1. Komponen kit reagen
| Spesifikasi | 50T | 100T |
| Kucing. TIDAK. | SN0221 | SN0222 |
| Kolom Ekstraksi DNA (mengatur) | 50 (mengatur) | 100 (mengatur) |
| Buffer Reagen IV | 20 ml | 2×20 ml |
| Buffer reagen Cplus | 30 ml | 30 ml |
| Cuci Buffer 1 | 15 ml | 2 × 15 ml |
| Penyangga Elusi | 20 ml | 20 ml |
| Proteinase K | 1ml | 2x1ml |
| RNaseA | 1ml | 1ml |
| Instruksi manual | 1 | 1 |
2. Penyimpanan
Kit reagen ini harus disimpan pada suhu kamar (15-25℃) dan dalam kondisi kering, dengan umur simpan 12 bulan. Kolom pemurnian ekstraksi DNA dapat disimpan 1 tahun di lingkungan sejuk dan kering. Proteinase K dan RNase A mengandung bahan pengawet, memungkinkan transportasi pada suhu kamar, tapi untuk penyimpanan jangka panjang, mereka harus disimpan pada -20℃.
3. Petunjuk Penggunaan Kit Reagen
3.1 Kit reagen ini ditujukan untuk penelitian biologi molekuler dan tidak boleh digunakan untuk diagnosis atau pengobatan penyakit.
3.2 Beberapa komponen dalam kit reagen mengandung bahan iritan. Tindakan perlindungan seperti mengenakan pakaian pelindung dan kacamata direkomendasikan.
3.3 Selama penggunaan kit reagen ini, mesin sentrifugal berkecepatan tinggi, mandi air (mandi logam), pencampur pusaran, etanol anhidrat, air deionisasi steril, dan tabung EP perlu disiapkan oleh pengguna.
4. Pengantar Kit Reagen
Hewan/Jaringan Pemurnian DNA Kit menawarkan solusi yang cepat dan efektif untuk jaringan hewan dan pemurnian DNA kultur sel, banyak berlaku di seluruh jaringan hewan dan kultur sel.
Kit pemurnian cepat DNA ini dengan cepat mengekstraksi DNA total dari hewan dan sel, menghasilkan DNA yang dapat digunakan secara langsung PCR, Blot Selatan, dan aplikasi serupa. Proses pemurnian tidak memerlukan agen beracun seperti fenol-kloroform, Membuat Kit Pemurnian DNA ini sangat cocok untuk berbagai sampel lainnya.
5. Prinsip dan Prosedur Eksperimental
6. Proses Ekstraksi
Sebelum Memulai Eksperimen:
A. Buffer Reagen IV cenderung mengendapkan dalam kondisi suhu rendah. Disarankan untuk memanaskan pada suhu 65℃ untuk 5 menit. Setelah presipitasi larut, itu bisa digunakan secara normal.
B. Sebelum digunakan, Tambahkan jumlah etanol anhidrat yang ditentukan MencuciPenyangga 1 seperti yang ditunjukkan pada label botol reagen, dan tandai cek pada label untuk menunjukkan penambahan etanol anhidrat.
C. Buffer Elusi adalah a 0.1x solusi TE dengan konten EDTA minimal. Jika EDTA mungkin mempengaruhi percobaan selanjutnya, disarankan untuk mengganti buffer elusi dengan air deionisasi steril.
- Penanganan Sampel:
A. Ambil kultur sel, sentrifugasi di 12,000 rpm untuk 1 menit untuk mengumpulkan sel, dan aspirasi supernatan sebanyak mungkin. Tambahkan 250μl buffer reagen IV dan 10μl RNASEA (10 mg/ml) ke sel yang dikumpulkan, Tanggal dengan seksama, dan inkubasi pada suhu 65°C selama 10 menit.
B. Menggiling jaringan tidak melebihi 25 mg menjadi bubuk halus menggunakan nitrogen cair. Tambahkan 200μl buffer reagen IV, 20μl proteinase k (10 mg/ml), dan 10μl RNASEA (10 mg/ml) ke bubuk, kocok dengan baik, dan inkubasi pada suhu 65°C selama 30 menit, mengguncang campuran empat kali selama periode ini.
2. Menambahkan 200μl CPlus buffer reagen ke lisat dan aduk rata. Jika muncul endapan putih, itu bisa dibiarkan tanpa gangguan; itu tidak akan mempengaruhi percobaan selanjutnya begitu endapan menghilang.
3. Menambahkan 200μl etanol anhidrat dan aduk rata. Beberapa curah hujan mungkin terjadi, namun hal ini tidak akan memengaruhi eksperimen selanjutnya.
4. Oleskan cairan yang diperoleh ke kolom pemurnian ekstraksi DNA (lengan baju) (sekitar 650~700μl setiap kali), diamkan pada suhu kamar untuk 2 menit, sentrifugasi di 12,000 rpm untuk 30 detik, membuang sampah yang dikumpulkan, dan masukkan kembali tabung pengumpul ke dalam kolom pemurnian untuk langkah selanjutnya.
5. Tempatkan kolom pemurnian ekstraksi DNA (lengan baju) menjadi lengan koleksi baru, menambahkan 700μl dari MencuciPenyangga 1, sentrifugasi di 12,000 rpm untuk 30 detik, membuang limbahnya, dan letakkan kolom pemurnian ekstraksi DNA (lengan baju) kembali ke lengan untuk langkah berikutnya.
(Catatan: Konfirmasikan penambahan etanol anhidrat untuk membilas buffer 1.)
6. Menambahkan 500μl dari MencuciPenyangga 1 ke kolom pemurnian ekstraksi DNA (lengan baju), sentrifugasi di 12,000 rpm untuk 30 detik, Perpanjang waktu sentrifugasi dengan tepat untuk memastikan membran lebih kering.
(Catatan: Etanol memiliki dampak yang signifikan pada percobaan selanjutnya; Karena itu, Kekeringan membran sangat penting. Setelah sentrifugasi, Pastikan tidak ada etanol yang tersisa sebelum elusi. Buang tabung limbah dan pengumpulan sesudahnya. Setelah dibilas dengan buffer cuci 1, membran pada kolom pemurnian DNA harus memiliki warna yang samar. Lepaskan kolom pemurnian DNA dengan hati -hati setelah sentrifugasi, Memastikan itu tidak menyentuh tabung koleksi untuk mencegah kontaminasi etanol.)
7. Tempatkan kolom pemurnian DNA dalam tabung centrifuge baru, Tambahkan 100μl buffer elusi langsung ke membran, sentrifugasi di 12,000 rpm untuk 1 menit, dan mengumpulkan DNA-nya.
(Catatan: Elusi DNA dengan 50μL buffer elusi dapat meningkatkan konsentrasi DNA tetapi mengurangi hasil DNA total.)
Ulasan
Belum ada ulasan.