BCAプロテイン アッセイキット
猫: PC0020
サイズ: 500T (マイクロプレートリーダー) / 50T (分光光度計)
ストレージ: BSA タンパク質標準品は 4℃ で保存されます。 3 月， または-20℃ 1 年, 他の試薬は室温で保管してください。 1 年
コンポーネント:
| 500T (50T) | ストレージ | |
| BCA試薬 | 100ミリリットル | RT |
| 試薬あり | 3ミリリットル | RT |
| PBS 希釈 | 30ミリリットル | RT |
| BSA規格(5mg/ml BSA) | 1ミリリットル | -20℃ |
製品説明:
- BCA プロテイン アッセイ キットの原理:
- タンパク質によるCu^2+のCu^+への還元に基づく.
- BCAはアルカリ条件下でCu^+と紫青色の錯体を形成する.
- 吸光度は562nmで検出されます.
- タンパク質の定量は、吸光度を標準曲線と比較することによって行われます。.
- 洗剤との相性:
- 特定のエージェントに対する過敏症:
- キレート剤の影響を受ける (EDTA, エグタ), 還元剤 (DTT, メルカプトエタノール), そして脂質.
- 高度な背景考慮事項:
- サンプルの希釈またはライセートによりバックグラウンドが高い場合, Bradford Protein Assay Kit の使用を検討してください。.
プロトコル
あ. マイクロプレートリーダー
- BCA 実用ソリューション
希薄 1 Cu 試薬の量 50 BCA 試薬の量 (1:50). 降水が発生した場合, 混ぜると消えます. BCA 作用試薬は室温で 3 分間保持できます。 24 時間.
- BSA標準実用ソリューション
10μlのBSAを希釈します (5mg/ml) PBSで100μlまで (0.5mg/ml). 追加 0, 2, 4, 6, 8, 12, 16, 20μl BSA標準作業溶液 (0.5mg/ml) に 96 ウェルプレート, 20μlになるまでPBSを加える.
- サンプルを適切に希釈してください. いくつかのグラデーションを行う方がよい, のような 2, 4, そして 8 倍希釈. 20μlのサンプルを96ウェルに加える
注記: 操作手順のミスを防ぐために, サンプルポイントを次の位置にします 1/2 できる限り基準線より後ろに, 少量のサンプルを採取する場合、ピペットの誤差が大きくなるため, 標準線の前の点はあまり正確ではない可能性があります.
- BCA反応
200μlのBCA作業溶液を加えます 96 ウェルプレート, 37℃で15〜30分間インキュベートします. 測定
562nmでの吸光度, 標準曲線を描いてサンプルのタンパク質含有量を計算します。. インキュベーターを使用する場合は、水分の蒸発が検査結果に影響を与えないように注意してください。.
B. 分光光度計
- BCA 実用ソリューション
希薄 1 Cu 試薬の量 50 BCA 試薬の量 (1:50). 降水が発生した場合, 混ぜると消えます. BCA 作用試薬は室温で 3 分間保持できます。 24 時間.
- BSA標準実用ソリューション
100μl BSAを希釈します (5mg/ml) まで PBS で 1 ミリリットル (0.5mg/ml).
- 8個用意する (以上) 5ml遠心管, 次のように試薬を追加します:
|
遠沈管 いいえ. |
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7
(サンプル 1) |
8
(サンプル 2) |
9
(サンプル 3) |
| BSA標準実用ソリューション |
0 |
40μl |
80μl |
120μl |
160μl |
200μl |
200μl |
200μl |
200μl |
| PBS | 200μl | 160μl | 120μl | 80μl | 40μl | 0 | 0 | 0 | 0 |
| BCA 実用ソリューション | 2ミリリットル | 2ミリリットル | 2ミリリットル | 2ミリリットル | 2ミリリットル | 2ミリリットル | 2ミリリットル | 2ミリリットル | 2ミリリットル |
注記
で孵化させます 37 ℃で15～30分. 562nmでの吸光度を測定します, 標準曲線を描いてサンプルのタンパク質含有量を計算します。. インキュベーターを使用する場合は、水分の蒸発が検査結果に影響を与えないように注意してください。.
- Cu試薬とPBS希釈液は、試薬を長期間使用しない場合は2～8℃で保存できます。. BCA試薬が低温で結晶化・沈殿する場合, 使用に影響を与えることなく、37℃でインキュベートして完全に溶解できます。.
- サンプルに妨害物質が多く含まれる場合, BCAプロテインアッセイキットをご利用ください (PC0020).
- 皆様の安全と健康のために, 手袋とガーゼマスクを着用してください
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