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製品導入：
このテストキットは、ホワイトスポット症候群ウイルスを検出するための迅速で正確な方法を提供します (WSSV) エビで.
- テクノロジー: リアルタイムの蛍光量的採用 PCR (taqmanプローブメソッド) 敏感で具体的な検出用.
- ターゲット: WSSVのユニークな核酸配列を標的とするように設計された特定のプライマーと蛍光プローブを利用します.
- アプリケーション: さまざまなエビサンプルでWSSVを検出します, 含む:
- 動物組織
- 餌
- 他のサンプルタイプ (キットの仕様を参照してください)
- デュアル検出: 定性的および定量的な結果を提供します:
- 定性: WSSVの有無を決定します.
- 定量的: 存在するWSSV核酸の量を測定します, ウイルス量の評価を可能にします.
- リアルタイム監視: 反応全体の増幅を継続的に監視するためにリアルタイムPCRを利用します, 迅速な結果を可能にします.
このユーザーフレンドリーなテストキットは、エビ農家に貴重なツールを提供します, 研究者, 効果的なWSSV検出と管理のための診断ラボ.
商品内容：
| コンポーネント | WP2101005-01 |
| WSSV反応溶液 | 23ウェル×あたりμL 8 ストリップあたりのウェル× 3 ストリップ |
| WSSV陽性対照 | 100μL |
| ネガティブコントロール | 100μL |
ストレージ:
-20℃で保存, 少なくとも貯蔵寿命があります 12 月.
適用される機器：
ABIシリーズ (ABI 7300/ABI 7500/ステップ1, 等), ロシュライトサイクラーシリーズ, Bio-Rad CFX 96, Sishibibio Q162d, その他のリアルタイム蛍光定量的PCR機器
サンプル処理：
関連する標準に従ってサンプルを処理します, そして、後で使用するために加工されたサンプルを保存します.
実験手順：
- サンプルの準備 (サンプル準備エリア)
総DNA/の取扱説明書を参照してください/RNA抽出キット, または、ES08完全に自動化された核酸抽出および精製機器を使用して、一致する急速な核酸抽出キットを使用します (磁気ビード法), または、加工されたサンプルから核酸を抽出するために関連する基準に準拠する他の核酸抽出キット/方法. 抽出されたサンプル核酸は、できるだけ早くテストし、アイスボックスに保存する必要があります, または、-20°Cで保存されます.
- 反応系の準備 (エリアを追加します)
2.1 WSSVポジティブコントロールチューブを取り出します, ネガティブコントロールチューブ, 実験に必要なWSSV反応溶液を含む反応チューブ (n+2) (つまり, nテストするサンプル + ポジティブコントロール + ネガティブコントロール), 試薬を室温で完全に解凍します, 遠心分離機用 10 秒, チューブの壁から液体を遠心にし、チューブの底にふた, 後で使用するためにアイスボックスに保管してください.
2.2 次に、抽出されたネガティブコントロール2μlを追加します, 核酸のサンプル, 8列ストリップの反応チューブへのWSSV陽性コントロール, チューブの蓋を閉じます, 記録を作る, 各反応の総体積を25μLにします. 十分に混ぜ合わせてください, 遠心分離機用 30 秒, リアルタイム蛍光定量的PCR機器で増幅実験を実行します.
- 蛍光PCR増幅 (増幅および生成物分析エリア)
95℃での予備変性 3 分; 95°Cでの変性 5 秒, 60℃でのアニーリングと伸長 30 秒, のために 40 サイクル, 60°Cで蛍光信号を収集します. 蛍光グループとしてFAMを選択します, そして、クエンチャーグループとしてはありません (ABIシリーズで使用するためにリアルタイム蛍光定量的PCR機器, 必要に応じて, メーカーに事前に連絡するか、自分でROXキャリブレーション染料を追加してください, クエンチャーグループとしてRoxを選択します; さもないと, 通常の手順に従ってください).
- 結果の判定
4.1 ポジティブコントロールのCT値 < 30 そして “S” 形状の増幅曲線が表示されます, テスト結果は有効です. そうでない場合, 実験は繰り返されるべきだ. 再テストがまだ無効である場合, 技術担当者にお問い合わせください.
4.2 サンプル検出結果: Ct値≦ 38 そして “S” 形状の増幅曲線が表示されます, 肯定的な結果を示します, つまり、サンプルにはホワイトスポット症候群ウイルスが含まれています (WSSV).
4.3 サンプル検出結果: 38 < CT < 40, 疑わしいと考えられています. サンプルは再テストする必要があります. 再テストCT値の場合 < 40 そして、明確な増幅曲線があります, それはポジティブだと考えられています; さもないと, それは否定的だと考えられます.
4.4 サンプル検出結果: Ct値なし、またはCt値≧ 40 そしていいえ “S” 整形された増幅曲線, それは否定的だと考えられます, ホワイトスポット症候群ウイルスを示しています (WSSV) サンプルでは検出されませんでした.
予防：
- このテストキットは感度が高くなっています. 汚染を防ぐために, 実験は厳密に分割する必要があります, そして、人的要因によって引き起こされる相互汚染を避けるために、パーティション間の物理的な分離をお勧めします.
- 実験中は白衣とラテックス手袋を着用してください. さまざまな領域で個別のツールを使用します, グローブとラボコートを変更することを忘れないでください.
- 反応溶液中の成分は光に敏感であり、光から遠ざけて保存する必要があります. 使用前に試薬を完全に解凍してください, ただし、凍結と融解を繰り返すことは避けてください。.
- 試薬の準備やサンプルの追加などの手順については、厳密に指示に従ってください. ワークベンチを消毒します, 遠心, 塩素消毒剤を使用して定期的にピペットを使用します, エタノール, 核酸除染剤, または紫外線.
- 反応の後, PCR反応チューブを密閉されたバッグに入れて処分する. エアロゾルの汚染を避けるためにチューブを開けないでください.
- さまざまなバッチの試薬を混ぜないでください. 有効期限内に使用します. 消耗品は、酵素と滅菌なしで治療する必要があります.
- 負のテスト結果は、感染していない状態を完全に示しているわけではありません; 得られた核酸の品質に密接に関連しています. “ネガティブ” 結果は、資格のない核酸サンプル品質が原因である可能性があります, 低サンプル核酸負荷, または失敗した核酸抽出 (検出). 特定の診断には獣医の臨床的考慮事項が必要です.
- 誤検知の考えられる原因: サンプル収集中の相互汚染, 交通機関, および核酸抽出.
- 他の質問について, メーカーの技術スタッフにすぐに連絡してください. この製品は科学研究のみを目的としており、臨床診断やその他の目的を意図したものではありません。.
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