ソーラーバイオ過酸化水素 (H2O2) コンテンツアッセイキット

属性	詳細
注記	テスト前に予測のために 2 つまたは 3 つの異なるサンプルを取得します
検出器	分光光度計 / マイクロプレートリーダー
カタログ番号	BC3595
サイズ	100T/96S

コンポーネント:

試薬I: アセトン 100mL×1. 4℃で保存. (自前試薬)

試薬Ⅱ: パウダー×1. 4℃で保存. 実用的なソリューション: 濃塩酸3mLを加えます (37%) 使用前に, 完全に溶けた. 未使用の試薬は次の場所に保管されます。 4 ℃.

試薬Ⅲ: 6mL×1. 4℃で保存.

試薬Ⅳ: 30mL×1. 4℃で保存.

標準: 1mL×1, 1mmol/mL H2O2標準液. 4℃で保存.

製品説明:

H2O2 は生物体内で最も一般的な活性酸素分子です. 主にSOD、XODの触媒により生成され、CAT、PODの触媒により分解されます。. H2O2, これは重要な活性酸素の1つであるだけではありません, 活性酸素の相互変換の中心でもあります. 一方では, H2O2 は細胞内の核酸を直接的または間接的に酸化する可能性があります, タンパク質およびその他の生体高分子, そして細胞膜にダメージを与える, したがって、細胞の老化と崩壊が促進されます。. 一方で, H2O2 は、多くの酸化的緊急反応における重要な調節因子でもあります.

H2O2 と硫酸チタンは、特徴的な吸収を持つ黄色の過酸化チタン複合体を生成します。 415 nm.

必要だが提供されていない試薬と装置.

分光光度計/マイクロプレートリーダー, 卓上遠心分離機, 調整可能なピペット, マイクロガラスキュベット/96ウェル平底プレート, 移送ピペット, アセトン濃硫酸 (37% 塩酸), モルタルと氷.

手順:

私. サンプル抽出:

1. 1. 細菌または細胞サンプル: 遠心分離するために細菌または細胞のサンプルを収集します, 上清を捨てる; 提案された 5 試薬I 1mLで100万, 超音波で細菌と細胞を分解する (力 20%, 作業時間3秒, 間隔10秒, のために 30 回); 8000g、4℃で遠心分離します。 10 分, 上清は試験のために氷上に置かれます.
   2. 組織: 0.1gのティッシュを取り、追加します 1 ml リーゼント I, 氷上で完全に粉砕する. で遠心分離します。, 8000gおよび4℃の場合 10 分, 上清は試験のために氷上に置かれます.
   3. 血清: 血清100μL当たりの割合に応じて (プラズマ) 試薬Iを0.9mL加えます, よく混ぜます. 8000g、4℃で遠心分離 10 分, 上清は試験のために氷上に置かれます.

Ⅱ. 決定 手順:

• 予熱分光光度計/マイクロプレートリーダー 30 分, 波長を調整して 415 nm, 蒸留水でゼロを設定する.
• インキュベートソリューションⅡ, Ⅲ、Ⅳ 37℃(哺乳類) または25℃ (他の動物) 以上の水風呂 10 分 分.
• 標準的な実用ソリューション: 96ウェルプレートを使用する場合, 1mmol/mL標準液をアセトンで2μmol/mL標準液に希釈します, 微量ガラス比色法を用いて、1mmol/mL標準液を1μmol/mL標準液に希釈します。
• 次のリストを使用して試薬を追加します (EPチューブ内の反応):

試薬 (μL)	試験管 (で)	標準チューブ (として)	コントロールチューブ (交流)
サンプル	250
標準的な実用ソリューション		250
摂政一世			250
リージェント II	25	25	25
リーゼントⅢ	50	50	50
4000g, 室温遠心分離機用 10 分, 上清を捨てる.
リージェント IV	250	250	250

Regent Ⅳを加えて沈殿を溶解します。 (このステップでは、アセトンを使用して植物性色素を除去できます。 3-5 回), そしてそれを室温に置きます 5 分, 移行 200 μLをマイクロガラスキュベットまたは96ウェルプレートに移し、吸光度を測定します。 415 nm. コントロールチューブのテストは 1 回か 2 回だけで済みます. ΔAT =AT-ACの計算, ΔAS=AS-AC.

