グリコーゲンアッセイキット

注記: テスト前に予測のために 2 つまたは 3 つの異なるサンプルを取得します.

操作装置: 分光光度計/マイクロプレートリーダー

カタログ番号: BC0345

サイズ:100T/96S

コンポーネント:

抽出試薬: 100mL×1, 4℃で保存.

摂政一世: パウダー×1, 4℃保存、ブドウ糖10mg, 追加 1 使用前に溶解するための蒸留水 mL. 蒸留水で希釈すると、 0.1 スタンバイ用 mg/mL ブドウ糖溶液, 使用する準備ができて. 0.1 mg/mL ブドウ糖標準液, 4℃で保存.

リーゼントⅡ: パウダー×1, 4℃で保存.

実用的なソリューション: 注ぐ 6 試薬Ⅱに蒸留水 mL を加えゆっくりと注ぎます。 24 濃硫酸 mL. 使用前によく溶かしてよく混ぜてください. 未使用の試薬は次の時点で有効です。 4 ℃で1週間.

製品説明

グリコーゲンはグルコース単位で構成される高分子多糖類です. 砂糖の主な貯蔵形態の1つです. 主に肝臓と筋肉にバックアップエネルギーとして蓄えられます。, 肝臓グリコーゲンと筋グリコーゲンと呼ばれます, それぞれ. グリコーゲンは血糖濃度を調節することができます. 血糖値が上昇すると肝臓でグリコーゲンが合成される. 血糖値が下がると, 肝臓のグリコーゲンは血糖を補うためにブドウ糖に分解される. したがって, 肝臓のグリコーゲンは血糖の相対的なバランスを維持するために重要です. 筋グリコーゲンは筋肉内のグリコーゲン貯蔵の一種です. 激しい運動で血糖値が大量に消費されると、, 筋グリコーゲンは血糖に直接分解されない. 乳酸を生成するにはまず分解する必要があります, 血液とともに肝臓に循環される, グリコーゲングルコースを経て肝臓グリコーゲンに変換されます.

決定原理: アンスロン法. 強アルカリ抽出液でグリコーゲンを抽出, グリコーゲン含有量は強酸性条件下でアンスロン法により測定されます。.

必要だが提供されていない試薬と装置.

S分光光度計/マイクロプレートリーダー, 卓上遠心分離機, 移送ピペット, マイクロガラスキュベット/96ウェルプレート, モルタル, 濃硫酸 (H2SO4) と蒸留水.

手順:

私. サンプル抽出:

1. 細胞とか細菌とか: 集める 5-10 数百万の細菌または細胞を遠心分離管に入れる, 遠心分離後上清を廃棄します; 0.75mLの抽出試薬を加えて超音波で細菌や細胞を破壊します (力 20% または200W, 超音波3s, 10秒間隔, 繰り返す 30 回) ); 10mLチューブに移す, 沸騰水浴で20分間煮る (水分の損失を防ぐためにしっかりと閉めてください), チューブを毎回振る 5 完全に混合するまでの分; チューブを取り出して冷ます, 蒸留水で5mLまで取り、混合します。. 8000g、25℃で10分間遠心分離, 検査のために上清を採取する.

2. 組織: サンプルを0.1～0.2g秤量し、容器に入れます。 10 mLチューブ, 追加 0.75 抽出液 mL, 沸騰水浴で沸騰させる 20 分 (水分の損失を防ぐためにしっかりと閉めてください), 試験管を毎回振る 5 完全に混合するまでの分. 組織がすべて溶けた後, チューブを取り出して冷まします, それから補う 5 蒸留水で mL. 8000g、25℃で遠心分離 10 分, 検査のために上清を採取する.

Ⅱ. 決定 手順:

1. 予熱する s分光光度計/マイクロプレートリーダー用 30 分, 波長を調整して 620 nm, 蒸留してゼロを設定する
2. サンプリングテーブル (EPtube に次のリージェントを追加します)

摂政(μL)	ブランクチューブ (A1)	標準チューブ (A2)	試験管 (A3)
サンプル			60
摂政一世		60
蒸留水	60
リーゼントⅡ	240	240	240

よく混ぜます, 沸騰した湯の中に入れて、 10 分 (水分の損失を防ぐためにしっかりと閉めてください), いいね, そしてとる 200 μLをマイクロガラスキュベット/96ウェルプレートに注入し、ブランクチューブの吸光度を読み取ります。, 標準チューブ, と測定管の 620 nm, それらをA1として記録します, A2, そしてA3. ブランクチューブと標準チューブのテストは 1 回だけで済みます.

Ⅲ. 計算:

1. サンプル重量

ソルビトール (mg/g 生体重) =(Cs×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2)÷1.11

= 0.450×(A3-A1)÷（A2-A1)÷W

2. タンパク質濃度

ソルビトール (mg/mgプロット) = (Cs×V1)×(A3-A1) ÷(A2-A1) ÷(V1×Cpr) ÷1.11

=0.09×(A3-A1) ÷（A2-A1) ÷心肺蘇生法

3. 細菌または細胞の数:

ソルビトール（mg/104細胞）= (Cs×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(細菌または細胞の数×V1÷V2) ÷1.11

= 0.450×(A3-A1)÷（A2-A1)÷細菌または細胞の数

1.11: グルコース含有量がグリコーゲン含有量に換算される定数です, あれは, の色 111 アントロン試薬を含むグルコース μg は、 100 アントロン試薬を含むグリコーゲン μg.

Cs: 標準濃度, 0.1 mg/mL V1: サンプル量, 0.06 mL;

V2: 総サンプル量, 5 mL;

心肺蘇生法: サンプルタンパク質濃度, mg/mL; W: サンプル重量, g

細菌または細胞の数: 104 ユニットとして, 万

注記:

A がより大きい場合 1.4, サンプルを蒸留水で希釈し、計算式の対応する希釈係数を掛けます。.

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技術仕様:

検出限界: 0.002 mg/mL

直線範囲: 0.003125-0.25 mg/mL