Herpesvirus golubova (PiHV) Kit za testiranje nukleinske kiseline

Herpesvirus golubova (PiHV) Kit za testiranje nukleinske kiseline (PCR-Metoda fluorescentne sonde)

Stavka br： AP2308002 Specifikacija：24T/48T /96T Skladištenje：-20℃

Predstavljanje proizvoda：

• Herpesvirus golubova (PiHV) Infekcija:
  • Virusna zarazna bolest koja primarno pogađa mlade golubove uzrokovana tipom golubljeg herpesvirusa 1 (PiHV1).
  • Važan uzročnik koji dovodi do sindroma golublje kljunaste bolesti kod mladih golubova.
  • Klinički karakteriziran simptomima poput upale nosa i konjunktive, depresija, smanjen apetit, proljev, povraćanje, i neuroloških simptoma.
• Važnost otkrivanja:
  • Rano, brza, a zgodno otkrivanje PiHV-a ključno je za dijagnozu.
  • Pomaže u usporavanju širenja bolesti i sprječavanju komplikacija.
• Opis kompleta za testiranje:
  • Dizajniran na temelju očuvanih sekvenci u PiHV genu.
  • Optimizirani uvjeti omogućuju precizno fluorescentno kvantitativno PCR testiranje.
  • Prihvaća oralno, i brisevi kloake, krv, i drugih uzoraka tkiva ptica.
  • Omogućuje brzo određivanje PiHV infekcije u domaćinu.

Sadržaj proizvoda：

Uvjeti skladištenja：

Čuvati na -20℃, rok trajanja je najmanje 12 mjeseca.

Eksperimentalni rad：

1. Priprema uzorka (Prostor za pripremu uzorka)

1.1 Zahtjevi za uzorke:

– Oralni i kloakalni brisevi: Uzmite sterilnu vatu, umetnite ga u grlo ptice ili kloaku, okrenite tri puta, stavite u epruvetu za centrifugu, odrežite izloženi dio, čvrsto zatvorite čep, i označite ga. Uzorke koji se mogu odmah testirati treba pohraniti na 2-8°C unutar 24 sati, a uzorke koji se ne mogu odmah testirati treba pohraniti na -20°C.

– Puna krv: Koristite EDTA kao antikoagulans, izbjegavati heparin antikoagulans, koristite svježu punu krv, ili čuvati na 2-8°C ne dulje od 7 dana, ili čuvati na -20°C ne dulje od 3 mjeseca, izbjegavanje ponovljenih ciklusa smrzavanja i odmrzavanja.

– Tkivo: Uzmite svježe mišićno ili organsko tkivo koje ne prelazi 100 mg, koristite 200-500 μL sterilne vode za pripremu homogenata tkiva, i nastaviti s naknadnom pripremom uzorka.

1.2 Priprema uzorka:

Pogledajte SanshiBio “Komplet za brzu ekstrakciju životinjske genomske DNK (za PCR analizu)” priručnik (Katalog: DP202), ili druge komplete/metode za ekstrakciju nukleinskih kiselina koje ispunjavaju relevantne zahtjeve, za ekstrakciju nukleinskih kiselina iz obrađenih uzoraka. Stavite ekstrahirani uzorak nukleinske kiseline u hladnjak i testirajte što je prije moguće. Čuvati na 4°C ne duže od 7 dana ili na -20°C ne više od 6 mjeseca.

2. Priprema sustava za reakciju (Područje reakcije)

2.1 Izvadite svaku komponentu kompleta, potpuno otopiti na sobnoj temperaturi, centrifuga za 10 sekundi, i centrifugirajte tekućinu unutar stijenke epruvete i poklopca epruvete do dna epruvete. Pripremite reakcijsku otopinu prema količini uzorka (n+2, gdje je n broj uzoraka, preporuča se postaviti 1 pozitivna kontrola i 1 negativna kontrola za svaki eksperiment). Specifična metoda pripreme: uzeti (n+2) reakcijske epruvete koje sadrže otopinu premiksa PiHV, dodajte 11,5 µL PiHV reakcijske otopine u svaku epruvetu, upotrijebite pipetu za temeljito miješanje, 23µL po jažici, i čuvati u hladnjaku.

