Solarbi デンプン含量アッセイキット

デンプン含量アッセイキット

注記: テスト前に予測のために 2 つまたは 3 つの異なるサンプルを取得します. 操作装置: 分光光度計/マイクロプレートリーダー.

カタログ番号: BC0705

サイズ: 100T/96S

コンポーネント:

試薬I: 110 mL×1. 4℃で保存.

試薬II: 110 mL×1. 4℃で保存.

試薬Ⅲ: パウダー×2. 4℃で保存.

標準: パウダー×1, 10 グルコースmg (無水). 4℃で保存.

標準溶液: で溶解 1 蒸留水 mL ～ 10 標準液を使用する場合は mg/mL グルコース標準液. 保管できるのは、 2 4℃で数週間.

実用的なソリューション: 追加 2.625 試薬IIIに蒸留水 mL, ゆっくりと追加します 14.875 濃H2SO4 mL, 使用前に常にかき混ぜ、完全に溶解してください. 保管できるのは、 1 4℃で一週間.

製品説明:

デンプンは植物における糖の主な貯蔵形態です. でんぷん含有量の測定は、食品の栄養価の評価や植物の糖代謝の研究において非常に重要です。.

でんぷんから可溶性糖を分離するには、 80% エタノール, 次にデンプンを酸加水分解によりグルコースに分解します。. デンプン含有量は、アンスロン比色法を使用してグルコース含有量を測定することによって計算できます。.

必要だが提供されていない試薬と装置:

分光光度計/マイクロプレートリーダー, 水浴, 調整可能なピペット, マイクロガラスキュベット/96ウェル平底プレート, モルタル/ホモジナイザー, 氷, 濃H2SO4と蒸留水.

手順:

私. サンプルの準備:

1. 1. 取る 5 サンプルのmg, モルタルで砕いて加えます 1 試薬I mL. 均質化後, 遠沈管に移す, 80℃の水浴にしばらく置きます 30 分, その後室温で遠心分離し、 3000 ×gの場合 5 分, 上清を捨てる, 降水量を保持する.
   2. 追加 0.5 沈殿物に蒸留水 mL. 沸騰した湯の中に入れて、 15 分 (水分の損失を防ぐために蓋をしっかり締めてください)
   3. 冷却後, 追加 1 試薬 II mL, 沸騰水浴に15分間置きます, 3~5回振る
   4. 冷却後, 室温で遠心分離し、 3000 ×gの場合 15 分, 検査のために上清を採取する.

Ⅱ. 決定 手順:

1. 分光光度計/マイクロプレートリーダーを予熱します。 30 分, 波長を調整して 620 nm, 蒸留水でゼロを設定する.
2. ウォーターバスを95℃に調整します.
3. 標準的な実用ソリューション: 薄める 10 mg/mL標準溶液に蒸留水を加えて 0.4, 0.2, 0.1, 0.05, 0.04, 0.03, 0.02, 0.01 mg/mL.
4. 標準テスト: 取る 50 標準液 μL または 50 蒸留水 μL (ブランクチューブ) そして 250 EP チューブへの作業溶液 μL. 95℃のウォーターバスに入れて、 10 分 (水分の損失を防ぐために蓋をしっかり締めてください), 室温まで自然冷却, 取る 200 μLからマイクロガラスキュベット/96ウェル平底プレート, 標準溶液の吸光度を測定する(として) およびブランクコントロール(AB) で 620 nm. ΔA=AS — ABの計算. ブランクチューブと標準曲線のテストは 1 〜 2 回だけで済みます.
5. サンプルテスト: 取る 50 μLのサンプルと 250 EP に対する作業溶液 μL を 95℃のウォーターバスに入れ、 10 分 (水分の損失を防ぐために蓋をしっかり締めてください), 室温まで自然冷却, 取る 200 μLからマイクロガラスキュベット/96ウェル平底プレート, 試験管の吸光度を測定する(で) で 620 nm. ΔAˊ= AT — AB を計算します.

Ⅲ. 計算:

1. 標準曲線の作成

ブドウ糖標準液を採取する (0.4, 0.2, 0.1, 0.05, 0.04, 0.03, 0.02, 0.01 mg/mL) X軸として, ΔA を y 軸とする, 標準曲線を描き、線形回帰式 y=kx+b を取得します。, 方程式に ΔAˊ を代入すると、x が得られます。(mg/mL).

2. でん粉含有量の計算 サンプルの質量より算出 でんぷん含有量 (mg/g 質量) = x×F×VE÷W÷1.11=1.351x÷W×F VE: 抽出後の体積, 1.5 mL;

W: サンプル質量, g;

F: 希釈率;

1.11: この方法で測定されたグルコース含有量をデンプン含有量に換算する定数です。, あれは, 111

μg グルコースはアンスロン試薬によって着色されます, これは以下と同等です 100 アンスロン試薬によるデンプンμg.

注記:

1. 作動流体は腐食性が高いため、, で操作してください
2. 吸光度の値が直線範囲を超えた場合, 測定前にサンプルサイズを増やしたり、希釈したりすることができます.

実験例:

1. サンプル処理のためにトウモロコシ 0.05g を採取します, 上清を取る, そして決定ステップに従って動作します. 使用 96 測定および計算するウェルプレート ΔA'=AT-AB= 0.728-0.622 =0.195, 標準曲線 y = 3.1829x + 0.002, x =195 を計算します. でんぷん含有量 (mg/g 質量) = 1.351×F÷W= 1.351×0.195 × 128÷0.05 = 674.4 mg/g 質量.

参考文献

• クレッグ・K・M. 穀物中のデンプンの推定へのアンスロン試薬の応用[J]. 食糧と農業の科学ジャーナル, 1956, 7(1):40-44.
• バイルズ・ジュニア, シルバーマンL. アントロンによるデンプンとセルロースの定量 [J]. 分析化学, 1949, 21(8):950-953.

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