Alat Uji Asam Nukleat Seks Parrot (Metode penyelidikan PCR-fluoresensi)

Produk ini perlu dikemas dengan kantong es dan dikirim melalui FedEx atau UPS.
Itu akan tiba di dalam 7-10 hari. Biaya pengiriman sudah termasuk dalam harga produk.

Perkenalan produk：

Kit reagen ini dapat memperkuat dan mendeteksi gen yang dilestarikan CHD-W dalam sampel seperti bulu, darah, dan jaringan burung beo, sehingga menentukan jenis kelamin mereka. Dengan memperkenalkan referensi internal endogen, proses ekstraksi dan amplifikasi asam nukleat dapat dipantau untuk memastikan keakuratan hasil pengujian.

Isi produk：

Kondisi penyimpanan：

Simpan pada suhu -20℃, umur simpan setidaknya 12 bulan

Operasi eksperimental：

1. Persiapan sampel (Area persiapan sampel)

1.1 Persyaratan sampel：

Bulu: Kumpulkan setidaknya 5 bulu dari dada, perut, atau kaki (termasuk bagian batang bulu), dan jangan menggunakan bulu yang rontok secara alami.

Darah: Gunakan EDTA sebagai antikoagulan, jangan gunakan heparin sebagai antikoagulan. Darah utuh segar harus digunakan, atau dapat disimpan pada suhu 2~8℃ hingga 7 hari, atau disimpan pada -20℃ hingga 3 bulan. Sebisa mungkin hindari pembekuan dan pencairan berulang kali.

Jaringan: Ambil jaringan otot atau organ segar (hindari menggunakan sampel dengan kulit, tendon, atau fasia yang sulit untuk diproses) tidak lebih dari 100mg. Siapkan homogenat jaringan menggunakan 200-500μL air steril, dan kemudian dilanjutkan dengan persiapan sampel berikutnya.

1.2 Persiapan sampel：

Silakan merujuk ke Three Lions Biotech “Kit Ekstraksi Cepat DNA Genomik Hewan (untuk PCR analisis)” panduan (Nomor Bagian: DP202), atau perangkat/metode ekstraksi asam nukleat lainnya yang memenuhi persyaratan terkait, untuk mengekstrak sampel yang diproses. Tempatkan sampel asam nukleat yang diekstraksi ke dalam lemari es dan coba segera melanjutkan pengujian. Dapat disimpan pada suhu 4°C hingga 7 hari atau pada -20°C hingga 6 bulan.

2 . Persiapan sistem reaksi (Area reaksi untuk menambahkan sampel).

2.1 Keluarkan n+2 tabung reaksi yang berisi kontrol positif CW, Kontrol negatif CW, dan solusi reaksi yang diperlukan untuk percobaan (n mewakili jumlah sampel yang akan diuji, plus 1 kontrol positif, Dan 1 kontrol negatif). Cairkan reagen sepenuhnya pada suhu kamar, mesin sentrifugal untuk 10 detik, dan putar cairan di dalam dinding tabung dan tutup ke bagian bawah tabung. Tempatkan di dalam lemari es untuk digunakan nanti.

2.2 Kemudian, tambahkan 2μL kontrol negatif, sampel asam nukleat yang diekstraksi, dan kontrol positif CW terhadap larutan reaksi secara berurutan. Tutup penutup tabung, membuat catatan yang tepat, dan pastikan volume total setiap reaksi adalah 25μL. Campurkan isinya secara menyeluruh, mesin sentrifugal untuk 10 detik, kemudian dilanjutkan dengan percobaan amplifikasi pada instrumen PCR.

3. amplifikasi PCR (Area amplifikasi dan analisis produk).

Pra-denaturasi pada suhu 95°C untuk 3 menit; Denaturasi pada suhu 95°C untuk 10 detik, Anil dan ekstensi pada suhu 58°C untuk 30 detik, untuk 35 siklus, mengumpulkan sinyal fluoresensi pada 58°C. Saluran fluoresensi 1 harus diatur ke FAM (gen PJK-W), dan saluran 2 harus diatur ke VIC/HEX (gen referensi endogen) (saat menggunakan instrumen PCR kuantitatif fluoresensi real-time seri ABI, jika diperlukan, hubungi produsen terlebih dahulu atau tambahkan sendiri pewarna kalibrasi ROX; jika tidak, ikuti prosedur normal).

