Solarbio Superoksida Dismutase (MERUMPUT) Kit Uji Aktivitas

Superoksida Dismutase (MERUMPUT) Kit Uji Aktivitas

Catatan: Hal ini perlu untuk diprediksi 2-3 perbedaan sampel yang besar sebelum penentuan formal.

Peralatan Operasi: Spektrofotometer

Kucing No: SM0170

Ukuran: 50T/24S

Komponen:

Reagen ekstraksi: 60 mL×1. Penyimpanan pada suhu 4℃.

Reagen Ⅰ: 15 mL×1. Penyimpanan pada suhu 4℃.

Reagen Ⅱ: 160 μL×1. Penyimpanan pada suhu 4℃. Campur dengan memipet setelah sentrifugasi.

Reagen Ⅲ: 11 mL×1. Penyimpanan pada suhu 4℃.

Reagen Ⅳ: Bedak×1. Penyimpanan pada suhu 4℃.

Reagen V: 2 mL×1. Penyimpanan pada suhu 4℃. Tambahkan Reagen Ⅳ ke Reagen V sebelum digunakan dan kocok dengan osilator agar tercampur rata. Itu bisa disimpan 3 bulan.

Deskripsi Produk:

Superoksida dismutase (MERUMPUT, EC 1.15.1.1) banyak ditemukan pada hewan, tanaman, mikroorganisme dan sel yang dikultur. Ini mengkatalisis anion superoksida untuk membentuk H2O2 dan O2. SOD bukan hanya enzim pemulung anion superoksida, tetapi juga enzim penghasil H2O2 utama, yang memainkan peran penting dalam sistem antioksidan biologis.

Anion superoksida (O2-) diproduksi oleh sistem reaksi xantin dan xantin oksidase. O2- dapat mereduksi tetrazol biru menjadi formazan biru, yang mempunyai daya serap di dalamnya 560 nm. SOD dapat menghilangkan O2- dan menghambat pembentukan metionin. Semakin gelap warna biru larutan reaksi, semakin rendah aktivitas SOD. Semakin terang warna biru larutan reaksi, semakin tinggi aktivitas SOD.

Reagen dan Peralatan Diperlukan tetapi Tidak Disediakan:

Spektrofotometer, mesin sentrifugal meja, pipet transfer, 1 mL kuvet kaca, mortir/homogenizer, es dan air suling.

Langkah-langkah operasi:

SAYA. Persiapan sampel:

1. Bakteri atau sel: mengumpulkan bakteri atau sel ke dalam tabung centrifuge, buang supernatan setelah sentrifugasi. Menurut proporsi bakteri atau sel (104 sel): volume larutan ekstraksi (ml) dari 1:5-10 untuk mengekstrak. Disarankan demikian 5 juta bakteri atau jumlah sel dengan 1mL reagen Ekstraksi. Memisahkan bakteri atau sel dengan ultrasonikasi (ditempatkan di atas es, daya ultrasonik 200W atau 20%, waktu kerja 3 detik, interval 10 detik, ulangi untuk 30 waktu). Sentrifugasi di 8000 ×g untuk 10 menit pada suhu 4℃ untuk menghilangkan bahan yang tidak larut, dan mengambil supernatan di atas es sebelum pengujian.
2. Jaringan: sesuai dengan proporsi berat jaringan (G): volume larutan ekstraksi (ml) dari 1:5-10 untuk mengekstrak. Disarankan demikian 0.1 g jaringan dengan 1 mL reagen Ekstraksi dan dihomogenisasi sepenuhnya di atas es.
3. Sentrifugasi di, 8000 ×g untuk 10 menit pada suhu 4℃ untuk menghilangkan bahan yang tidak larut, dan mengambil supernatan di atas es sebelum pengujian.
4. Serum (plasma) mencicipi: mendeteksi sampel secara langsung.

II. Tekad prosedur:

1. Panaskan terlebih dahulu spektrofotometer untuk 30 menit, sesuaikan panjang gelombang ke 560 nm dan atur nol dengan air suling.
2. Simpan Reagen Ⅰ, Reagen Ⅲ, Reagen V dalam penangas air lebih dari 5 menit pada 37℃(mamalia) atau

25℃ (spesies lain).

3. Tambahkan reagen dengan daftar berikut:

Aduk rata dan campuran diinkubasi pada suhu kamar selama 30 menit. Tambahkan campuran ke dalam kuvet kaca 1mL, dan mendeteksi nilai serapan masing-masing tabung pada 560 nm. ΔAT=AT-AC，ΔAB=AB1-AB2. Jika ada curah hujan di bagian bawah, aduk rata lalu ukur.

AKU AKU AKU. Perhitungan:

1. Persentase penghambatan:

Persentase penghambatan=[ΔAB-ΔAT]ΔAB× 100%

Persentase penghambatan harus dalam 30% ~ 70% (nilainya mendekati 50% akan mendapatkan hasil yang lebih akurat). Jika persentase penghambatan yang dihitung kurang dari 30% atau lebih dari 70%, biasanya jumlah penambahan sampel perlu disesuaikan dan ditentukan kembali. Jika persentase penghambatan terlalu tinggi, sampel harus diencerkan dengan benar. Jika persentase penghambatan terlalu rendah, sampel harus disiapkan ulang dengan konsentrasi yang lebih tinggi.

