Kit za testiranje nukleinske kiseline ptičjeg poliomavirusa丨Molekulska metoda

Ovaj proizvod treba biti prepun vrećica za led i otpremljen kroz FedEx ili UPS.

Predstavljanje proizvoda：

This reagent kit can perform amplification detection of the conserved genes of Avian Polyoma Virus (APV) in samples such as bird perje, krv, tissues, oral/genital swabs, itd. Uvođenjem endogene unutarnje reference, the nucleic acid extraction and amplification process can be monitored to ensure the accuracy of the test results.

Sadržaj proizvoda：

Uvjeti skladištenja：

Čuvati na -20℃, rok trajanja je najmanje 12 mjeseca

Eksperimentalni rad：

1. Priprema uzorka (Područje pripreme uzorka)

1.1 Zahtjevi za uzorkovanje：

• Perje: Collect a minimum of 5 perje iz prsa, trbuh, ili noge (uključujući dio osovine perja), i ne koristite prirodno proliveno perje.
• Krv: Koristite EDTA kao antikoagulans, Ne koristite heparin kao antikoagulans. Treba koristiti svježu cijelu krv, ili se može pohraniti na 2 ~ 8 ℃ za do 7 dana, ili pohranjeno u -20 ℃ za do 3 mjeseca. Izbjegavajte ponovljeno smrzavanje i odmrzavanje što je više moguće.
• Tkivo: Uzmite svježe mišićno ili organsko tkivo (Izbjegavajte korištenje uzoraka s kožom, tetive, ili fascia koju je teško obraditi) od ne više od 100 mg. Pripremite homogenat tkiva pomoću 200-500 μl sterilne vode, a zatim nastavite s naknadnim pripremama uzorka.

1.2 Priprema uzorka：

• Refer to the manual of the Three Lions Biotech “Komplet za brzu ekstrakciju životinjske genomske DNK (za PCR analiza)” (Broj dijela: DP202), ili drugi kompleti/metode za ekstrakciju nukleinskih kiselina koji udovoljavaju odgovarajućim zahtjevima, for the extraction of processed samples.
• Postavite ekstrahiranu nukleinsku kiselinu uzorka u okvir leda i pokušajte odmah nastaviti s testiranjem.
• Može se pohraniti na 4 ° C za do 7 Dani ili na -20 ° C za do 6 mjeseca.

2 . Priprema reakcijskog sustava (Područje reakcije za dodavanje uzoraka).

2.1 Take out n+2 reaction tubes containing APV positive control, APV negative control, i reakcijska otopina potrebna za eksperiment (n predstavlja broj uzoraka koji će se testirati, plus 1 pozitivna kontrola, i 1 negativna kontrola). Odmrznite reagense u potpunosti na sobnoj temperaturi, centrifuga za 10 sekundi, i okrenite tekućinu unutar zidova cijevi i poklopce na dno cijevi. Stavite ih u kutiju za kasniju upotrebu.

2.2 Zatim, Dodajte 2 μl negativne kontrole, ekstrahirani uzorak nukleinske kiseline, and APV positive control to the reaction solution in sequence. Zatvorite poklopce cijevi, Napravite odgovarajuće zapise, i osigurati da je ukupni volumen svake reakcije 25 μl. Temeljito pomiješajte sadržaj, centrifuga za 10 sekundi, a zatim nastavite s eksperimentom pojačanja na PCR instrumentu.

3. PCR pojačanje (Područje pojačanja i analize proizvoda).

• The PCR amplification process is as follows:
  • Pre-denaturation at 95℃ for 3 minuta.
  • Denaturation at 95℃ for 10 sekundi.
  • Annealing and extension at 60℃ for 40 sekundi, za ukupno 35 ciklusi.
  • Collect fluorescence signals at 60℃.
• In the fluorescence detection, select FAM for the first channel (for APV specific gene), and select VIC/HEX for the second channel (for endogenous reference gene).
• If using an ABI series real-time fluorescence quantitative PCR instrument, you may contact the manufacturer in advance or add ROX calibration dye by yourself if needed; inače, Slijedite normalan postupak.