Ⅲ. 計算 (マイクロプレート用 読者)

あ. 96-良い 皿

• 細胞量

H2O2(μモル /104 細胞) = ΔAT÷(ΔAS÷C)×VS÷(500×Vs÷Ve)=0.004 × ΔAT ÷ ΔAS

• サンプル重量

H2O2(μmol/g)= ΔAT÷(ΔAS÷C)×V1÷(Vs÷Ve×W)= 2×ΔAT ÷ ΔAS ÷ W

• タンパク質濃度

H2O2(μmol/mgプロト)= ΔAT ÷(ΔAS÷C)×VS÷(心肺蘇生×対比)= 2×ΔAT ÷ ΔAS ÷ Cpr

• 血清 (プラズマ)音量

H2O2(μmol/mL)= ΔAT ÷(ΔAS÷C)×10=20 ×ΔAT÷ΔAS

500: 細胞または細菌の量, 104;

C: H2O2標準液の濃度, 2μmol/mL;

対: サンプル量, 0.25 ミリリットル; W: サンプル重量, g;

ヴェ: 抽出量, 1 ミリリットル;

心肺蘇生法: サンプルタンパク質濃度, mg/mL;

10: 血清希釈倍数. [0.1血清mL (プラズマ)+0.9mL試薬I]÷0.1mL血清(プラズマ)=10.

B. マイクロガラス キュベット:

上式の標準品C-2μmol/mLの濃度をC-1μmol/mLに変更して計算します。.

注記:

1. 解決策として, 私は移りやすいです, 解決策 使用前に予冷する必要がある. 粉砕するときは氷の上で粉砕する必要があります.
2. このキットの溶液は揮発しやすいです. 使い捨て手袋とマスクをご持参ください.
3. サンプルの吸光度値が より大きい場合 1.1, 測定を実行する前に、サンプルを試薬 I で希釈することをお勧めします。.

実験例:

1. 取る 0.1 ハートのgを加えてください 1 サンプル処理用の試薬 I mL. 遠心分離して上清をすべて取り除いた後, 決定手順に従って進めます. と決意した後、 96 井戸平底プレート, ΔAT=AT-AC=0.083-0.046=0.039を計算します。, ΔAS=AS-AC=0.824-0.046=0.778. 含有量はサンプル質量に応じて計算されます.

H2O2(μmol/g) =2×ΔAT ÷ ΔAS ÷ W =1 μmol/g.

2. 取る 0.1 お茶1gを加えて 1 サンプル処理用の試薬 I mL. 遠心分離して上清をすべて取り除いた後, 決定手順に従って進めます. と決意した後、 96 井戸平底プレート, ΔAT=AT-AC=0.258-0.003=0.255を計算します。, ΔAS=AS-AC=0.637-0.003=0.634. 含有量はサンプル質量に応じて計算されます.

H2O2(μmol/g) =2×ΔAT ÷ ΔAS ÷ W =4.5 μmol/g.

参考文献：

• サターフィールド C N, 過酸化水素の硫酸チタン法における Bonnell A 干渉[J].

分析化学, 1955, 27(7): 1174-1175.

• アミンVM, オルソン・NF. 牛乳中の過酸化水素の分光光度法による測定[J]. 酪農科学ジャーナル, 1967, 50(4):461-464.
• シマ・Y・H, ヤオ・ジェイ・エム, ラブ・ワイ・エス, 他. 休眠開始時と休眠終了時のカイコ卵における過酸化水素とカタラーゼ発現の変化[J]. 昆虫の生化学と生理学に関するアーカイブ, 2011, 77(2): 72-80.

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技術仕様:

検出限界 ：0.0027 μmol/mL

線形範囲：0.0195-3 μmol/mL