Perkenalan
- Karakteristik Proteinase K:
- Protease serin stabil dengan spesifisitas substrat yang luas.
- Menguraikan banyak protein dalam keadaan aslinya bahkan dengan adanya deterjen.
- Tidak diaktifkan oleh ion logam, agen pengkelat (misalnya, EDTA), pereaksi sulfhidril, atau inhibitor trypsin atau chymotrypsin.
- Stabil pada rentang pH yang luas (4-12.5), dengan aktivitas optimal pada pH 6,5–9,5.
- Aktivitas dapat dirangsang oleh agen denaturasi (misalnya, SDS dan Urea).
- Denaturasi cepat terjadi pada suhu di atas 70°C.
- Autolisis meningkat pada pH basa, tetapi beberapa fragmen enzim mempertahankan aktivitas proteolitik lengkap bahkan setelah autolisis ekstensif.
- Aplikasi:
- Sering digunakan dalam biologi molekuler untuk mencerna protein yang tidak diinginkan, seperti nuklease dalam sediaan DNA atau RNA.
- Biasanya digunakan pada 50–200 μg/ml dalam sediaan asam nukleat.
- Kondisi optimal: pH 7.5-8.0 dan 37-55°C.
- Waktu inkubasi bervariasi dari 30 menit sampai 18 jam.
Spesifikasi
| Fitur | Spesifikasi |
| Berat molekul | 29.3kDa |
| Titik Isoelektrik | 8.9 |
| Penampilan | Bubuk terliofilisasi berwarna putih |
| Kemurnian | 95% (Analisis SDS-PAGE) |
| Aktivitas tertentu | ≥34 Unit/mg protein |
| Karakteristik suhu | Suhu aktivitas efektif adalah 37-70°C, dan aktivitas enzim pada suhu 65°C dua kali lipat dibandingkan aktivitas enzim pada suhu 25°C. |
| Karakteristik PH | 4.0-12.0, kisaran optimal adalah ph7.5-11.5 |
| Kondisi Pelestarian | Disarankan untuk menyimpan pada suhu -20°C untuk memastikan stabilitasnya semaksimal mungkin (transportasi atau penyimpanan suhu normal tidak akan mengurangi aktivitas enzim).
Umur simpannya terserah 3 tahun pada -20°C dan 2 tahun pada 2~8°C. |
| Metode penggunaan | Siapkan 20mg/ml dengan larutan, tambahkan proteinase K ke dalam larutan pencernaan atau lisat hingga konsentrasi akhir 50-200ug/ml, dan inkubasi pada suhu 55~70°C.
Proteinase K setelah reaksi dapat dihilangkan atau dinonaktifkan dengan metode manik magnetik, metode kolom atau ekstraksi fenol-kloroform. Protease K dapat diinaktivasi dengan inkubasi pada suhu 95°C selama 3 menit atau 70°C selama 15 menit. |
| Deteksi residu asam nukleat | Qubit tidak mendeteksi
Kontaminasi DNA manusia tidak terdeteksi (waktu nyata PCR) Kontaminasi DNA bakteri tidak terdeteksi (16S PCR primer universal, 30 siklus) Kontaminasi DNA jamur tidak terdeteksi (PCR Primernya) |
| Deteksi nuklease | DNase tidak terdeteksi
RNase tidak terdeteksi Nickase tidak terdeteksi |
| Aplikasi yang direkomendasikan | Ekstraksi asam nukleat, ekstraksi DNA yang bersirkulasi, ekstraksi asam nukleat virus |
Keuntungan
- Tidak termasuk RNase, Dnase, dan Nickase
- Tidak ada residu asam nukleat (tidak terdeteksi oleh Qubit setelah mengekstraksi seluruh 100mg protein K)
- Tidak ada kontaminasi DNA dari sumber manusia (tidak terdeteksi oleh Q-PCR)
- Tidak ada kontaminasi DNA bakteri (tidak terdeteksi oleh primer universal 16S)
- Tidak ada kontaminasi DNA jamur (tidak terdeteksi oleh primer universal 1TS)
- Dapat diangkut dan berlaku selama dua tahun pada suhu normal di lingkungan kering.
- Dapat digunakan untuk ekstraksi DNA bebas yang sangat sensitif, ekstraksi asam nukleat virus, ekstraksi DNA darah utuh, dll..
Meminta informasi
| Isi | Bab 12100 | Bab 12101 | Bab 12102 | PDB-1000 |
| Proteinase K, Liofilisasi, >30 unit/mg protein | 1 G | 10 G | 100 G | |
| Penyangga PDB (20mm Tris, pH 7.5, 10mm CaCl2, 50% gliserin, 0.1% Pengawet) | 1000 ml |
Ulasan
Belum ada ulasan.