- Componenti del kit di reagenti
| Specifiche | 50T | 100T |
| Gatto. NO. | SN0333 | SN0334 |
| RNA Extraction Columns (impostato) | 50 (impostato) | 100 (impostato) |
| DNA Clean-Up Columns (impostato) | 50 (impostato) | 100 (impostato) |
| RNA Extraction Buffer II | 30ml | 2×30 ml |
| Inhibitor Removal Buffer | 30ml | 2×30 ml |
| Tampone di lavaggio 1 | 15 ml | 2×15 ml |
| Tampone di eluizione | 20 ml | 20 ml |
| Manuale di istruzioni | 1 | 1 |
- Magazzinaggio
Questo kit di reagenti deve essere conservato a temperatura ambiente (15-25℃) in a dry condition and is stable for 12 mesi.
- Istruzioni per l'uso del kit di reagenti
3.1 Questo kit è destinato a scopi di ricerca in biologia molecolare e non deve essere utilizzato per la diagnosi o il trattamento di malattie.
3.2 Alcuni componenti del kit contengono sostanze irritanti; è opportuno prendere le dovute precauzioni (come indossare indumenti protettivi e occhiali protettivi).
3.3 L'utilizzo di questo kit richiede apparecchiature aggiuntive come una centrifuga ad alta velocità, bagnomaria (bagno di metallo), miscelatore a vortice, etanolo anidro, azoto liquido, cloroformio, acqua deionizzata sterile, e tubi EP.
- Introduzione al kit di reagenti
This microRNA purification kit provides a fast and efficient method for purifying microRNA from various tissues, suitable for most species. Tissues exceeding 100 mg can be processed using this RNA purification kit. The kit employs special DNA cleanup column technology to remove genomic DNA and large RNA fragments during the experimental process. In general, additional digestion on DNA columns is not required, preventing microRNA degradation.
The RNA rapid purification kit can extract plant microRNA within 1 ora. The extracted microRNA can be directly used for RT-PCR, Northern blotting, eccetera. L'intero processo di purificazione non richiede reagenti tossici come il fenolo-cloroformio, making the microRNA purification kit suitable for various other samples.
- Principi e procedure sperimentali
- Processo di estrazione
Precauzioni prima di iniziare l'esperimento:
UN. Prima dell'uso, aggiungere la quantità specificata di etanolo anidro Lavare Respingente 1 according to the label on the reagent bottle, and mark a check on the label to indicate the addition of anhydrous ethanol.
B. Il tampone di eluizione è un 0.1x soluzione TE contenente una quantità minima di EDTA. Se l'EDTA ha un impatto sugli esperimenti successivi, it is recommended to use sterile deionized water instead of Elution Buffer.
- Elaborazione del campione:
UN. Plant or Animal Tissues: Collect fresh tissues whenever possible. For plant and animal tissues, grind with liquid nitrogen, then quickly add 500μl of RNA Extraction Buffer II. Invert and mix thoroughly, avoiding tissue clumps in the lysate to prevent RNA degradation.
B. Cell Tissues: Collect fresh growing cells in a 1.5 provetta da centrifuga da ml, centrifugare a 13,000 giri al minuto per 1 min, collect cells, aggiungere 500μl of RNA Extraction Buffer II, vortex and shake well.
2. Incubare a56℃ per 1-3 min. If the sample has a high polysaccharide content, it is advisable to skip this step.
3. Vortex for 30 sec.
4. Centrifugare il lisato 10 min at 14,000 giri/min (20,000× g).
(Nota: Polysaccharides from plant materials may result in sticky substances at this step, which can cut DNA in subsequent steps. Remove these substances during this step. Dopo la centrifugazione, transfer the supernatant to a new Purificazione del DNA column.)
- Add the obtained supernatant to the DNA cleanup column (circa 650-700μl ogni volta), centrifugare al massimo 8,000 giri al minuto per 1 min, collect the filtrate (microRNA is in the filtrate at this point).
- Estimate the volume of the filtrate accurately, aggiungere 0.5 times the volume of absolute ethanol. If there is a small amount of precipitation, it does not affect subsequent experiments. Add the liquid to the RNA purification column, centrifugare a 13,000 giri al minuto per 1 min.
- Discard the waste and place the RNA purification column in a collection tube for the next step.
- Aggiungere 600μl of Inhibitor Removal Buffer, centrifugare al massimo 8,000 giri al minuto per 1 min, scartare i rifiuti, and place the RNA purification column back into the collection tube for the next step.
- Aggiungere 700ml di tampone di lavaggio 1 to the RNA purification column, centrifugare a 14,000 giri/min (20,000× g) per 2 min, extend the centrifugation time appropriately to ensure a drier membrane.
(Nota: Confirm the addition of absolute ethanol to Wash Buffer 1. The presence of ethanol has a severe impact on subsequent experiments. Perciò, membrane dryness is crucial. Dopo la centrifugazione, ensure the absence of ethanol before elution, scartare i rifiuti, and collect the tube.
After washing with Wash Buffer 1, the membrane on the RNA purification column should only have a slight color. Dopo la centrifugazione, carefully remove the RNA purification column, ensuring it does not touch the collection tube to avoid ethanol interference.)
- Place the RNA purification column into a new centrifuge tube, aggiungere 100μl di tampone di eluizione to the membrane, incubate at room temperature for 5 min (15℃ to 25℃), centrifugare al massimo 8,000 giri al minuto per 1 min.
(Nota: Eluting RNA with 50μl of Elution Buffer can increase RNA concentration but decrease total RNA yield.)
- Repeat the previous step.
Nota: A new centrifuge tube can be used to collect the RNA eluted the second time, or the original collection tube can be used to continue collecting RNA.
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