2.2 Zatim uzastopno dodajte 2 μL negativne kontrole, ekstrahirani uzorak nukleinske kiseline, i PiHV pozitivnu kontrolu u reakcijsku otopinu. Zatvorite čep tube, napraviti zapisnik, a ukupni volumen svake reakcije je 25μL. Temeljito promiješajte, centrifuga za 10 sekundi, te izvoditi pokuse amplifikacije na PCR instrumentu.

3. PCR amplifikacija (Područje pojačanja i analize proizvoda)

Preddenaturacija na 95°C za 2 minuta; Denaturacija na 95°C za 10 sekundi, žarenja i istezanja na 60°C za 35 sekundi, 40 ciklusi. Prikupite fluorescentne signale na 60°C. Odaberite FAM fluorescentni kanal (koristiti kvantitativne PCR instrumente fluorescencije u stvarnom vremenu kao što je serija ABI, ako je potrebno, obratite se proizvođaču ili dodajte ROX korekcijsku boju; inače, slijedite normalne postupke).

4. Tumačenje rezultata

4.1 Uvjeti za valjanost eksperimenta:

Vrijednost Ct kanala pozitivne kontrole FAM < 28 i a “S”-promatra se oblikovana krivulja pojačanja; negativna kontrola nema Ct vrijednost ili Ct vrijednost ≥ 38 i br “S”-oblikovana krivulja pojačanja, pokus je valjan. Inače, ponovite eksperiment; ako je ponovljeni eksperiment još uvijek nevažeći, obratite se tehničkom osoblju proizvođača.

4.2 Tumačenje rezultata uzorka:

Ct vrijednost ≤ 33 i an “S”-oblikovana krivulja pojačanja ukazuje na PiHV pozitivan;

Ct vrijednost između 33 < Ct < 38 smatra se sumnjivim, te se preporučuje ponovno testiranje. Ako je vrijednost Ct ponovnog testiranja FAM kanala < 33 nakon isključivanja kontaminacije aerosolom i postoji jasna krivulja pojačanja, smatra se pozitivnim na PiHV, inače smatra negativnim;

Nema Ct vrijednosti ili Ct vrijednost ≥ 38 i br “S”-oblikovana krivulja pojačanja ukazuje na negativan PiHV.

Mjere predostrožnosti：

• Za sprječavanje kontaminacije, eksperiment treba biti strogo podijeljen, a poželjna je fizička izolacija između pregrada kako bi se izbjegla unakrsna kontaminacija uzrokovana ljudskim čimbenicima. Tijekom eksperimenta nosite laboratorijske kute i rukavice od lateksa, samostalno koristiti alate u različitim područjima, promijenite rukavice i laboratorijske kute kada je to potrebno. Nakon PCR-a, nemojte odmah otvarati poklopac; otvorite ga nakon dovoljnog hlađenja kako biste smanjili kontaminaciju aerosolom.
• Prije upotrebe potpuno otopite reagense, ali izbjegavajte ponavljane cikluse smrzavanja i odmrzavanja. PCR reakcijske epruvete koje se nalaze u kompletu su od 0,2 ml; ako je potrebna zamjena, prijenos nakon potpunog odmrzavanja. Strogo slijedite upute za pripremu reagensa i dodavanje uzorka. Radne stanice, centrifuge, pipete, a ostale instrumente treba redovito dezinficirati dezinficijensima koji sadrže klor, alkohol, sredstva za dekontaminaciju nukleinske kiseline, ili UV svjetlo.
• Negativan rezultat ne znači nužno da domaćin nije zaražen virusom. Loša kvaliteta uzorka, nisko opterećenje virusima, ili prisutnost jakih inhibitornih tvari (kao što su alkohol, dezinfekcijska sredstva, antikoagulansi, itd.) može rezultirati neuspješnom ekstrakcijom nukleinske kiseline (otkrivanje) i a “negativan” proizlaziti. Slijedite kriterije tumačenja rezultata, a kada postoje sumnjivi rezultati, prvo isključite kontaminaciju aerosolom. Ako ima još pitanja, obratite se tehničkom osoblju proizvođača.
• Ovaj proizvod je samo za jednokratnu upotrebu. Komponente u reagensu osjetljive su na prirodno svjetlo; izbjegavajte izlaganje svjetlosti tijekom pakiranja i skladištenja. Nakon pakiranja, nemojte opetovano zamrzavati-otapati. Samo za znanstvena istraživanja; ne za kliničku dijagnozu ili druge svrhe.