4. Penentuan hasil

4.1 Jika nilai Ct kontrol positif pada saluran FAM dan saluran VIC/HEX adalah <28 dan tunjukkan sebuah “S”-kurva amplifikasi berbentuk, dan kontrol negatif tidak mempunyai nilai Ct atau nilai Ct ≥35 dan tidak “S”-kurva amplifikasi berbentuk, hasil percobaannya valid. Jika tidak, percobaan harus diulang, dan jika percobaan ulang masih tidak valid, silakan hubungi personel teknis pabrikan.

4.2 Nilai Ct sampel pada saluran VIC/HEX harus ≤30 dan menunjukkan an “S”-kurva amplifikasi berbentuk, menunjukkan bahwa ekstraksi dan amplifikasi sampel efektif. Jika tidak ada nilai Ct atau nilai Ctnya ada 30 < Ct ≤ 35 di saluran VIC/HEX, hal ini menunjukkan bahwa ekstraksi asam nukleat sampel tidak memenuhi standar atau terdapat gangguan penghambatan yang kuat (seperti residu alkohol atau desinfektan, antikoagulan, dll.) yang menghambat amplifikasi. Disarankan untuk memproses ulang sampel untuk ekstraksi dan amplifikasi asam nukleat.

4.3 Setelah deteksi di saluran VIC/HEX valid, penentuan pada channel FAM dilakukan sebagai berikut:

• Nilai Ct ≤ 30 dan sebuah “S”-kurva amplifikasi berbentuk diamati, dan perbedaan Ct antara kedua saluran kurang dari 5, itu ditentukan sebagai positif untuk gen CHD-W, menunjukkan bahwa sampel tersebut berasal dari perempuan.
• Nilai Ct ≤ 30 dan sebuah “S”-kurva amplifikasi berbentuk diamati, tetapi perbedaan Ct antara kedua saluran adalah ≥ 5, atau nilai Ct adalah 30 < Kt < 32, semuanya dianggap mencurigakan, dan tes ulang dianjurkan (disarankan untuk mengecualikan terlebih dahulu “positif palsu” hasil yang disebabkan oleh kontaminasi aerosol lingkungan, lalu dilanjutkan dengan ekstraksi dan pengujian asam nukleat). Jika pengujian ulang pada saluran FAM setelah mengecualikan kontaminasi aerosol menunjukkan nilai Ct < 30 dan kurva amplifikasi yang jelas, dan perbedaan Ct antara kedua saluran kurang dari 5, itu ditentukan sebagai positif untuk gen CHD-W; jika tidak, itu ditentukan sebagai negatif.
• Tidak ada nilai Ct atau nilai Ct ≥ 32 dan tidak “S”-kurva amplifikasi berbentuk, itu ditentukan sebagai negatif untuk gen CHD-W, menunjukkan bahwa sampel mungkin berasal dari laki-laki.

Tindakan pencegahan：

1）Untuk mencegah kontaminasi, percobaan harus dilakukan secara ketat dengan operasi yang dipartisi. Sebaiknya dilakukan isolasi fisik antar partisi untuk menghindari kontaminasi silang yang disebabkan oleh faktor manusia. Kenakan jas lab dan sarung tangan lateks selama percobaan, dan menggunakan alat terpisah di area berbeda. Ganti sarung tangan dan jas lab sesuai kebutuhan. Setelah PCR, jangan langsung membuka tutupnya. Tunggu hingga cukup dingin sebelum membuka pengambilan sampel untuk meminimalkan kontaminasi aerosol.

2）Lelehkan reagen sepenuhnya sebelum digunakan, tetapi hindari pembekuan dan pencairan berulang kali. Ikuti instruksi secara ketat untuk persiapan reagen, penambahan sampel, dan langkah lainnya. Meja kerja, alat sentrifugal, pipet, dan instrumen lainnya harus didesinfeksi secara teratur menggunakan disinfektan yang mengandung klorin, etanol, agen penghilang kontaminasi asam nukleat, atau lampu ultraviolet.

3）Hasil negatif belum tentu laki-laki. Mutasi yang tidak diketahui, kualitas sampel yang buruk, konsentrasi rendah, atau adanya zat penghambat kuat dalam ekstraksi asam nukleat (pengujian) juga dapat menyebabkan “negatif” hasil. Kit ini hanya digunakan untuk amplifikasi spesifik gen CHD-W pada burung beo. Untuk produk lainnya, silakan berkonsultasi dengan produsennya.

4）Produk ini hanya untuk sekali pakai. Jangan membekukan dan mencairkan berulang kali. Ini hanya untuk tujuan penelitian ilmiah dan tidak boleh digunakan untuk diagnosis klinis atau tujuan lainnya.