Solarbio Hidroksiprolin (HIP) Kit Uji Aktivitas

Hidroksiprolin (HIP) Kit Uji Aktivitas

Catatan: Ambil dua atau tiga sampel berbeda untuk prediksi sebelum pengujian.

Peralatan deteksi: Spectrophotometer/Microplate Reader

Kucing No: BC0255

Ukuran: 100T/96S

Komponen:

Ekstrak larutan: 6 Mol/L asam klorida (Hcl), Reagen yang disediakan sendiri. HCl pekat （37%） : H2O(V/v) =1:1, disimpan pada suhu kamar.

Reagen I: 8 mL×1, Simpan di 4 ℃ dan lindungi dari cahaya. Reagen II: 8 mL×1, Simpan di 4 ℃ dan lindungi dari cahaya. Standar: 0.5 mL×1, 0.5 mg/ml hidroksiprolin, Simpan di 4 ℃.

Keterangan:

Hyp adalah salah satu komponen utama kolagen dalam tubuh. Sebagian besar kolagen didistribusikan di kulit, urat daging, tulang rawan, dan pembuluh darah dkk. Karena itu, Kandungan hyp adalah indeks penting yang mencerminkan metabolisme dan tingkat fibrosis jaringan kolagen.

Sampel dihidrolisis untuk menghasilkan hyp gratis, yang selanjutnya dioksidasi oleh kloramin T. Produk teroksidasi yang bereaksi dengan p-dimethylaminobenzaldehyde untuk menghasilkan senyawa merah dengan puncak penyerapan karakteristik di 560 nm. Kandungan hyp dapat dihitung dengan mengukur nilai penyerapan sampel hidrolisat pada 560 nm.

Diperlukan tetapi tidak disediakan:

Timbangan, oven, tabung kaca, alat sentrifugal, mandi air, Spectrophotometer/Microplate Reader, Piring Cuvette Kaca Mikro/96-Well, 6 Mol/L HCl dan air suling.

Prosedur:

SAYA. Persiapan sampel

1. 1. Sampel jaringan:

Beratnya 0.2 g sampel ke dalam tabung gelas, Potong jaringan menjadi potongan sebanyak mungkin untuk pencernaan. Menambahkan 2 ml larutan ekstrak dan penutupnya sedikit longgar dan tidak kedap udara, rebus atau panggang dalam oven 110 ℃ 2 ke 6 berjam -jam untuk mencernanya sampai tidak ada benjolan besar yang terlihat.

Setelah dingin, Sesuaikan pH ke 6-8 dengan 10 mol/L NaOH (Jangan berlebihan atau lebih dari alkali) lalu volume konstan ke 4 ML dengan air suling. Sentrifugasi di 16000 rpm untuk 20 menit pada 25 ℃ (Jika masih ada pengotor setelah sentrifugasi, itu dapat dihapus dengan penyaringan).

Ambil supernatan untuk tes. (Zat hitam dapat dibentuk dalam proses, dan jika tidak dapat dicerna untuk waktu yang lama, itu mungkin zat berkarbonisasi. Itu tidak mempengaruhi percobaan).

2. Sel:

Mengambil 5 juta sel, menambahkan 1 ML larutan ekstrak, mendidihkan, atau oven pada 110 ℃ untuk 2 ke 6 berjam -jam untuk mencerna keadaan transparan.

Setelah dingin, Sesuaikan pH ke 6-8 dengan 10 mol/L NaOH (Jangan berlebihan atau lebih dari alkali) lalu volume konstan ke 2 ML dengan air suling. Sentrifugasi di 16000 rpm untuk 20 menit pada 25 ℃ (Jika masih ada pengotor setelah sentrifugasi, itu dapat dihapus dengan penyaringan).

Ambil supernatan untuk tes.

II. Deteksi

1. Pemanasan lebih cepat spektrofotometer/pembaca mikro untuk 30 menit, sesuaikan panjang gelombang ke 560 nm dan atur nol dengan suling
2. Encerkan solusi standar 30, 15, 7.5, 3.75, 1.875, 0.938, 0.469, 0.234 μg/ml.
3. Tambahkan reagen sebagai tabel berikut.

