| 属性 | 詳細 |
|---|---|
| 猫 | G1480 |
| サイズ | 4 ×2mL, 4 ×10mL, 4 ×20mL |
| ストレージ | -20℃, 光を避ける, に有効です 6 月 |
キットのコンポーネント:
| 試薬 | 4×2mL | 4×10mL | 4×20mL | ストレージ |
|---|---|---|---|---|
| 試薬A: ALP固定剤 | 2mL | 10mL | 20mL | RT, 光を避ける |
| 試薬B: ALPインキュベーションソリューション | B1: AS-BI溶液 1mL | 5mL | 10mL | -20℃, 光を避ける |
| B2: FBB溶液 1mL | 5mL | 10mL | -20℃, 光を避ける | |
| 試薬C: Nuclear Fast Red ソリューション | 2mL | 10mL | 20mL | 2-8℃, 光を避ける |
| 試薬D: メチルグリーンソリューション | 2mL | 10mL | 20mL | RT, 光を避ける |
導入:
アルカリホスファターゼ (ALPまたはAKP) 哺乳類の組織に広く分布している, 主に細胞膜などの活性物質交換部位で, 小胞体, ゴルジ複合体, リソソーム, 好中球顆粒, そして平滑筋細胞膜. ALP 染色キット (カプロウ法) アゾカップリング法を利用してALP活性を実証, 金属塩沈殿法と比較して信頼性の高い結果が得られます.
自己提供の資料:
スライドガラス, ウェットボックス, 光学顕微鏡
プロトコル (参照のみ):
スミアやセクション汚れに:
- ALP Fixative でスミアまたはセクションを 3 分間修正します, その後蒸留水で洗浄します.
- ALP インキュベーション ソリューションを適用する, 湿った箱の中で暗所で15〜20分間インキュベートします, その後蒸留水で洗浄します.
- Nuclear Fast Red Solution または Mmethyl Green Solution で 3 ～ 5 分間再染色します。.
- 洗浄またはグリセロールゼラチンで密封した後、顕微鏡で切片を観察します.
付着細胞染色用:
- 培養細胞をPBSですすぐ, その後、ALP Fixative で修正するか、 4% PFA, 続いてPBSで洗浄.
- ALP インキュベーション ソリューションを適用する, 湿った箱の中で暗所で15〜20分間インキュベートします, その後、PBSで洗浄します.
- Nuclear Fast Red Solution または Mmethyl Green Solution で 3 ～ 5 分間再染色します。.
- PBSで洗浄し、切片を顕微鏡で観察します.
結果:
| 結果 | 色 |
|---|---|
| ALPの陽性部位 | 青 |
| 核 | 赤または緑 |
血液および骨髄塗抹標本の判定基準:
| ポジティブレベル | 染色の特徴 |
|---|---|
| 0 | 顆粒なし |
| 1 | やや顆粒 |
| 2 | 中級顆粒 |
| 3 | マジョリティ顆粒 |
| 4 | 完全顆粒 |
注記:
- 酵素活性を維持するために、新鮮なサンプルを使用し、切片を速やかに固定してください。.
- 損傷や損失を避けるため、染色中は培養細胞を優しく扱ってください。.
- ALP インキュベーション ソリューションは効果を急速に失う可能性があります, すぐに使用する.
- ニュークリアファストレッド溶液またはメチルグリーン溶液で再染色する.
- 各サンプルにポジティブコントロールを含める.
参照:
ユウ・ジャン, 朱丹田, リウ・ウェンフェン, 他. ヘッジホッグ経路阻害は原発性卵胞閉鎖症を引き起こし、女性生殖幹細胞の増殖能力または幹細胞性を低下させます。. 幹細胞研究 & 治療. 7月 2019. (もし 4.627)
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