導入
- プロテイナーゼKの特徴:
- 広い基質特異性を持つ安定したセリンプロテアーゼ.
- 界面活性剤の存在下でも、多くのタンパク質を自然な状態で分解します。.
- 金属イオンによって活性化されない, キレート剤 (例えば, EDTA), スルフヒドリル試薬, またはトリプシンまたはキモトリプシン阻害剤.
- 広いpH範囲にわたって安定 (4-12.5), pH 6.5 ～ 9.5 で最適な活性を発揮.
- 活性は変性剤によって刺激される可能性があります (例えば, SDS と尿素).
- 70℃を超える温度では急速な変性が発生します.
- 自己分解はアルカリ性 pH で増加します, しかし、一部の酵素フラグメントは、広範な自己分解後でも完全なタンパク質分解活性を維持します。.
- アプリケーション:
- 分子生物学で不要なタンパク質を消化するためによく使用されます。, DNA または RNA 調製物中のヌクレアーゼなど.
- 通常、核酸製剤では 50 ～ 200 μg/ml で使用されます。.
- 最適な条件: pH 7.5-8.0 および37〜55℃.
- インキュベーション時間は次のように異なります。 30 分まで 18 時間.
仕様
| 特徴 | 仕様 |
| 分子量 | 29.3kDa |
| 等電点 | 8.9 |
| 外観 | 白色凍結乾燥粉末 |
| 純度 | 95% (SDS-PAGE分析) |
| 特定の活動 | ≥34 単位/mg タンパク質 |
| 温度特性 | 有効な活動温度は37〜70°Cです。, 65°C での酵素活性は 25°C での酵素活性の 2 倍になります。. |
| PH特性 | 4.0-12.0, 最適な範囲はph7.5〜11.5です。 |
| 保存条件 | 安定性を最大限に確保するために、-20°C で保管することをお勧めします。 (常温で輸送または保管しても酵素活性は低下しません).
保存期間は次のとおりです 3 -20℃で数年間、 2 2～8℃で年間. |
| 利用方法 | 溶液を20mg/mlに調製, 最終濃度が 50 ～ 200ug/ml になるまでプロテイナーゼ K を消化液またはライセートに添加します。, 55~70℃でインキュベートします.
反応後のプロテイナーゼKは磁気ビーズ法により除去・不活化可能, カラム法またはフェノールクロロホルム抽出. プロテアーゼ K は、95°C でのインキュベーションによって不活化できます。 3 分または70℃ 15 分. |
| 核酸残基の検出 | Qubit は検出しませんでした
ヒトのDNA汚染は検出されなかった (リアルタイム PCR) 細菌のDNA汚染は検出されませんでした (16SユニバーサルプライマーPCR, 30 サイクル) 真菌の DNA 汚染は検出されませんでした (ITSプライマーPCR) |
| ヌクレアーゼの検出 | DNase が検出されない
RNase が検出されない ニッカーゼが検出されない |
| 推奨アプリケーション | 核酸抽出, 循環DNA抽出, ウイルス核酸抽出 |
利点
- RNaseを含まない, DNase, とニッケーゼ
- 核酸残基なし (100mgのプロテインK全体を抽出した後、Qubitによって検出されませんでした)
- 人由来の DNA 汚染はありません (Q-PCRでは検出されない)
- 細菌のDNA汚染がない (16Sユニバーサルプライマーでは検出されない)
- 真菌 DNA 汚染なし (1TSユニバーサルプライマーでは検出されない)
- 輸送可能で、乾燥した環境で常温で 2 年間有効です。.
- 高感度な遊離DNA抽出に使用可能, ウイルス核酸抽出, 全血 DNA 抽出, 等.
注文情報
| コンテンツ | C12100 | C12101 | C12102 | PDB-1000 |
| プロテイナーゼK, 凍結乾燥物, >30 単位/タンパク質の mg | 1 g | 10 g | 100 g | |
| バッファPDB (20mM トリス, pH 7.5, 10mM CaCl2, 50% グリセロール, 0.1% 防腐剤) | 1000 ミリリットル |
レビュー
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