Sanshibio Taq DNA ポリメラーゼ (MG2+プラス) 10 ×5000U

Taq DNA ポリメラーゼ

商品番号：E001A 仕様：500U/1000U/5000Uストレージ: -20℃で保存

製品導入：

この製品はTAQ DNAポリメラーゼです, 一般にTaq酵素と呼ばれます, これは最も広く使用されているDNAポリメラーゼの1つです. Thermus aquaticus DNAポリメラーゼのクローン遺伝子とともに大腸菌で発現し、複数のステップで精製されます. The PCR この製品を使用して増幅された製品には、3にベースが追加されています′ 終わり, tベクターにクローニングできるようにします.

商品内容：

コンポーネント	E001A-01（500U）	E001A-02（1000U）	E001A-03（5000U）
Taq DNAポリメラーゼ（5u/µl）	100μL	200μL	1mL
DNTP混合 (10それぞれmm)	100μL	200μL	1mL
10×PCRバッファー (マグネシウム2+ プラス)	1mL	2×1ml	10×1ml

ストレージ:

-20℃で保存, 最低保存期間は 12 月.

アクティビティの定義:

活性化されたオオクチバス精子DNAをテンプレート/プライマーとして使用します, の摂取 10 酸加工材料としての総ヌクレオチドのnmol 30 74°Cでの分は、として定義されます 1 活動の単位 (U).

品質管理:

この製品は高品質のテストを受けており、エンドヌクレアーゼ活性がありません, エキソヌクレアーゼ活性, リボヌクレアーゼの汚染. 残留宿主ゲノムDNAは以下にあります 10 コピー.

製品の使用:

PCR法を使用したDNAの増幅; DNA配列決定.

使用手順:

• PCR反応に必要なすべてのソリューションを溶かして混ぜて、アイスバスまたはクーラーに置きます. 繰り返しの凍結融解サイクルを避けるために、PCR反応混合物をアリコートすることをお勧めします.
• 氷浴またはクーラーにPCR反応システムをセットアップすることをお勧めします, 参照用の推奨反応システムに従います.
• 過剰なテンプレートDNAは、非特異的なPCR産物につながる可能性があります. 50µlの反応容量のさまざまなタイプのテンプレートの推奨テンプレート量は次のとおりです:

動物や植物からのゲノムDNA: 0.1-1μg;

大腸菌のゲノムDNA: 10-100の;

プラスミドDNA: 0.1-10の.

推奨反応システム:

試薬	50µLシステムボリューム	最終濃度
Taq DNA ポリメラーゼ	1μL	0.1U
10×PCRバッファー (マグネシウム2+ プラス)	5μL	1×
DNTP混合 (10それぞれmm)	1μL	0.2それぞれmm
プライマーI (10μM)	1μL	0.2μM
ファーストⅡ (10μM)	1μL	0.2μM
テンプレートDNA	1μL	—
ああ2○	50µlまで	—

注記: 反応システム内の各コンポーネントの量は、実際の要件に従って調整できます.

• ピペットを使用して、準備した反応システムを徹底的に混ぜて混ぜます, PCRチューブをキャップで密封します, 適切にラベルを付けます, 室温で一時的に遠心化されます.
• 準備したPCRチューブをに入れます PCR装置, 反応条件を設定します, PCR反応を開始します.

反応条件:

方法・手順	時間設定	サイクル
95℃ (変性前)	2-5分	1
95℃ (変性)	30秒	25-35 サイクル
55℃-60℃ (アニーリング)	30秒
72℃ (拡大)	1分
72℃ (最終拡張機能)	10分	1
4℃ (所有)	∞	—

注記: 反応条件は、実際の要件に従って調整および最適化できます.

予防:

1. 拡張時間は、PCR積の長さやGC含有量などの要因に基づいて調整できます. 製品のkbあたりの延長時間は、テンプレートの複雑さと密接に関連しています: 単純なテンプレートが必要です 20 秒, 典型的なテンプレートが必要です 30 秒, 複雑なテンプレートが必要です 1 分.
2. PCR反応のセットアップは、テンプレートなどのさまざまな条件に合わせて調整する必要があります, プライマー, PCR製品の長さ, およびGCコンテンツ. プライマーの最終濃度は通常、0.1〜1.0μmの範囲内にあります. DNAテンプレート濃度はそれに応じて調整できます. 複雑なテンプレートまたは高いGCコンテンツ用, プレナチュレーション前/変性または延長時間を延長し、変性/アニーリング温度を上げることをお勧めします.
3. 増幅の前後に指定されたエリアとピペットを使用します, 手袋を着用する, そして頻繁に変更する. PCR反応終了後, 反応チューブをすぐに開かないでください. 開口部を開く前に4°Cまたは-20°Cで十分に冷却できるようにして、実験室環境へのPCR製品汚染のリスクを最小限に抑える.