Sanshibio Taq DNA ポリメラーゼ (Mg2+フリー) 10 ×5000U

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説明

Taq DNA ポリメラーゼ

商品番号E001B 仕様:500U/1000U/5000U Storage: -20℃で保存

製品導入

この製品はTAQ DNAポリメラーゼです, 一般にTaq酵素と呼ばれます, これは最も広く使用されているDNAポリメラーゼの1つです. Thermus aquaticus DNAポリメラーゼのクローン遺伝子とともに大腸菌で発現し、複数のステップで精製されます. The PCR この製品を使用して増幅された製品には、3にベースが追加されています′ 終わり, tベクターにクローニングできるようにします.

製品機能:

Sanshibio Taq DNA Polymerase is an improved and screened Taq DNA polymerase. In addition to the characteristics of the traditional enzyme itself, it also has broader advantages after repeated testing.
初め, Sanshibio’s Taq enzyme is equipped with a basic universal buffer, which has a good amplification effect on common plant, animal, microbial, 等. DNA or cDNA; it is compatible with the buffers of most mainstream manufacturers on the market; the modified The enzyme combined with the basic universal buffer can achieve stronger resistance, and can tolerate DNA crude extracts containing a large amount of impurities; it has stronger stability and can tolerate multiple freeze-thaw cycles; for some low-abundance templates, it can be used The amount of enzyme added is reduced, and the amount of magnesium ions is appropriately increased to achieve more sensitive detection.

商品内容:

コンポーネント E001B-01(500U) E001B-02(1000U) E001B-03(5000U)
Taq DNAポリメラーゼ(5u/µl) 100μL 200μL 1mL
DNTP混合 (10それぞれmm) 100μL 200μL 1mL
10×PCRバッファー (マグネシウム2+ free)

 

1mL 2×1ml 10×1ml
MgCl2 (25mM) 1mL 2×1ml 10×1ml

ストレージ:

-20℃で保存, 最低保存期間は 12 月.

アクティビティの定義:

活性化されたオオクチバス精子DNAをテンプレート/プライマーとして使用します, の摂取 10 酸加工材料としての総ヌクレオチドのnmol 30 74°Cでの分は、として定義されます 1 活動の単位 (U).

品質管理:

この製品は高品質のテストを受けており、エンドヌクレアーゼ活性がありません, エキソヌクレアーゼ活性, リボヌクレアーゼの汚染. 残留宿主ゲノムDNAは以下にあります 10 コピー.

製品の使用:

PCR法を使用したDNAの増幅; DNA配列決定.

使用手順:

  • PCR反応に必要なすべてのソリューションを溶かして混ぜて、アイスバスまたはクーラーに置きます. 繰り返しの凍結融解サイクルを避けるために、PCR反応混合物をアリコートすることをお勧めします.
  • 氷浴またはクーラーにPCR反応システムをセットアップすることをお勧めします, 参照用の推奨反応システムに従います.
  • 過剰なテンプレートDNAは、非特異的なPCR産物につながる可能性があります. 50µlの反応容量のさまざまなタイプのテンプレートの推奨テンプレート量は次のとおりです:

動物や植物からのゲノムDNA: 0.1-1μg;

大腸菌のゲノムDNA: 10-100の;

プラスミドDNA: 0.1-10の.

推奨反応システム:

試薬 50µLシステムボリューム 最終濃度
Taq DNA ポリメラーゼ 1μL 0.1U
10×PCRバッファー (マグネシウム2+ free) 5μL
MgCl2 (25mM) 4μL 2mM
DNTP混合 (10それぞれmm) 1μL 0.2それぞれmm
プライマーI (10μM) 1μL 0.2μM
ファーストⅡ (10μM) 1μL 0.2μM
テンプレートDNA 1μL
ああ2 50µlまで

注記: 反応システム内の各コンポーネントの量は、実際の要件に従って調整できます.

  • ピペットを使用して、準備した反応システムを徹底的に混ぜて混ぜます, PCRチューブをキャップで密封します, 適切にラベルを付けます, 室温で一時的に遠心化されます.
  • 準備したPCRチューブをに入れます PCR装置, 反応条件を設定します, PCR反応を開始します.

反応条件:

方法・手順 時間設定 サイクル
95℃ (変性前) 2-5分 1
95℃ (変性) 30秒 25-35 サイクル
55℃-60℃ (アニーリング) 30秒
72℃ (拡大) 1分
72℃ (最終拡張機能) 10分 1
4℃(Hold)

注記: 反応条件は、実際の要件に従って調整および最適化できます.

予防:

  1. 拡張時間は、PCR積の長さやGC含有量などの要因に基づいて調整できます. 製品のkbあたりの延長時間は、テンプレートの複雑さと密接に関連しています: 単純なテンプレートが必要です 20 秒, 典型的なテンプレートが必要です 30 秒, 複雑なテンプレートが必要です 1 分.
  2. PCR反応のセットアップは、テンプレートなどのさまざまな条件に合わせて調整する必要があります, プライマー, PCR製品の長さ, およびGCコンテンツ. プライマーの最終濃度は通常、0.1〜1.0μmの範囲内にあります. DNAテンプレート濃度はそれに応じて調整できます. 複雑なテンプレートまたは高いGCコンテンツ用, プレナチュレーション前/変性または延長時間を延長し、変性/アニーリング温度を上げることをお勧めします.
  3. 増幅の前後に指定されたエリアとピペットを使用します, 手袋を着用する, そして頻繁に変更する. PCR反応終了後, 反応チューブをすぐに開かないでください. 開口部を開く前に4°Cまたは-20°Cで十分に冷却できるようにして、実験室環境へのPCR製品汚染のリスクを最小限に抑える.

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