仕様
Taq DNA ポリメラーゼ 1000 混合バッファーを使用した U (アイスバッグでの発送)
ストレージ 条件:
Taq DNA ポリメラーゼと Taq PCR キットは次の場所に保管する必要があります。 -30 受け取り後は恒温冷凍庫で-15℃まで保存してください.
テスト:
始める前の注意事項:
- ゲルローディング試薬とゲルトラッキング色素を含むロード PCR バッファーが付属.
- PCR バッファーとロード PCR バッファーにより、最終濃度は次のようになります。 1.5 反応混合物中の mM MgCl2. 必要に応じて、Mg2+ 濃度を追加して調整します。 25 mM MgCl2.
- 高品質の PCR グレード dNTP ミックス (10 mM) 必要に応じて別途ご利用いただけます.
- サーマルサイクラーに入れるまで PCR チューブを氷上に置きます.
- テンプレートなしのコントロールを含める (NTC) あらゆるアッセイで.
準備 とミキシング:
- バッファーと試薬を室温または氷上で解凍します。, 完全に解凍した後は氷上に保管してください.
- テンプレート DNA を除くすべての PCR コンポーネントを含む反応ミックスを調製します。. 準備する 10% 必要以上のボリューム.
- 反応混合物を完全に混合し、PCR チューブに分注します。.
- テンプレート DNA を追加する (≤1 µg/反応) PCRチューブへ. RT-PCR用, 逆転写酵素反応からのアリコートを追加します, を超えない 10% 最終 PCR ボリュームの.
SENO Taq DNA ポリメラーゼを使用した反応セットアップ
| 成分 | ボリューム/反応 | 最終濃度 |
| 反応混合物 | ||
| 10x PCR バッファー¹ または | 10 μl | 1バツ |
| 10x PCRバッファーのロード(オプション) | ||
| dNTP ミックス (10 それぞれのmM) | 2 μl | 200 各 dNTP の µM |
| プライマー1 | 変数 | 0.1–0.5μM |
| プライマー2 | 変数 | 0.1–0.5μM |
| Taq DNA ポリメラーゼ | 0.5 μl | 2.5 単位/反応 |
| RNAseフリー水 | 変数 | |
| テンプレートDNA (ステップで追加されました 4) | 変数 | ≤1 µg/反応 |
| 総反応量 | 100 μlˢ² |
熱 サイクリング:
メーカーの指示に従ってサーマルサイクラーをプログラムする. 付属のサイクリングプログラムを参照してください.
Taq DNA ポリメラーゼの最適化されたサイクリング条件
| ステップ | 時間 | 温度 | コメント |
|---|---|---|---|
| 初期変性 | 3 分 | 94℃ | |
| 3-ステップサイクリング: | |||
| 変性 | 0.5–1分 | 94℃ | |
| アニーリング | 0.5–1分 | 50–68℃ | プライマーの Tm より約 5℃低い. |
| 拡大 | 1 分 | 72℃ | より長い PCR 産物の場合 1 KB, 延長時間は約 1 DNA kb あたりの分. |
| サイクル数 | 25–35 | ||
| 最終延長 | 10 分 | 72℃ |
簡略化 ホットスタート:
PCRプログラムを開始する. サーマルサイクラーが 94°C に達したら, 特異性を向上させるために PCR チューブをサイクラーに配置します.
PCR後:
- 増幅後, サンプルは 2 ～ 8°C で一晩保存でき、長期保存の場合は -20°C で保存できます。.
- ローディングバッファーやゲルトラッキング色素を事前に添加することなく、Load PCR Buffer を使用して PCR 製品をアガロースゲルに直接ロードできます。. 泳動距離とゲル追跡色素については、提供されている表を参照してください。.
Load PCR Buffer 内のゲル追跡色素の移動距離
| % テ (未定) あるガロース ゲル | 赤い染料 | オレンジ色の染料 |
| 0.8 | 500 (270) 血圧 | ~80 (<10) 血圧 |
| 1.0 | 300 (220) 血圧 | ~40 (<10) 血圧 |
| 1.5 | 250 (120) 血圧 | ~20 (<10) 血圧 |
| 2.0 | 100 (110) 血圧 | <10 (<10) 血圧 |
| 3.0 | 50 (100) 血圧 | <10 (<10) 血圧 |
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