2. Definisi satuan: Satu unit aktivitas enzim didefinisikan sebagai jumlah enzim yang mengkatalisis penghambatan 50% dalam sistem reaksi xantin di atas
3. Perhitungan

A. Serum (plasma)mencicipi

MERUMPUT (U/mL)=[P(1-P)×Vrv]Vs×F=11,4×P(1-P)×F

B. Jaringan, bakteri atau sel yang dikultur

A) Konsentrasi protein:

MERUMPUT (U/mL keuntungan) = [P(1-P)×Vrv]−(Vs×Cpr)×F=11,4×P(1-P)−Cpr×F

B) Berat sampel

MERUMPUT (berat U/g) = [P(1-P)×Vrv]−(W×Vs^Vsv)×F=11,4×P(1-P)−W×F

C) Bakteri atau jumlah sel

MERUMPUT (sel U/104)=[P(1-P)×Vrv]−(500×Vs^Vsv)×F=0,0228×P(1-P)×F

Tali: Volume reaksi total, 1.026 ml; Vs: Volume sampel, 0.09 ml;

Vsv: Volume ekstraksi, 1 ml;

Cpr: Konsentrasi protein sampel, mg/mL; W: Berat sampel, G;

500: Jumlah total bakteri dan sel, 5 juta. P: Persentase penghambatan, %;

F: Pengenceran sampel berganda.

Catatan:

1. Sampel dan Reagen Ⅱ harus diletakkan di atas es bila
2. Ketika ada banyak sampel, solusi kerja (termasuk Reagen I, II dan III) dapat dikonfigurasi sesuai tabel. Reagen V harus ditambahkan
3. Setelah reaksi selesai, mungkin ada presipitasi yang terbentuk, yang dapat ditentukan setelahnya

Contoh Eksperimental:

1. 1 g Echinochloa crusgalli ditambahkan ke dalamnya 1 mL reagen Ekstraksi untuk homogenisasi. Setelah supernatannya diambil, Pengoperasiannya dilakukan sesuai dengan langkah-langkah penentuan. Hasil penelitian menunjukkan bahwa ΔAT = AT – AC = 0.335-0.012 = 0.323, ΔAB = AB1 – AB2 = 0.957-0.003 = 0.954. Persentase penghambatan = (ΔAB- ΔDI)ΔAB × 100% = 72%, dan aktivitas enzim dihitung berdasarkan massa sampel.

aktivitas SOD (massa U/g) = 11.4 × Persentase penghambatan (1-Persentase penghambatan) × L = 293.14 massa U/g.

2. 1 mL reagen Ekstraksi ditambahkan ke 0.1 g limpa tikus untuk homogenisasi. Setelah supernatannya diambil, Pengoperasiannya dilakukan sesuai dengan langkah-langkah penentuan. Hasil penelitian menunjukkan bahwa ΔAT= AT- AC = 0.563-0.213 = 0.35, ΔAB= AB1- AB2= 0.957-0.003 = 0.954, persentase penghambatan = (ΔAB-ΔAT)ΔAB×100% =31%

aktivitas SOD (massa U/g) = 11.4 × Persentase penghambatan (1-Persentase penghambatan) ×W = 196.71 massa U/g.

3. 10 juta sel diekstraksi dan disentrifugasi dengan menambahkan 1 mL reagen Ekstraksi, dan kemudian operasi dilakukan sesuai dengan langkah-langkah penentuan. Hasilnya adalah sebagai berikut: ΔDI = DI – AC=614-0,015 = 0.599, ΔAB= AB1- AB2= 0.944-0.005 = 0.939, persentase penghambatan = (ΔAB- ΔDI) ×ΔAB× 100% = 36.21%

aktivitas SOD (sel U/104) = Persentase penghambatan ÷ (1-Persentase penghambatan)× VTS]−(1000× VS ™ VTS) = 0.0065 sel U/104.

Referensi:

• Spitz DR, Oberley L W. Uji aktivitas superoksida dismutase pada homogenat jaringan mamalia[J]. Biokimia Analitik, 1989,179(1):8-18.
• Masayasu M, Hiroshi Y. Metode pengujian aktivitas superoksida dismutase yang disederhanakan untuk penggunaan klinis[J]. Klinik Chimica Acta, 1979,92(3):337-342.

Produk-produk terkait:

BC0190/BC0195 Polifenol Oksidase (PPO) Kit Uji Aktivitas

BC0210/BC0215 Fenilalnin Ammonialyase (SAHABAT) Kit Uji Aktivitas

BC0200/BC0205 Katalase (KUCING) Kit Uji Aktivitas

BC0090/BC0095 Peroksidase (POLONG) Kit Uji Aktivitas