BCAプロテイン アッセイキット

猫: PC0020

サイズ: 500T (マイクロプレートリーダー) / 50T (分光光度計)

ストレージ: BSA タンパク質標準品は 4℃ で保存されます。 3 月， または-20℃ 1 年, 他の試薬は室温で保管してください。 1 年

コンポーネント:

	500T (50T)	ストレージ
BCA試薬	100ミリリットル	RT
試薬あり	3ミリリットル	RT
PBS 希釈	30ミリリットル	RT
BSA規格(5mg/ml BSA)	1ミリリットル	-20℃

製品説明:

• BCA プロテイン アッセイ キットの原理:
  • タンパク質によるCu^2+のCu^+への還元に基づく.
  • BCAはアルカリ条件下でCu^+と紫青色の錯体を形成する.
  • 吸光度は562nmで検出されます.
  • タンパク質の定量は、吸光度を標準曲線と比較することによって行われます。.
• 洗剤との相性:
  • 一般的な洗剤はこんな感じ SDS, トリトンX-100, と Tween はテスト結果に影響しません.
• 特定のエージェントに対する過敏症:
  • キレート剤の影響を受ける (EDTA, エグタ), 還元剤 (DTT, メルカプトエタノール), そして脂質.
• 高度な背景考慮事項:
  • サンプルの希釈またはライセートによりバックグラウンドが高い場合, Bradford Protein Assay Kit の使用を検討してください。.

プロトコル

あ. マイクロプレートリーダー

1. BCA 実用ソリューション

希薄 1 Cu 試薬の量 50 BCA 試薬の量 (1:50). 降水が発生した場合, 混ぜると消えます. BCA 作用試薬は室温で 3 分間保持できます。 24 時間.

2. BSA標準実用ソリューション

10μlのBSAを希釈します (5mg/ml) PBSで100μlまで (0.5mg/ml). 追加 0, 2, 4, 6, 8, 12, 16, 20μl BSA標準作業溶液 (0.5mg/ml) に 96 ウェルプレート, 20μlになるまでPBSを加える.

3. サンプルを適切に希釈してください. いくつかのグラデーションを行う方がよい, のような 2, 4, そして 8 倍希釈. 20μlのサンプルを96ウェルに加える

注記: 操作手順のミスを防ぐために, サンプルポイントを次の位置にします 1/2 できる限り基準線より後ろに, 少量のサンプルを採取する場合、ピペットの誤差が大きくなるため, 標準線の前の点はあまり正確ではない可能性があります.

4. BCA反応

200μlのBCA作業溶液を加えます 96 ウェルプレート, 37℃で15〜30分間インキュベートします. 測定

562nmでの吸光度, 標準曲線を描いてサンプルのタンパク質含有量を計算します。. インキュベーターを使用する場合は、水分の蒸発が検査結果に影響を与えないように注意してください。.

B. 分光光度計

1. BCA 実用ソリューション

希薄 1 Cu 試薬の量 50 BCA 試薬の量 (1:50). 降水が発生した場合, 混ぜると消えます. BCA 作用試薬は室温で 3 分間保持できます。 24 時間.

2. BSA標準実用ソリューション

100μl BSAを希釈します (5mg/ml) まで PBS で 1 ミリリットル (0.5mg/ml).

3. 8個用意する (以上) 5ml遠心管, 次のように試薬を追加します:

遠沈管 いいえ.	1	2	3	4	5	6	7 (サンプル 1)	8 (サンプル 2)	9 (サンプル 3)
BSA標準実用ソリューション	0	40μl	80μl	120μl	160μl	200μl	200μl	200μl	200μl
PBS	200μl	160μl	120μl	80μl	40μl	0	0	0	0
BCA 実用ソリューション	2ミリリットル	2ミリリットル	2ミリリットル	2ミリリットル	2ミリリットル	2ミリリットル	2ミリリットル	2ミリリットル	2ミリリットル

注記

で孵化させます 37 ℃で15～30分. 562nmでの吸光度を測定します, 標準曲線を描いてサンプルのタンパク質含有量を計算します。. インキュベーターを使用する場合は、水分の蒸発が検査結果に影響を与えないように注意してください。.

1. Cu試薬とPBS希釈液は、試薬を長期間使用しない場合は2～8℃で保存できます。. BCA試薬が低温で結晶化・沈殿する場合, 使用に影響を与えることなく、37℃でインキュベートして完全に溶解できます。.
2. サンプルに妨害物質が多く含まれる場合, BCAプロテインアッセイキットをご利用ください (PC0020).
3. 皆様の安全と健康のために, 手袋とガーゼマスクを着用してください

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