Trigliceride Solarbio (T.G) Kit di analisi del contenuto

Trigliceridi(T.G) Kit di analisi del contenuto

Nota: Prendi due o tre campioni diversi per la previsione prima del test.

Attrezzatura operativa: Microplate Reader/Spettrofotometro

Numero di catalogo: BC0625

Misurare:100T/96S

Componenti:

Reagente I: Reagente autofornito, aggiungere 80 ml di n-eptano e 80 ml di alcool isopropilico a una bottiglia di vetro vuota. Sigillare e mescolare bene, Archiviazione a 4 ℃.

Reagente II: 3 bottiglia ml × 1. Conservazione a 4 ℃.

Reagente III: 10 bottiglia ml × 1. Conservazione a 4 ℃.

Reagente IV: 3 bottiglia ml × 1. Conservazione a 4 ℃, protetto dalla luce. Reagente V: 10 bottiglia ml × 1. Conservazione a 4 ℃, protetto dalla luce. Reagente VI: 10 bottiglia ml × 1. Conservazione a 4 ℃, protetto dalla luce.

Standard: bottiglia in polvere × 1, aggiungere 5 ml di reagente I prima dell'uso. 1 Soluzione standard di trigliceridi mg/ml, Archiviazione a 4 ℃.

Descrizione del prodotto:

Trigliceridi(T.G) è una molecola di grasso formata da acidi grassi a catena lunga e glicerolo, che non è solo il componente principale della membrana cellulare, ma anche un importante substrato respiratorio. Il TG viene estratto con alcool isopropilico, Quindi idrolisi a glicerolo e acidi grassi dopo saponificazione di TG da parte di KOH. Il glicerolo viene ossidato dall'acido periodico per formare la formaldeide. Condensa di formaldeide e acetilacetone per formare componenti gialli in presenza di ioni cloruro. Il componente giallo ha un assorbimento caratteristico a 420 nm e proporzionale al contenuto di TG.

Reagenti e attrezzature necessari ma non forniti:

Lettore spettrofotometro/micropiastre, microcuvetta in vetro/piastra a fondo piatto da 96 pozzetti, n-eptano, Alcool isopropilico, bagnomaria, pipetta regolabile, acqua distillata e 125 ml di bottiglia vuota.

Procedura:

IO. preparazione del campione:

• Tessuto:

L'omogeneità del bagno di ghiaccio è condotta in base al rapporto della massa tissutale (G): Reagente ⅰ volume (ml) = 1: 5~10 (Si suggerisce di prendere 0.1 g di tessuto e aggiungere 1 ml di reagente I). Centrifugare a 8000 g per 10 minuti a 4 ℃, Il surnatante viene utilizzato per il test.

• Batteri:

Raccogliere 5 milioni di cellule o batteri nel tubo della centrifuga, Quindi scartare il surnatante, Aggiungi finale 1 ml di reagente I. Spazzare batteri o cellule con ultrasuoni per 1 minuto (energia 20%, Tempo di lavoro 2s, intervallo 1s). Centrifugare a 8000 g per 10 minuti a 4 ℃, Il surnatante viene utilizzato per il test.

• Siero: Rileva

II. Procedura:

1. Preriscaldare lo spettrofotometro per 30 minuti, regolare la lunghezza d'onda su 420 nm, azzerare con acqua distillata.
2. Preriscaldare il bagno d'acqua a 65 ℃.

3. Rileva il contenuto di TG:

Dopo il raffreddamento, Trasferisci il liquido dal tubo EP a una piastra di cuvetta di vetro/piastra a fondo piatto 96, e determinare l'assorbanza a 420 nm.

Nota: Il tubo vuoto e il tubo standard devono essere misurati solo una volta.

III. Calcolo:

1) Siero:

T.G(mg/dl)= C ×(A- AB)÷(COME- AB)× 100 =(A- AB)÷(COME- AB)× 100

2) Tessuto:

Concentrazione proteica:

T.G(Mg/mg Prot)= C × V ×(A- AB)÷(COME- AB) ÷(CPR × V.)=(A- AB)÷(COME- AB) ÷Cpr

Peso del campione:

T.G(mg/g) = C × V ×(A- AB)÷(COME- AB) ÷ w =(A- AB)÷(COME- AB) ÷W

3 ) Batteri o cellule:

T.G(Cella U/104) = C ×(A- AB)÷(COME- AB) ÷ d =(A- AB)÷(COME- AB) ÷ d 1dl = 100 ml;

V: Il volume del reagente1, 1 ml;

C: Concentrazione standard, 1 mg/ ml;

Cpr: Concentrazione proteica del campione (mg/ml); W: Peso del campione(G);

D: Densità di batteri o cellule, 104 cella/ml.

Nota:

1. Ci sono sostanze volatili nel kit. I guanti e le maschere dovrebbero essere indossati durante l'esperimento. Il tappo del bottiglia del reagente dovrebbe essere chiuso nel tempo dopo
2. Dopo l'aggiunta del reagente ⅱ, è necessario vibrare ripetutamente e violentemente, in modo che il trigliceride nella soluzione di prova possa essere completamente estratto, e l'ampiezza dell'oscillazione, tempo, tempi ripetuti e in attesa del tempo di stratificazione dovrebbe essere
3. Al fine di garantire la ripetibilità del test, il tempo di raffreddamento dopo ogni bagno d'acqua dovrebbe essere
4. Se il valore OD del tubo di prova è maggiore di 1.5, Si consiglia di diluire il campione con reagente I correttamente prima del test, e moltiplicarlo per il corrispondente diluizione multiplo durante il calcolo.

Riferimenti

• Fletcher M j. Un metodo colorimetrico per stimare i trigliceridi sierici[J]. Clinica Chimica Acta, 1968, 22(3): 393-397.
• Ercole d m, Sheehan t l. Determinazione chemiluminescente del glicerolo sierico e dei trigliceridi[J]. Chimica analitica, 1978, 50(1):22-25.

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Specifiche tecniche:

Il limite di rilevamento: 0.0372 mg/ml

Gamma lineare: 0.0625-3 mg/ml