Miscela qPCR Sanshibio 2× SYBR Green

oggetto numero： EH003 Specificazione：1Ml Storage: Conservare a -20 ° C.

Introduzione al prodotto：

• Reagente specializzato per il tempo reale PCR utilizzando il Sybr Metodo di fluorescenza a base di colorante verde I.
• Contiene un enzima a caldo blocco di anticorpi per sopprimere l'amplificazione non specifica causata dalla dimerizzazione del primer o dalla ricottura non specifica di primer in condizioni a bassa temperatura.
• Migliora la specificità della reazione di amplificazione.
• Dispone di alta efficienza di amplificazione, Specificità e sensibilità di rilevazione forte, Buona stabilità, e facile uso operativo.
• Genera una robusta curva standard in un ampio intervallo quantitativo, consentendo una quantificazione accurata.
• Compatibile con una varietà di strumenti PCR quantitativi di fluorescenza, compresi quelli di Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad, Roche, e altri marchi domestici.

Contenuto del prodotto：

Nota：

• Il colorante di riferimento ROX corregge gli errori del segnale di fluorescenza interno in alcuni strumenti di amplificazione PCR in tempo reale.
• Il colorante di riferimento ROX I è adatto per ABI PRISM 7000/7700/7300/7900HT e Sistema PCR in tempo reale.
• ROX Reference Dye II è compatibile con 7500 Sistema PCR in tempo reale, 7500 Sistema PCR in tempo reale veloce, Stratagene MX3000P, Mx3005P, e MX4000.
• Sia la tintura di riferimento ROX I e II dovrebbero essere usate ad una concentrazione finale di 1 × nelle reazioni.
• Strumenti come LightCycler, Termal Cycler Dice DADE Real Time System II, e il sistema Smart Cycler non richiede l'uso del colorante di riferimento ROX.

Magazzinaggio:

Conservare a -20 ° C., con una durata minima di conservazione di 12 mesi.

Definizione dell'attività:

Usando il DNA dello sperma Mahi-Mahi attivato come modello/primer, L'attività è definita come 1 unità (U) di materiale insolubile acido incorporato, Assumendo 10 nmol di nucleotidi all'interno 30 minuti a 74 ° C..

Controllo di qualità:

Questo prodotto ha subito test di qualità ed è privo di attività di endonucleasi di deossiribonucleasi, Attività di esonucleasi di deossiribonucleasi, e contaminazione da ribonucleasi. Il contenuto residuo del DNA genomico ospite è di seguito 10 copie.

Usi del prodotto:

Fluorescenza in tempo reale QPCR quantitativo (Metodo della tintura) amplifica DNA o cDNA; QPCR quantitativo assoluto; QPCR quantitativo relativo.

Istruzioni per l'uso:

• Consentire ai reagenti richiesti di equilibrarsi a temperatura ambiente fino a quando non si dissolvono completamente, mescolare delicatamente accuratamente (Non vortice), Utilizzare dopo una breve centrifugazione per evitare un'eccessiva formazione di bolle e ripetuti cicli di congelamento. Se usato frequentemente, Conservare a 4 ° C.. Preparare la miscela di reazione PCR secondo i componenti premuti (Preparare il mix di reazione su una scatola di ghiaccio):

Nota：Le quantità di ciascun componente possono essere regolate in base alle esigenze effettive. L'aggiunta del colorante di riferimento ROX dovrebbe essere determinata dagli utenti in base al modello specifico utilizzato.

• Generalmente, Un metodo in due fasi può essere utilizzato per la reazione. Se l'amplificazione non è soddisfacente con il metodo in due fasi, È possibile utilizzare un metodo in tre fasi per impostare il programma di reazione PCR.

Nota： Le condizioni di reazione possono essere regolate e ottimizzate in base alle esigenze effettive. Il programma di curve di fusione deve essere selezionato e adattato in base al programma dello strumento di amplificazione utilizzato.

• Dopo che la reazione è completa, Analizzare i risultati della curva di amplificazione e della curva di fusione. Fare riferimento al manuale utente dello strumento PCR in tempo reale per metodi di analisi dettagliati.

Precauzioni:

1. Seleziona ricottura appropriata (estensione) Temperature basate sul design del primer, con il primer TM in genere circa 60 ° C. Per primer con temperature di ricottura più basse, Si consiglia un metodo in tre fasi. La concentrazione finale dei primer usati può essere regolata all'interno dell'intervallo di 0,2-1,0μM. La concentrazione del modello di DNA può essere regolata in base alla sua concentrazione.
2. Il colorante Green I Sybr è un colorante non specifico che emette fluorescenza al legame con il DNA a doppio filamento (dsDNA). Tuttavia, è facilmente degradato sotto una luce forte. Perciò, Quando si progettano primer, È importante evitare il più possibile la formazione di dimeri di primer. Durante l'uso, L'esposizione prolungata alla luce forte dovrebbe essere evitata per migliorare la precisione dei risultati, sensibilità, e specificità.
3. L'aumento della concentrazione di ioni di magnesio può ridurre l'effetto inibitorio di Sybr Green I sulle reazioni PCR. Quando si ottimizza le reazioni PCR di fluorescenza usando questo prodotto, Si consiglia di aumentare leggermente la concentrazione di ioni di magnesio (0.5-3.0mm superiore alle reazioni PCR standard).
4. Usa aree e pipette dedicate prima e dopo l'amplificazione, indossare guanti, e cambiarli frequentemente. Dopo aver completato la reazione PCR, Non aprire i tubi di reazione per ridurre al minimo la contaminazione dell'ambiente di test con i prodotti PCR.