Kapasitas antioksidan total (T-AOC) Perangkat Pengujian
Catatan: Ambil dua atau tiga sampel berbeda untuk prediksi sebelum pengujian.
Peralatan Operasi: Spektrofotometer
Kucing No: BC1310
Ukuran：50T/48S
Komponen:
Ekstrak larutan: Cairan 50 mL×1. Penyimpanan pada suhu 4℃, prekool sebelum digunakan.
Reagen I: Cairan 35 mL×1. Penyimpanan pada suhu 4℃.
Reagen II: Cairan 20 mL×1. Penyimpanan di 4 ℃ di Shadow.
Reagen III: Cairan 5 mL×1. Penyimpanan di 4 ℃ di Shadow.
Standar: Bedak×1, 10 mg feso4 · 7h2o. Solusi kerja: menambahkan 0.9 ml air suling dan 20μl asam sulfat pekat (H2SO4) ke bentuk 40 Solusi standar μmol/ml feso4. Campuran larutan (Persiapkan saat solusinya akan digunakan): Reagen I : Reagen II: Reagen III = 7:1:1, Inkubasi pada 37 ℃ sebelum digunakan.
Deskripsi Produk:
Kit ini digunakan untuk mendeteksi kadar antioksidan antioksidan dan enzim antioksidan dalam sampel dalam sampel. Ini terutama digunakan dalam studi biologis, Studi Medis dan Farmasi untuk Mendeteksi Kapasitas Antioksidan Total Solusi Antioksidan.
Di lingkungan asam, Fe3+ -tptz dikurangi menjadi Fe2+ -tptz biru. Reaksi warna mencerminkan kapasitas antioksidan total.
Reagen dan Peralatan Diperlukan tetapi Tidak Disediakan:
Spektrofotometer, Bawah Air Suhu Konstan, sentrifuge suhu rendah, 1 Cuvette kaca ml dan air suling.
Prosedur:
SAYA. Persiapan sampel:
1. Serum, plasma, air liur, atau sampel urin
Plasma (Anticoagulation dengan heparin atau natrium sitrat, Hindari menggunakan EDTA), sentrifugasi di 5000 rpm/mnt untuk 10 menit, Ambil supernatan untuk tes. Ambil serum, sampel air liur atau urin untuk penentuan langsung. Juga, Anda dapat menyimpan di -80 ℃ dan mendeteksi di dalam 30 hari.
2. Sel atau jaringan mencicipi
Mengambil 1-2 juta sel atau 0.1 g tisu, menambahkan 1.0 ML larutan ekstrak. Gunakan homogenat atau ultrasound untuk sepenuhnya memecah sel dan melepaskan antioksidan, sentrifugasi di 10000 r/mnt dan 4 ℃ untuk 5 menit, Ambil supernatan untuk tes. Ukur konsentrasi protein jika diperlukan.
II. Prosedur Penentuan:
- Mencairkan 40 Solusi standar μmol/ml feso4 untuk 0.1, 0.05, 0.025, 0.0125, 0.00625, 0.003125 mol/mL, mengambil 500 μl larutan standar (air suling untuk kontrol kosong), tambahkan ke 500 μl reagen II. Aduk hingga rata 10 menit, mendeteksi absorbansi 593 nm, Hitung ΔA = as-ab. (SEBAGAI: tabung solusi standar, AB: tabung kontrol kosong.) Konsentrasi akhir Fe2+ 0.05、0.025、0.0125、0.00625、
0.003125、0.00156 mol/mL.
- Memanaskan lebih dulu spektrofotometer 30 menit, sesuaikan panjang gelombang ke 593 nm dan atur nol dengan suling
- Tambahkan reagen dengan daftar berikut:
| Nama Reagen | Tabung kosong (AB) | Tabung reaksi (PADA) |
| Campuran larutan (μL) | 900 | 900 |
| Sampel (μL) | 30 | |
| Air suling ganda (μL) | 120 | 90 |
| Aduk rata dan bereaksi 10 menit, atur nol dengan air suling, mendeteksi absorbansi 593 nm. Hitung ΔA ’= at – AB.
(Catatan: Tabung kosong hanya perlu diuji sekali atau dua kali dalam setiap percobaan) |
||
AKU AKU AKU. Perhitungan:
- Buat kurva standar
Ambil konsentrasi akhir Fe2+ sebagai sumbu x, △ a sebagai y-sumbu, Buat kurva standar, Dapatkan persamaan regresi linier y = kx+ b, ambil ΔA’ ke dalam persamaan untuk mendapatkan x (mol/mL).
- Definisi satuan: Kapasitas antioksidan sampel ditunjukkan oleh konsentrasi ion cair standar yang diperlukan untuk perubahan absorbansi yang sama(ΔA).
A. Protein konsentrasi:
Kapasitas antioksidan total (μmol/mg prot) = x × vrv ÷ (Vs × CPR) = 34 × x ÷ CPR
B. Sampel berat
Kapasitas antioksidan total (μmol/g berat) = x × vrv ÷ (Vs ÷ vsv × w) = 34 × x ÷ w
C. Sel jumlah
Kapasitas antioksidan total (μmol/104cell) = x × vrv ÷ (VS × VSV ÷ n) = 34 × x ÷ n
D. Larutan volume
Kapasitas antioksidan total (mol/mL) = x × vrv ÷ vs = 34 × x
Tali: volume reaksi total, 1.02 ml; Vs: volume sampel, 0.03 ml;
Vsv: volume ekstraksi, 1 ml; W: Berat sampel, G;
Cpr: Konsentrasi protein sampel, mg/mL;
N: jumlah sel, unit berdasarkan 104 (sepuluh ribu).
Catatan:
- Reagen II kesal pada tubuh manusia, Tolong kenakan pakaian lab dan lateks
- Sampel tidak boleh tampak biru dalam kondisi asam, atau itu akan mengganggu hasil sampel dari
- Deterjen seperti tween, Triton, NP-40 dan reduktan seperti DTT, Mercapto etanol tidak boleh ditambahkan di
- Jika nilai absorbansi yang ditentukan oleh sampel berada di luar kisaran kurva standar, Sampel harus diencerkan atau terkonsentrasi dengan benar sebelumnya
- Kit harus disimpan pada 2-8 ℃.
Contoh:
- Tambahkan 0,1g shamrock ke larutan ekstrak 1ml dan giling di atas es secara menyeluruh, Ambil supernatan, Ikuti prosedur penentuan untuk beroperasi, dengan pelat datar 96-well untuk menghitung: ΔA = a(T)-A(B)= 0,909-0.148 = 0,761, Kurva standar: y = 21.056x-0.0087, Hitung x = 0,037, Menurut massa sampel untuk menghitung total kapasitas antioksidan (massa μmol/g) = 34 × X ÷ W = 34 × 0,037 ÷ 0,1 = 12,85 μmol/g massa.
Referensi：
[1] Pellegrini N, Serafini m, Salvatore s, dkk. Total kapasitas antioksidan rempah -rempah, Buah kering, gila,
pulsa, sereal, dan permen yang dikonsumsi di Italia dinilai dengan tiga tes in vitro yang berbeda[J]. Nutrisi Molekuler & Penelitian Makanan, 2006, 50(11): 1030-1038.
Produk-produk terkait:
BC1320/BC1325 Hydroxyl Radical Scavenging Capasity Assay Kit
BC1330/BC1335 Tanaman Flavonoids Assay Kit
BC1340/BC1345 Total Fenol (Tp)Perangkat Pengujian
BC1350/BC1355 Plant Proanthocyanidins Assay Kit
Ulasan
Belum ada ulasan.