Peroksidase (POLONG) Kit Uji Aktivitas

Catatan: Ambil dua atau tiga sampel berbeda untuk prediksi sebelum pengujian.

Peralatan Operasi: Spektrofotometer Nomor Katalog: BC0090 Ukuran：50T/48S

Komponen:

Ekstrak larutan: 60 mL×1. Penyimpanan pada suhu 4℃.

Reagen I: 40 mL×1. Penyimpanan pada suhu 4℃.

Reagen II: 0.5 Ml × 1. Penyimpanan pada suhu 4℃. Centrifuge sebelum digunakan. Mengambil 0.22 ML reagen II dan tambahkan 3.33 ML reagen i, Campur untuk digunakan nanti (sekitar 27t). Persiapkan untuk segera digunakan, atau dapat disiapkan secara proporsional sesuai dengan volume sampel.

Reagen III: 10 mL×1. Penyimpanan pada suhu 4℃.

Deskripsi Produk

Peroksidase (POLONG, EC 1.11.1.7) Secara luas ada pada hewan, tanaman, dan mikroorganisme. Itu dapat mengkatalisasi oksidasi fenol dan amina oleh hidrogen peroksida, dan memiliki efek ganda dari menghilangkan toksisitas hidrogen peroksida, fenol, dan amina. Di hadapan hidrogen peroksida, POD dapat mengkatalisasi H2O2 mengoksidasi substrat spesifik untuk menghasilkan satu zat yang memiliki penyerapan pada 470 nm.

Reagen dan Peralatan Diperlukan tetapi Tidak Disediakan

Spektrofotometer, mesin sentrifugal meja, TransferPettor, 1 mL kuvet kaca, mortir/homogenizer, es dan air suling.

Prosedur

SAYA. Persiapan sampel:

A. Bakteri atau sel

Mengumpulkan bakteri atau sel ke dalam tabung centrifuge, Supernatan dibuang setelah sentrifugasi. Disarankan untuk mengambil alih 5 juta bakteri/sel dan tambahkan 1 ML larutan ekstrak. Bakteri atau sel dipisahkan dengan ultrasonication (Kekuatan: 20% atau 200 W, Waktu kerja 3s, interval 10 detik, ulangi untuk 30 waktu). Sentrifugasi di 8000 rpm dan 4 ℃ untuk 10 menit, Supernatan digunakan untuk tes.

B. Jaringan

Disarankan untuk mengambil alih 0.1 g jaringan dan tambahkan 1 ML larutan ekstrak, sepenuhnya digiling di atas es.

Sentrifugasi di 8000 rpm untuk 10 menit pada 4 ℃, Supernatan digunakan untuk tes.

C. Serum (plasma) mencicipi: Mendeteksi sampel

II. Tekad prosedur

1. Panaskan spektrofotometer untuk 30 menit, sesuaikan panjang gelombang ke 470 nm, atur nol dengan sulingan
2. Tempatkan reagen i, Reagen II dan Reagen III di 37 ℃ (mamalia) atau 25℃(spesies lain) untuk 10 menit sebelumnya
3. Tambahkan reagen dengan daftar berikut:

Reagen di atas ditambahkan ke 1 Cuvette kaca ml secara berurutan, segera dicampur dan waktunya. Nilai absorbansi a1 untuk 30 S dan A2 untuk 90 -an di 470 NM direkam, ΔA ＝ A2-A1.

AKU AKU AKU. Perhitungan

SAYA. Serum (plasma)mencicipi

Definisi satuan: Satu unit aktivitas enzim didefinisikan sebagai jumlah enzim mengkatalisasi absorbansi 0.01 berubah di 470 nm dalam sistem reaksi per menit setiap mililiter serum (plasma).

POLONG(U/mL)= ΔA × VRV ÷ VSV ÷ 0,01 ÷ t = 7133 × ΔA

II. Jaringan, bakteri atau sel kultur

A. Konsentrasi protein

Definisi satuan: Satu unit aktivitas enzim didefinisikan sebagai jumlah enzim mengkatalisasi absorbansi 0.01 berubah di 470 nm dalam sistem reaksi per menit setiap protein miligram.

POLONG(U/mg keuntungan)＝ ΔA × VRV ÷(VSV × CPR)÷ 0,01 ÷ t = 7133 × ΔA ÷ CPR

B. Berat sampel

Definisi satuan: Satu unit aktivitas enzim didefinisikan sebagai jumlah enzim mengkatalisasi absorbansi 0.01 berubah di 470 nm dalam sistem reaksi per menit setiap jaringan gram.

POLONG(U/g berat segar)＝ ΔA × VRV ÷(W × VSV ÷ vs.)÷ 0,01 ÷ t = 7133 × Δa ÷ w

C. jumlah sel

Definisi satuan: Satu unit aktivitas enzim didefinisikan sebagai jumlah enzim mengkatalisasi absorbansi 0.01 berubah di 470 nm dalam sistem reaksi per menit setiap 10 ribuan bakteri atau sel.

POLONG(sel U/104)＝ ΔA × VRV ÷(500× VSV ÷ vs.)÷ 0,01 ÷ t = 14,27 × ΔA

Tali: Volume reaksi total, 1.07 ml; Vsv: Total volume supernatan, 0.015 ml; Vs: Ekstrak volume solusi, 1 ml;

T: Waktu reaksi, 1 menit;

Cpr: Konsentrasi protein sampel, mg/mL; W: Berat sampel, G;

500: Jumlah total bakteri atau sel, 5 juta.

Catatan:

1. Jika ada banyak sampel yang harus ditentukan pada satu waktu, campuran reagen i, II, III dan air suling dapat disiapkan secara proporsional, dan campuran dapat ditempatkan pada 37 ℃ (mamalia) atau 25℃ (spesies lain) lebih dari 10 menit. 15 μL sampel dan 1055 μl campuran dapat ditambahkan untuk ditentukan.
2. Jika Δa kurang dari 0.005, Waktu reaksi dapat diperluas ke 5 menit. Jika ΔA lebih besar dari 0.5 atau ada lebih banyak gelembung dalam larutan reaksi, Sampel dapat diencerkan dengan ekstrak dan ditentukan, dan rumus perhitungan dikalikan dengan pengenceran yang sesuai.
   

   Referensi

   • R . Aktivitas peroksidase sebagai penanda biokimia untuk resistensi muskmelon ( Melo mentimun ) ke Pseudoperonospora cubensis[J]. Fitopatologi, 1992,82(7).
   • DOERGE D R. , Divi r l , Churchwell m i . Identifikasi produk oksidasi guaiacol berwarna yang diproduksi oleh peroksidase[J]. Biokimia Analitik, 1997,250(1):10-17.

   Produk-produk terkait

   BC0190/BC0195 Polifenol Oksidase (PPO) Kit Activity Assay Kit BC0210/BC0215 Phenylalanine Ammonia Lyase (SAHABAT) Kit Assay Aktivitas BC0170/BC0175 Superoksida Dismutase (MERUMPUT) Kit Assay Aktivitas BC0200/BC0205 Catalase (KUCING) Kit Uji Aktivitas