Solarbio Glutathione Teroksidasi (GSSG) Kit Pengujian Konten

Glutathione teroksidasi (GSSG) Kit Pengujian Konten

Catatan: Ambil dua atau tiga sampel berbeda untuk prediksi sebelum pengujian.

Peralatan Operasi: Spektrofotometer/pembaca lempeng mikro

Nomor Katalog: BC1185

Ukuran:100T/96S

Komponen:

Reagen I:100 mL×1. Penyimpanan pada suhu 4℃. Reagen II: 130 μL×1. Penyimpanan pada suhu 4℃. Reagen III: 20 mL×1. Penyimpanan pada suhu 4℃. Reagen IV:2.5 mL×1. Penyimpanan pada suhu 4℃.

Reagen V: Bubuk × 1. Penyimpanan pada suhu 4℃. Larutkan dengan 2.5 ml air suling saat larutan akan digunakan, Kemudian dibagi menjadi paket yang lebih kecil, Simpan di -20 ℃.

Reagen VI:12.5 μL×1. Penyimpanan pada suhu 4℃. Siapkan reagen VI dan air suling sesuai dengan ukuran sampel pada rasio 1:20 (V: V) sebelum digunakan.

Standar: Bubuk 10 mg × 1. Penyimpanan pada suhu 4℃.

Deskripsi Produk

Glutathione teroksidasi(GSSG) adalah bentuk glutathione yang teroksidasi (GSH), juga dikenal sebagai Dithioneglutathione, dibentuk oleh oksidasi dua molekul glutathione. GSSG direduksi menjadi GSH oleh glutathione reductase, Jadi sebagian besar tubuh dalam bentuk tereduksi. Penentuan konten GSH dan GSSG dan rasio GSH/GSSG dalam sel dapat mencerminkan status redoks sel. Kit ini memanfaatkan reaksi glutathione dan 5, 5′-Asam Dithiobis-2-Nitrobenoic (Dtnb) untuk menghasilkan 5-thio-2- Asam Nitrobenzoat. 5-thio-2- asam nitrobenzoat memiliki penyerapan terbesar pada panjang gelombang 412 nm, dan 2-vinylpyridine menghambat penurunan glutathione dalam sampel asli, dan kemudian menggunakan glutathione reductase untuk mengurangi GSSG ke GSH, menentukan kandungan glutathione teroksidasi.

Spesifikasi teknis

Batas deteksi minimum：3.211 μg/ml

Rentang linier：3.9-125 μg/ml

Reagen dan Peralatan Diperlukan tetapi Tidak Disediakan.

Keseimbangan analitik, mortir/homogenizer, Centrifuge yang didinginkan, pemandian air, pipet yang dapat disesuaikan, Spectrophotometer/ Microplate Reader, kuvet kaca mikro/pelat dasar datar sumur 96.

Prosedur

SAYA. Sampel persiapan

1. 1. Sampel jaringan

Cuci jaringan segar dengan PBS untuk dua kali, lalu tambahkan 0.1 g sampel ke dalam homogenizer (Homogenizer telah dibilas dengan reagen I dan ditempatkan di atas es sebelum digunakan). Menambahkan 1 mL Reagen I (Proporsi jaringan dan reagen dapat tetap konstan), sepenuhnya digiling di atas es (Menggunakan nitrogen cair akan memiliki efek penggilingan yang lebih baik). Sentrifugasi di 8000 × g dan 4 ℃ untuk 10 menit, Ambil supernatan dan tempatkan di 4 ℃ untuk tes. (Supernatan dapat disimpan di -80 ℃ untuk 10 hari -hari)

2. Contoh darah

Plasma: Sampel disentrifugasi 600 × g dan 4 ℃ untuk 10 menit. Menyerap plasma atas ke dalam tabung lain Tambahkan dengan reagen volume yang sama i. Sentrifugasi di 8000 × g dan 4 ℃ untuk 10 menit, Ambil supernatan dan tempatkan di 4 ℃ untuk tes. (Supernatan dapat disimpan di -80 ℃ untuk 10 hari -hari)

Sel darah:Sampel disentrifugasi 600 × g dan 4 ℃ untuk 10 menit. Membuang plasma atas, Cuci dengan volume treble PBS untuk 3 waktu (Campur sel darah dengan sentrifuge PBS di 600 ×g untuk 10 menit), Tambahkan volume reagen yang sama i. Setelah dicampur, itu ditempatkan pada 4 ℃ untuk 10 menit. Sentrifugasi di 8000 ×g untuk 10 menit, Ambil supernatan dan tempatkan di 4 ℃ untuk tes. (Supernatan dapat disimpan di -80 ℃ untuk 10 hari -hari)