4. Određivanje rezultata

4.1

• Ako su CT vrijednosti pozitivne kontrole i u FAM kanalu i na Vic/Hex kanalu <30 i pokazati an “S”-oblikovana krivulja pojačanja, a negativna kontrola nema CT vrijednost ili CT vrijednost ≥35, a NO “S”-oblikovana krivulja pojačanja, eksperimentalni rezultat vrijedi.
• Inače, Eksperiment bi trebao biti ponovljen, i ako je ponovljeni eksperiment još uvijek nevažeći, please contact the technical personnel.

4.2

• The Ct value of the sample in the VIC/HEX channel should be ≤32 and show an “S”-oblikovana krivulja pojačanja, što ukazuje da su ekstrakcija i pojačavanje uzorka učinkovite.
• Ako nema CT vrijednosti ili je vrijednost CT 32 < CT ≤ 35 u kanalu Vic/Hex, to ukazuje da ekstrakcija nukleinske kiseline uzorka nije standardna ili postoji snažna smetnja inhibicije (poput ostataka alkohola ili dezinfekcijskih sredstava, antikoagulansi, itd.) koji inhibira pojačavanje.
• Preporučuje se preraditi uzorak za ekstrakciju i pojačavanje nukleinske kiseline.

4.3 Nakon otkrivanja u VIC/HEX kanalu vrijedi, Određivanje u FAM kanalu izvodi se na sljedeći način:

• Ct vrijednost ≤ 32 i an “S”-promatra se oblikovana krivulja pojačanja, it is determined as positive for APV, indicating the presence of APV virus in the sample.
• Ct value is 32 < Ct < 35, it is considered as suspicious, and the sample should be retested (by re-extracting and testing the nucleic acid, predlaže se da se prvo isključi “lažno pozitivan” Rezultati uzrokovani kontaminacijom aerosola u okolišu). Ako ponovno testiranje na FAM kanalu nakon isključenja kontaminacije aerosola pokazuje CT vrijednost < 35 i jasna krivulja pojačanja, it is determined as positive for APV; inače, određuje se kao negativan.
• Nema Ct vrijednosti ili Ct vrijednost ≥ 35 i br “S”-oblikovana krivulja pojačanja, it is determined as negative for APV, indicating that the APV virus was not detected in the sample.

Mjere predostrožnosti：

1. Za sprječavanje kontaminacije, Eksperiment se treba provesti strogo s podjelu s podjelom. Poželjno je imati fizičku izolaciju između particija kako bi se izbjegla unakrsna kontaminacija uzrokovana ljudskim čimbenicima. Tijekom eksperimenta nosite laboratorijske kute i rukavice od lateksa, i koristite odvojene alate u različitim područjima. Po potrebi promijenite rukavice i laboratorijske kapute. Nakon PCR -a, Ne otvarajte poklopce odmah. Pričekajte dovoljno hlađenja prije otvaranja za uzorkovanje kako biste umanjili onečišćenje aerosola.
2. Prije upotrebe potpuno otopite reagense, ali izbjegavajte opetovano smrzavanje i odmrzavanje. Slijedite upute strogo za pripremu reagensa, Dodatak uzorka, i drugi koraci. Radna ploča, centrifuga, pipete, i druge instrumente treba redovito dezinficirati pomoću dezinfekcijskih sredstava koja sadrže klor, etanol, Sredstva za uklanjanje onečišćenja nukleinske kiseline, ili ultraljubičaste svjetiljke.
3. A negative result does not necessarily mean a male. Nepoznate mutacije, Loša kvaliteta uzorka, niska koncentracija, ili prisutnost snažnih inhibicijskih tvari u ekstrakciji nukleinske kiseline (testiranje) također može dovesti do “negativan” rezultati. Ovaj se komplet koristi samo za specifično pojačavanje gena CHD-W u papiga. Za ostale proizvode, Molimo konzultirajte proizvođača.
4. This product is for single use only. Ne više puta se smrzavaju i ne otapaju. To je samo za znanstvene istraživačke svrhe i ne smije se koristiti za kliničku dijagnozu ili druge svrhe.