Aduk rata, Inkubasi pada 60 ℃ untuk 20 menit, Biarkan pada suhu kamar untuk 15 menit, Ambil 200μl larutan reaksi ke dalam cuvette kaca mikro/96 pelat sumur datar dan uji nilai absorbansi AT 560 nm. ΔA = at – AB.

AKU AKU AKU. Perhitungan

1. Membuat standar

Saat membuat kurva standar, Konsentrasi larutan standar diambil sebagai sumbu x, dan ΔAs (ΔAs = as-ab) diambil sebagai sumbu y. Persamaan linier y = kx+b diperoleh. Ambil Δat (At-ab) ke persamaan untuk mendapatkan x.

2. Perhitungan konten hidroksiprolin:dihitung sesuai dengan berat segar sampel:

Konten Hydroxyproline Jaringan (μg/g berat segar) = x × vs ÷(W × vs ÷ vte) = 4x ÷ w.

• Dihitung sesuai dengan konsentrasi protein sampel:

Konten Hydroxyproline Jaringan (μg/mg prot) = x × vs ÷(CPR × Vs.) = x ÷ CPR.

• Dihitung sesuai dengan jumlah bakteri Orcells:

Konten Hydroxyproline Sel (μg/104 sel) = x × vs ÷(N × vs ÷ vce )= 2x ÷ n.

Vs.: Volume sampel tambahan, 0.06 ml;

Vte: Volume larutan ekstrak jaringan, 4 ml; Vce: Volume larutan ekstrak sel, 2 ml;

W: Berat sampel segar, G;

N: Jumlah sel,104 sebagai unit, 10000;

Cpr: Konsentrasi protein sampel, mg/mL.

Catatan

1. Jika nilai OD lebih besar dari 1.0, Sampel harus diencerkan dengan benar dan kemudian ditentukan. Perhatikan melipatgandakan kelipatan pengenceran dalam rumus perhitungan.
2. Reagen memiliki toksisitas tertentu. Harap ambil tindakan perlindungan selama operasi untuk mencegah inhalasi atau kontak dengan kulit.
3. Saat menghitung sesuai dengan konsentrasi protein sampel, Protein dalam sampel itu sendiri perlu diekstraksi secara terpisah dan ditentukan.

Contoh eksperimental

• 0.2G kaki tikus diambil untuk perawatan sampel, dan supernatan dikeluarkan dan dioperasikan sesuai dengan langkah penentuan. Δa = at-ab = 0.177-0.06 = 0.117 diukur oleh 96 piring sumur, dan kurva standar y = 0,0383x + 0.022 dibawa masuk, dan x = 2.48 adalah

Isi hidroksiprolin dalam jaringan (massa μg/g) = 4x ÷ w = 4 × 2.48 − 0.2 = 49.6 massa μg/g.

Kutipan Produk Terbaru

• Penggemar Litong,Jiaqing Chen,Yanmeng Tao,dkk. Peningkatan diferensiasi chondrogenic sel induk mesenchymal dan perbaikan tulang rawan oleh ghrelin. Jurnal Penelitian Ortopedi. Januari 2019;(IF3.043)

Produk-produk terkait

BC1550/BC1555 glutamic-pyruvic transaminase (GPT) Kit Activity Assay BC1560/BC1565 GLUTAMIC-oksalasetat transaminase (TELAH MENDAPATKAN) Kit Activity Assay BC0290/BC0295 Proline (PRO) Kit Pengujian Konten

BC1570/BC1575 Asam Amino (A A) Kit Uji Konten BC0180/BC0185 Cysteine (Cys) Kit Uji Konten BC1580/BC1585 Glutamic Acid (Glu) Kit Pengujian Konten

Spesifikasi teknis:

Batas deteksi: 0.057 μg/ml

Rentang linier: 0.117-30 μg/ml