Taq DNA Polimerase
Nomor Barang:E001A Spesifikasi:500U/1000U/5000U Storage: Simpan pada suhu -20°C
Perkenalan produk:
This product is Taq DNA Polymerase, commonly referred to as Taq enzyme, which is one of the most widely used DNA polymerases. It is expressed in Escherichia coli with the cloned gene of Thermus aquaticus DNA Polymerase and then purified through multiple steps. Itu PCR products amplified using this product have an added A base at the 3′ akhir, allowing for cloning into T vectors.
Isi produk:
Komponen | E001A-01(500U) | E001A-02(1000U) | E001A-03(5000U) |
Taq DNA Polymerase(5U/µL) | 100μL | 200μL | 1ml |
dNTP Mixture (10mm masing-masing) | 100μL | 200μL | 1ml |
10× PCR Buffer (mg2+ plus)
|
1ml | 2× 1mL | 10× 1mL |
Penyimpanan:
Simpan pada suhu -20°C, dengan umur simpan minimum 12 bulan.
Definisi Aktivitas:
Using activated largemouth bass sperm DNA as a template/primer, the intake of 10 nmol of total nucleotides as acid-insoluble material within 30 minutes at 74°C is defined as 1 unit of activity (kamu).
Kontrol Kualitas:
Produk ini telah menjalani pengujian kualitas dan bebas dari aktivitas endonuklease, aktivitas eksonuklease, dan kontaminasi ribonuklease. DNA genom inang sisa ada di bawah 10 salinan.
Penggunaan Produk:
Amplifikasi DNA menggunakan metode PCR; Penentuan urutan DNA.
Petunjuk Penggunaan:
- Dissolve and mix all required solutions for the PCR reaction and place them on an ice bath or in a cooler. It is recommended to aliquot the PCR reaction mixture to avoid repeated freeze-thaw cycles.
- It is advisable to set up the PCR reaction system on an ice bath or in a cooler, mengikuti sistem reaksi yang direkomendasikan untuk referensi.
- Excessive template DNA can lead to nonspecific PCR products. Recommended template amounts for different types of templates in a 50µL reaction volume are as follows:
Genomic DNA from Animals and Plants: 0.1-1mg;
Genomic DNA from Escherichia coli: 10-100dari;
DNA plasmid: 0.1-10dari.
Sistem Reaksi yang Direkomendasikan:
Reagen | 50μL Volume Sistem | Konsentrasi Akhir |
Taq DNA Polimerase | 1μL | 0.1kamu |
10× PCR Buffer (mg2+ plus) | 5μL | 1× |
dNTP Mixture (10mm masing-masing) | 1μL | 0.2mm masing-masing |
Primer I (10mikron) | 1μL | 0.2mikron |
Primer II (10mikron) | 1μL | 0.2mikron |
Templat DNA | 1μL | — |
ddH2HAI | To 50µL | — |
Catatan: Jumlah masing-masing komponen dalam sistem reaksi dapat disesuaikan dengan kebutuhan sebenarnya.
- Pipet secara menyeluruh dan campur sistem reaksi yang telah disiapkan menggunakan pipet, tutup tabung PCR dengan penutup, beri label dengan tepat, dan sentrifugasi sebentar pada suhu kamar.
- Tempatkan tabung PCR yang telah disiapkan ke dalam mesin PCR, mengatur kondisi reaksi, dan memulai reaksi PCR.
Kondisi Reaksi:
Metode/Langkah | Pengaturan waktu | Siklus |
95℃ (Pra-denaturasi) | 2-5menit | 1 |
95℃ (Denaturasi) | 30detik | 25-35 Siklus |
55℃-60℃ (anil) | 30detik | |
72℃ (Perpanjangan) | 1menit | |
72℃ (Perpanjangan Terakhir) | 10menit | 1 |
4℃ (Hold) | ∞ | — |
Catatan: Kondisi reaksi dapat disesuaikan dan dioptimalkan sesuai dengan kebutuhan sebenarnya.
Tindakan pencegahan:
- Waktu perpanjangan dapat disesuaikan berdasarkan faktor seperti lamanya dan kandungan GC produk PCR. Lamanya waktu perpanjangan per kb produk erat kaitannya dengan kompleksitas template: dibutuhkan template sederhana 20 detik, yang dibutuhkan oleh templat biasa 30 detik, dan templat yang rumit diperlukan 1 menit.
- Pengaturan reaksi PCR harus disesuaikan dengan kondisi yang berbeda seperti templat, primer, panjang produk PCR, dan konten GC. The final concentration of primers typically falls within the range of 0.1-1.0μM. Konsentrasi cetakan DNA dapat disesuaikan. Untuk template yang kompleks atau konten GC tinggi, disarankan untuk memperpanjang waktu pra-denaturasi/denaturasi atau perpanjangan dan meningkatkan suhu denaturasi/anil.
- Gunakan area dan pipet yang ditentukan sebelum dan sesudah amplifikasi, memakai sarung tangan, dan sering-seringlah mengubahnya. Setelah selesai reaksi PCR, jangan langsung membuka tabung reaksi. Biarkan cukup dingin pada suhu 4°C atau -20°C sebelum dibuka untuk meminimalkan risiko kontaminasi produk PCR ke lingkungan laboratorium.
Ulasan
Belum ada ulasan.