이머와 프로브의 최적 조합을 찾기 위해 구배 농도로 실험을 수행합니다.. 프로브 사용은 실시간 PCR 기기에 따라 다릅니다., 프로브 유형, 형광성 라벨 유형. 조정을 위해 각 형광 프로브에 대한 기기 매뉴얼 또는 특정 요구 사항을 참조하십시오..
- 증폭 전후에 전용 영역과 피펫을 사용하십시오, 장갑을 착용하십시오, 그리고 자주 바꾸십시오. PCR 증폭 후, 반응 튜브를 직접 열지 마십시오. 실험 환경에서 PCR 제품 오염 위험을 최소화하기 위해 열기 전에 충분히 식히기 위해 4 ° C 또는 -20 ° C에 배치하십시오..
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