1. Componenti del kit di reagenti
| Specifiche | 50T | 100T |
| Gatto. NO. | SN0233 | SN0234 |
| Colonne di estrazione del DNA (impostato) | 50 (impostato) | 100 (impostato) |
| Tampone reagente B | 20 ml | 2×20 ml |
| Tampone reagente C | 30 ml | 2×30 ml |
| Tampone di lavaggio 1 | 15 ml | 2 × 15 ml |
| Tampone di eluizione | 20 ml | 20 ml |
| Proteinasi K | 1ml | 1ml |
| RNasi A | 1ml | 1ml |
| Manuale di istruzioni | 1 | 1 |
2. Magazzinaggio
Questo kit di reagenti deve essere conservato a temperatura ambiente (15-25℃) e in condizioni asciutte, con una durata di conservazione di 12 mesi. Le colonne di purificazione per l'estrazione del DNA possono essere conservate per 1 anno in un ambiente fresco e asciutto. Proteinasi K e RNasi A contengono conservanti, consentendo il trasporto a temperatura ambiente, ma per la conservazione a lungo termine, dovrebbero essere mantenuti a -20 ℃.
3. Istruzioni per l'uso del kit di reagenti
3.1 Questo kit di reagenti è destinato alla ricerca di biologia molecolare e non deve essere utilizzato per la diagnosi o il trattamento di malattie.
3.2 Alcuni componenti del kit di reagenti contengono sostanze irritanti. Si raccomandano misure protettive come indossare indumenti protettivi e occhiali protettivi.
3.3 Durante l'utilizzo di questo kit di reagenti, una centrifuga ad alta velocità, bagnomaria (bagno di metallo), miscelatore a vortice, etanolo anidro, acqua deionizzata sterile, e le provette EP devono essere preparate dall'utente.
4. Introduzione al kit di reagenti
Il tampone orale Purificazione del DNA Il kit fornisce un metodo rapido ed efficiente per purificare il DNA dai tamponi orali, ampiamente utilizzato per l'estrazione di cellule epiteliali come l'epitelio orale.
Il kit di purificazione rapida del DNA con tampone orale può estrarre il DNA totale dalle cellule epiteliali orali all'interno 30 minuti. L'intero processo di purificazione non richiede reagenti tossici come il fenolo-cloroformio. Il DNA estratto può essere utilizzato direttamente per PCR, Southernblotting, e altre applicazioni.
5. Principi e procedure sperimentali
6. Processo di estrazione
Prima di iniziare l'esperimento:
UN. Tampone reagente B e C può precipitare in condizioni di bassa temperatura. Si consiglia di riscaldare a 65 ℃ per 5 minuti. Dopo che il precipitato si è sciolto, può essere utilizzato normalmente.
B. Prima dell'uso, aggiungere la quantità specificata di etanolo anidro Tampone di lavaggio 1come indicato sull'etichetta della bottiglia. Contrassegnare un segno di spunta sull'etichetta per indicare l'aggiunta di etanolo anidro.
C. Il tampone di eluizione è un0.1x soluzione TEcontenente quantità minime di EDTA. Se l'EDTA potrebbe influenzare gli esperimenti successivi, è consigliabile sostituire il tampone di eluizione con acqua deionizzata sterile.
- Gestione dei campioni:
- Campionamento: Prendi un batuffolo di cotone sterilizzato, inserirlo in bocca, strofinare avanti e indietro contro l'interno della guancia per più di 20 volte.
- Usa le forbici per tagliare la testa del batuffolo di cotone, posizionalo in a 2 provetta da centrifuga da ml, e aggiungi 400ml di Reagente Buffer B.
- Aggiungere10µl di proteinasi K (10 mg/ml) e 10μl di RNasi A (10 mg/ml), invertire completamente, incubare a 65°C per 20 minuti, vortice per 10 secondi durante l'incubazione.
- Aggiungere 400ml di Reagente Buffer Cal lisato, vortexare accuratamente.
- Aggiungere 200μl di etanolo assoluto preraffreddato, mescolare bene; possono verificarsi precipitazioni, ma non influenzerà gli esperimenti successivi.
- Trasferire il liquido ottenuto in una colonna di estrazione e purificazione del DNA (kit) (circa 650~700μl ogni volta), centrifugare a >8,000 giri al minuto per 1 minuto, smaltire il liquido di scarto raccolto, e reinserire la provetta di raccolta nella colonna di estrazione e purificazione del DNA (kit) per il passo successivo.
- Posizionare la colonna di estrazione e purificazione del DNA (kit) in un tubo di raccolta, aggiungere 300ml di tampone di lavaggio 1, centrifugare a >8,000 giri al minuto per 1 minuto, eliminare il liquido di scarto, e reinserire la colonna di estrazione e purificazione del DNA (kit) nel tubo per il passaggio successivo.
(Nota: Assicurarsi che l'etanolo assoluto sia stato aggiunto al tampone di lavaggio 1.)
- Aggiungere 500ml di tampone di lavaggio 1alla colonna di estrazione e purificazione del DNA (kit), centrifugare a 14,000 giri/min (20,000× g) per 2 minuti, prolungare opportunamente il tempo di centrifugazione per asciugare ulteriormente la membrana.
- Posizionare la colonna di estrazione e purificazione del DNA (kit) in una nuova provetta da centrifuga, aprire il coperchio, incubare a 65°C per 2 minuti; questa fase può essere opportunamente prolungata per far evaporare il più possibile l'etanolo, impedire che l'etanolo residuo influenzi gli esperimenti a valle.
- Eluire 100μl di tampone di eluizionesulla membrana, centrifugare a 12,000 giri al minuto per 2 minuti.
(Nota: 1. L'eluizione del DNA con 50μl di tampone di eluizione può aumentare la concentrazione del DNA ma diminuire la resa totale del DNA; 2. Il DNA eluito nell'eluato può essere riapplicato alla colonna di estrazione e purificazione del DNA, centrifugare nuovamente a 12,000 giri al minuto per 2 minuti per aumentare la resa del DNA.)
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