3. Sampel sel

Sel panen tidak boleh kurang dari 106, lalu cuci dengan PBS untuk dua kali (Campur sel dengan PBS centrifuge pada 600 × g untuk 10 menit), Campur sel yang diendapkan dengan volume PBS untuk 3 waktu. Pembekuan dan pencairan berulang 2–3 kali (Sarankan beku dalam nitrogen cair, Dilarahkan dalam 37 ℃ Air Bath). Sentrifugasi di 8000 ×g untuk 10 menit, Ambil supernatan dan tempatkan di 4 ℃ untuk tes. (Supernatan dapat disimpan di -80 ℃ untuk 10 hari -hari)

II. Prosedur

1. Pemanasan lebih cepat spektrofotometer/pembaca mikro untuk 30 menit, sesuaikan panjang gelombangnya 412 nm, Atur penghitung ke nol dengan suling
2. Panaskan Reagen II dalam penangas air untuk 30 menit: 37℃ (sel mamalia) atau 25℃ (spesies lain).
3. Pengenceran standar: Larutkan standar dengan 1 mL air suling (4℃) untuk konsentrasi 10 mg/mL. Ambil solusi yang cocok untuk menyiapkan standar konsentrasi 125μg/mL、 5μg/ml、31.25μg/ml、15.625μg/ml、7.8125μg/ml、3.90625μg/mland0μg/ml (Pengencer adalah reagen encer sepuluh kali lipat i).

4. Menambahkan 20 μl standar atau sampel encer 0.5 Tabung Centrifuge ML, menambahkan 1 μl reagen II, Inkubasi di 37 ℃ untuk 30 menit setelah pencampuran.
5. Membuat kurva standar

Setelah inkubasi, menambahkan 140 μl reagen III, 20 μL Reagen IV, 20μl reagen v, Dan 2 μl reagen VI ke tabung standar secara berurutan. Setelah pencampuran cepat, penyerapan cahaya A1 dan A2 dari 30 pasir 150 S masing -masing diukur 412 nm. Absorbansi (A2-A1) adalah absis (X) dan konsentrasi adalah ordinat (kamu), membuat kurva standar.

Menambahkan 140 μl reagen III, 20 μL Reagen IV, 20 μl reagen v, Dan 2 μlof Reagen VI ke tabung sampel secara berurutan. Setelah pencampuran cepat, penyerapan cahaya A1 dan A2 dari 30 pasir 150 S masing -masing diukur 412 nm, ΔA = A2- A1.

AKU AKU AKU. Perhitungan

Menurut kurva standar, Sampel Δa ke dalam rumus (X), Hitung konsentrasi sampel y

(μg/ml).

• Konsentrasi protein

GSSH (μg / mg prot)= Y × VRV ÷ VRV ÷ CPR = Y ÷ CPR

• Berat sampel

GSSH (μg /g)= Y × VRV ÷(VRV ÷ VSV × W.)= y ÷ w

• jumlah sel

GSSH (μg /106 sel)= Y × VRV ÷(VRV ÷ VSV × N.)= y ÷ n

• Volume Solusi

GSSH (μg / ml)= y × vrv/vs = 2y

N: Jumlah sel,106；

Tali: Volume reaksi total, 0.203 ml；

Vsv: Volume supernatan ditambahkan ke dalam sistem reaksi, 20 μl = 0,02 mL； W: Berat sampel, G;

Cpr: Konsentrasi protein supernatan, mg/mL.

Catatan:

1. Sampel harus dihomogenisasi sepenuhnya. Jika tes tidak dapat diselesaikan sementara, itu dapat disimpan di-80 ℃.
2. Jika konten konten GSSG dalam sampel tidak pasti, Beberapa gradien dapat diencerkan sebelum pengukuran.
3. Metode ini menggunakan laju reaksi enzimatik untuk menghitung konsentrasi substrat dan pembacaan lengkap seakurat mungkin di 30 Dan 150
4. Reagen saya mengandung protein endapan, Supernatan tidak dapat digunakan untuk penentuan konsentrasi protein. Jika kandungan protein perlu ditentukan, Ambil jaringan lain.

Referensi:

• Alpert A J., Gilbert H f. Deteksi glutathione yang teroksidasi dan berkurang dengan reaksi pasca kolom daur ulang[J]. Biokimia analitik, 1985, 144(2):553-562.
• Owens C W I, Belcher r Metode mikro kolorimetri untuk penentuan glutathione[J]. Jurnal Biokimia, 1965, 94(3): 705.

Produk-produk terkait：

BC1170/ BC1175 Mengurangi Glutathione （GSH） Kit Assay

BC1190/ BC1195 Glutathione Peroxidase Assay Kit

BC0350/ BC0355 Glutathione S-Transferase(GST) Kit Uji Aktivitas

BC1160/ BC1165 Glutathione reductase (Gr) Perangkat Pengujian