Solarbio Idrossiprolina (IP) Kit di analisi dell'attività

Idrossiprolina (IP) Kit di analisi dell'attività

Nota: Prendi due o tre campioni diversi per la previsione prima del test.

Apparecchiature di rilevamento: Spettrofotometro/lettore di micropiastre

Gatto n: BC0255

Misurare: 100T/96S

Componenti:

Estrarre la soluzione: 6 Acido cloridrico mol/L. (HCl), Reagente auto-fornito. HCL concentrato （37%） : H2O(V/v) =1:1, immagazzinato a temperatura ambiente.

Reagente I: 8 ml×1, Conservare a 4 ℃ e proteggere dalla luce. Reagente II: 8 ml×1, Conservare a 4 ℃ e proteggere dalla luce. Standard: 0.5 ml×1, 0.5 Mg/ml di idrossiprolina, conservare a 4 ℃.

Descrizione:

Hyp è uno dei componenti principali del collagene nel corpo. La maggior parte del collagene è distribuito nella pelle, tendine, cartilagine, e vasi sanguigni et al.. Perciò, Il contenuto di HYP è un indice importante che riflette il grado di metabolismo e fibrosi del tessuto di collagene.

Il campione viene idrolizzato per produrre ip di ip, che è ulteriormente ossidato dalla cloramina t. Il prodotto ossidato ha reagito con p-dimetilaminobenzaldeide per produrre un composto rosso con picco di assorbimento caratteristico a 560 nm. Il contenuto di ip può essere calcolato misurando il valore di assorbimento dell'idrolizzato del campione a 560 nm.

Obbligatorio ma non fornito:

Scale, forno, tubo di vetro, centrifuga, bagnomaria, Spettrofotometro/lettore di micropiastre, Micro vetro cuvetta/piastra da 96 pozzetti, 6 mol/l HCl e acqua distillata.

Procedura:

IO. preparazione del campione

1. 1. Campione di tessuto:

Pesare circa 0.2 g del campione nel tubo di vetro, Tagliare il tessuto il più possibile per la digestione. Aggiungere 2 ml di soluzione di estratto e la copertura è leggermente allentata e non ermetica, bollirlo o cuocerlo in forno da 110 ℃ per 2 A 6 ore per digerirlo fino a quando non c'è un grosso nodulo visibile.

Dopo il raffreddamento, regolare il pH a 6-8 con 10 Mol/l Naoh (Non sopra l'acido o su alcali) quindi un volume costante a 4 ml con acqua distillata. Centrifugazione a 16000 giri al minuto per 20 minuti a 25 ℃ (Se c'è ancora impurità dopo la centrifugazione, Può essere rimosso mediante filtrazione).

Prendi il surnatante per il test. (La sostanza nera può essere formata nel processo, e se non può essere digerito a lungo, può essere sostanza carbonizzata. Non influisce sull'esperimento).

2. Cellule:

Prendere 5 milioni di cellule, aggiungere 1 ml di soluzione di estratto, bollire, o forno a 110 ℃ per 2 A 6 ore da digerire allo stato trasparente.

Dopo il raffreddamento, regolare il pH a 6-8 con 10 Mol/l Naoh (Non sopra l'acido o su alcali) quindi un volume costante a 2 ml con acqua distillata. Centrifugazione a 16000 giri al minuto per 20 minuti a 25 ℃ (Se c'è ancora impurità dopo la centrifugazione, Può essere rimosso mediante filtrazione).

Prendi il surnatante per il test.

II. Rilevamento

1. Preriscaldare lo spettrofotometro/lettore di micropiastre per 30 minuti, regolare la lunghezza d'onda su 560 nm e impostare zero con distillato
2. Diluire la soluzione standard a 30, 15, 7.5, 3.75, 1.875, 0.938, 0.469, 0.234 μg/ml.
3. Aggiungi reagenti come tabella seguente.

Mescolare bene, incubare a 60 ℃ per 20 minuti, Lascialo a temperatura ambiente per 15 minuti, Prendi 200 μl della soluzione di reazione nella piastra di cuvetta di micro vetro/96 piastra a fondo piatto e testare il valore di assorbanza di AT 560 nm. ΔA = At – AB.

III. Calcolo

1. Making di standard

Quando si effettua la curva standard, La concentrazione della soluzione standard viene presa come asse x, e i ΔAS (ΔAS = AS-AB) è preso come asse y. Si ottiene l'equazione lineare y = kx+b. Prendi ΔAT (At-ab) all'equazione per acquisire x.

2. Calcolo del contenuto di idrossiprolina:calcolato in base al peso fresco del campione:

Contenuto di idrossiprolina tissutale (μg/g di peso fresco) = x × vs ÷(W × vs ÷ VTE) = 4x ​​÷ w.

• Calcolato in base alla concentrazione di proteina del campione:

Contenuto di idrossiprolina tissutale (μg/mg Prot) = x × vs ÷(Cpr×VS) = x ÷ cpr.

• Calcolato in base al numero di orcellini di batteri:

Contenuto di idrossiprolina cellulare (cellula μg/104) = x × vs ÷(N × vs ÷ VCE )= 2x ÷ n.

VS: Volume del campione aggiunto, 0.06 ml;

VTE: Volume della soluzione di estratto di tessuto, 4 ml; Vce: Volume della soluzione di estratto cellulare, 2 ml;

W: Peso fresco del campione, G;

N: Numero di celle,104 come unità, 10000;

Cpr: Concentrazione della proteina campione, mg/ml.

Nota

1. Se il valore OD è maggiore di 1.0, Il campione deve essere diluito correttamente e quindi determinato. Presta attenzione a moltiplicare il multiplo di diluizione nella formula di calcolo.
2. Il reagente ha una certa tossicità. Si prega di prendere misure protettive durante il funzionamento per prevenire l'inalazione o il contatto con la pelle.
3. Quando si calcola in base alla concentrazione di proteina del campione, La proteina nel campione stesso deve essere estratta separatamente e determinata.

Esempi sperimentali

• 0.2g di gamba del topo è prelevato per il trattamento del campione, e il surnatante viene eliminato e gestito secondo le fasi di determinazione. ΔA = At-Ab = 0.177-0.06 = 0.117 è misurato da 96 bene piatto, e la curva standard y = 0,0383x + 0.022 è portato dentro, e x = 2.48 È

Il contenuto di idrossiprolina nel tessuto (massa μg/g) = 4x ​​÷ w = 4 × 2.48 ÷ 0.2 = 49.6 massa μg/g.

Recenti citazioni del prodotto

• Fan litonging,Jiaqing Chen,Yanmeng Tao,et al. Miglioramento della differenziazione condrogenica delle cellule staminali mesenchimali e della riparazione della cartilagine da parte della grelina. Journal of Orthopedic Research. Gennaio 2019;(IF3.043)

prodotti correlati

BC1550/BC1555 Transaminasi glutammica-piruvica (GPT) Kit di test di attività BC1560/BC1565 Transaminasi glutammica-ossalacetica (AVUTO) Kit di test di attività BC0290/BC0295 Prolina (Pro) Kit di analisi del contenuto

Aminoacido BC1570/BC1575 (Aa) Kit di test del contenuto BC0180/BC0185 CISTEINE (Cys) Kit di test del contenuto BC1580/BC1585 Acido glutammico (Glu) Kit di analisi del contenuto

Specifiche tecniche:

Limite di rilevamento: 0.057 μg/ml

Gamma lineare: 0.117-30 μg/ml