ピジョンアデノウイルス (PiADV) 核酸検出キット

商品番号：AP2308005 仕様：24T/48T ストレージ：-20℃

製品導入：

• ピジョンアデノウイルス (PiADV) ハトやオウムなどの鳥に感染する一般的で非常に伝染性のあるアデノウイルスです, 急性感染症の原因剤として機能します, Squab Adenitisを含む.
• このウイルスは非常に伝染性があります, 卵の産卵を通して垂直感染が可能です, 直接または間接的な接触による水平伝送と同様に.
• 現在, PIADVには特定の抗ウイルス薬はありません, 早めに作る, 急速な, 診断に不可欠なPIADVの便利な検出, 治療, 病気の蔓延を遅らせる, そして合併症の予防.
• この検出キットは、PIADVゲノムの保守的なシーケンスに基づいて設計されています, プライマーとプローブを利用します.
• システムの最適化を通じて, 正確な蛍光の定量的を可能にします PCR 経口炭孔の検査, 血, 鳥類からのその他の組織サンプル.
• これにより、宿主のPIADV感染の迅速かつ正確な決定が促進されます.

商品内容：

保管条件：

-20℃で保存, 保存期間は少なくとも 12 月.

実験運用：

1. サンプルの準備 (サンプル準備エリア)

1.1 サンプル要件:

– 口腔および総排泄腔の綿棒: 滅菌綿棒を用意します, 鳥の喉や総排出腔に挿入します, 3回回転させる, 遠沈管に入れます, 露出した部分をカットする, キャップをしっかりと閉めてください, そしてラベルを付けます. すぐに検査できるサンプルは 2 ～ 8°C で保存してください。 24 時間, すぐに検査できないサンプルは -20°C で保管してください。.

– 全血: 抗凝固剤としてEDTAを使用する, ヘパリン抗凝固薬を避ける, 新鮮な全血を使用する, または 2 ～ 8°C で保管してください。 7 日々, または-20℃以下で保管してください。 3 月, 凍結融解サイクルの繰り返しを避ける.

– 組織: 100mgを超えない新鮮な筋肉または臓器組織を摂取してください, 200～500μLの滅菌水を使用して組織ホモジネートを調製します, その後のサンプル前処理に進みます.

1.2 サンプルの準備:

Sanshio Bioを参照してください “動物ゲノム DNA 迅速抽出キット (PCR分析用)” マニュアル (カタログ: DP202), または関連要件を満たすその他の核酸抽出キット/方法, 加工サンプルの核酸抽出用. 抽出されたサンプル核酸をよりクーラーに入れて、できるだけ早くテストします. 4°C以下で保管してください 7 数日または -20°C での保管期間を超えないこと 6 月.

2. 反応系の準備 (反応エリア)

2.1 キットの各コンポーネントを取り出します, 室温で完全に解凍する, 遠心分離機用 10 秒, チューブ壁とチューブキャップ内の液体をチューブの底まで遠心分離します。. サンプル量に応じて反応液を調製します (n+2, ここで、n はサンプル数です, セットアップすることをお勧めします 1 ポジティブコントロールと 1 各実験のネガティブコントロール). 具体的な作り方: 取る (n+2) PIADV Premix溶液を含む反応チューブ, 各チューブに11.5µlのPIADV反応溶液を加えます, ピペットを使用して完全に混合します, 23ウェルあたり µL, そしてクーラーに保管してください.

2.2 次に、ネガティブコントロール 2μL を順次加えます。, 抽出されたサンプル核酸, 反応溶液に対するPIADV陽性対照. チューブのキャップを閉めます, 記録を作る, 各反応の総量は 25μL です。. 十分に混ぜ合わせてください, 遠心分離機用 10 秒, PCR装置で増幅実験を実行します.

3. PCR増幅 (増幅および生成物分析エリア)

95℃での予備変性 2 分; 95℃での変性 10 秒, 60℃でのアニーリングと伸長 35 秒, 40 サイクル. 60℃で蛍光シグナルを収集. FAM 蛍光チャンネルの選択 (ABIシリーズなどのリアルタイム蛍光定量PCR装置を使用, 必要に応じて, メーカーに問い合わせるか、ROX 補正色素を追加してください; さもないと, 通常の手順に従ってください).

4. 結果の解釈

4.1 実験の有効性の条件:

ポジティブコントロールFAMチャンネルCt値 < 28 そして “S”-整形された増幅曲線が観察される; ネガティブコントロールに Ct 値がない、または Ct 値以上 38 そしていいえ “S”-整形された増幅曲線, 実験は有効です. さもないと, 実験を繰り返す; 繰り返し実験がまだ無効である場合, メーカーの技術担当者にお問い合わせください.

4.2 サンプル結果の解釈:

Ct値≦ 33 そして “S”-形状の増幅曲線は、PIADV陽性を示します;

間のCt値 33 < CT < 38 疑わしいと考えられている, 再テストをお勧めします. FAMチャンネルの再テストCT値がある場合 < 33 エアロゾル汚染を除外した後、明確な増幅曲線があります, それはpiadv陽性と見なされます, それ以外の場合はネガティブと見なされます;

Ct値なし、またはCt値≧ 38 そしていいえ “S”-形状の増幅曲線は、PIADV陰性を示しています.

予防：

• 汚染を防ぐために, 実験は厳密に分割する必要があります, 人的要因による相互汚染を避けるために、パーティション間の物理的な隔離が推奨されます。. 実験中は白衣とラテックス手袋を着用してください, さまざまな領域でツールを独立して使用する, 必要に応じて手袋と白衣を交換する. PCR後, すぐに蓋を開けないでください; エアロゾル汚染を最小限に抑えるために十分に冷却してから開けてください。.
• 使用前に試薬を完全に解凍してください, ただし、凍結融解を繰り返すことは避けてください。. キットに付属のPCR反応チューブは0.2mLです。; 交換が必要な場合, 完全に解凍してから移す. 試薬の調製とサンプルの添加については指示に厳密に従ってください。. ワークステーション, 遠心分離機, ピペット, その他の器具は塩素含有消毒剤で定期的に消毒する必要があります。, アルコール, 核酸除染剤, または紫外線.
• 陰性の結果は、必ずしも宿主がウイルスに感染していないことを意味するわけではありません. サンプルの品質が悪い, ウイルス負荷が低い, または強力な阻害物質の存在 (アルコールなどの, 消毒剤, 抗凝固剤, 等) 核酸抽出が失敗する可能性があります (検出) そして “ネガティブ” 結果. 結果の解釈基準に従ってください, 疑わしい結果が出た場合, まずエアロゾル汚染を除外する. 他にご質問がある場合, メーカーの技術担当者にお問い合わせください.
• この製品は1回限りの使用です. 試薬内の成分は自然光に敏感です; 梱包および保管中に光への曝露を避ける. 梱包後, 凍結融解を繰り返さないでください. 科学研究のみに使用する; 臨床診断やその他の目的ではありません.