Komplet omogućuje brzo pročišćavanje visokokvalitetne RNA iz paxigene krvne RNA epruvete pomoću spin kolona sa silika-membranom. RNA pročišćena pomoću HiPure sustava spremna je za primjene kao što je RT-PCR, Northern blotting, poli A+ RNA (mRNA) pročišćavanje, zaštita od nukleaze, i in vitro prijevod.
pojedinosti
Tehnički podaci
| Značajke | Tehnički podaci |
| Glavne funkcije | Izolacija ukupne RNA iz Paxgene RNA cijevi |
| Prijave | RT-PCR, qPCR, Sjeverna hibridizacija, NGS, zaštita nukleinske kiseline, in vitro prijevod |
| Metoda pročišćavanja | Mini spin stupac |
| Tehnologija pročišćavanja | Silika tehnologija, Tehnologija filtracije DNA |
| Procesna metoda | Priručnik (centrifugiranje ili vakuum) |
| Vrsta uzorka | Krv u epruveti za čuvanje |
| Količina uzorka | 2.5ml |
| Volumen eluacije | ≥30μl |
| Nosivi volumen tekućine po stupcu | 800µl |
| Prinos vezivanja kolone | 100μg |
Načelo
Komplet je za pročišćavanje ukupne RNK iz 2.5 ml pune ljudske krvi sakupljene u epruvetu PAXgene Blood RNA. Pročišćavanje počinje korakom centrifugiranja za taloženje nukleinskih kiselina u PAXgene Blood RNA Tube. Talog se ispere i resuspendira, i inkubira u optimiziranim puferima zajedno s proteinazom K. Ispiranje DNA Lizat se propusti kroz DNA Mini kolonu. Dodaje se etanol da se prilagode uvjeti vezanja, a lizat se nanosi na kolonu.RNA se selektivno veže za membranu silicijevog dioksida dok kontaminanti prolaze kroz. Preostala onečišćenja uklanjaju se u nekoliko učinkovitih koraka pranja. Između prvog i drugog koraka pranja, membrana se tretira s DNazom I da se uklone tragovi vezane DNA. Nakon koraka pranja, RNA se eluira u puferu za eluiranje i denaturira toplinom.
Prednosti
- Visoka kvaliteta – ukupna RNA visoke čistoće može se izravno koristiti u raznim osjetljivim nizvodnim aplikacijama
- Brzo – izolacija nekoliko uzoraka može se dovršiti u 40 minuta pomoću metode pročišćavanja kolonom
- Sigurnost – nije potrebna ekstrakcija fenol-kloroformom
- Osjetljiv – izravna liza krvi, plazma, a ostali uzorci bez izdvajanja leukocita
Sadržaj kompleta
| Sadržaj | R416802 | R416803 |
| Vremena pročišćavanja | 10 Pripreme | 50 Pripreme |
| HiPure RNA mini stupci I | 10 | 50 |
| Mini stupci gDNA filtra | 10 | 50 |
| 2ml cijevi za prikupljanje | 30 | 150 |
| Voda bez RNaze | 60 ml | 250 ml |
| Međuspremnik MBR1 | 10 ml | 30 ml |
| Međuspremnik MBR2 | 5 ml | 15 ml |
| Međuspremnik RW1 | 15 ml | 60 ml |
| Međuspremnik RW2* | 6 ml | 20 ml |
| Proteinaza K | 12 mg | 50 mg |
| Pufer za otapanje proteaze | 1.8 ml | 5 ml |
| DNaza I | 120 µl | 600 µl |
| DNase pufer | 6 ml | 30 ml |
Skladištenje i stabilnost
Proteinazu K treba pohraniti na 2–8°C po dolasku. DNazu I treba čuvati na -20°C. Međutim, kratkotrajno skladištenje (DNase I do 1 tjedni, Proteinaza K do 8 tjedni) na sobnoj temperaturi (15–25°C) ne utječe na njihovu izvedbu. Preostale komponente kita mogu se čuvati na sobnoj temperaturi (15–25°C) i stabilni su najmanje 18 mjeseci pod ovim uvjetima.
Podaci o eksperimentu
Recenzije
Još nema recenzija.