Komplet za ekstrakciju DNK gena krvi

1. Komponente kompleta reagensa

Tehnički podaci	50T	100T
Mačka. Ne.	SN0219	SN0220
Stupovi za ekstrakciju DNK (set)	50 (set)	100 (set)
Pufer reagensa b	20 ml	2 × 20 ml
Pufer reagensa c	30 ml	2 × 30 ml
10× Pufer za lizu crvenih krvnih stanica	60 ml	2 × 60 ml
Pufer za pranje 1	15 ml	2 × 15 ml
Elucijski pufer	20 ml	20 ml
Proteinaza K	1ml	2x1ml
RNAseA	1ml	2x1ml
Priručnik za upute	1	1

2. Skladištenje

Ovaj se komplet reagensa treba čuvati na sobnoj temperaturi (15-25℃) I u suhim uvjetima, s rokom trajanja 12 mjeseca. Stupovi za pročišćavanje DNK mogu se pohraniti za 1 godina u hladnom i suhom okruženju. Proteinaza K i RNaza A sadrže konzervanse, omogućavajući prijevoz na sobnoj temperaturi, Ali za dugoročno skladištenje, Treba ih držati na -20 ℃.

3. Upute za korištenje kompleta reagensa

3.1 Ovaj komplet reagensa namijenjen je istraživanju molekularne biologije i ne smije se koristiti za dijagnozu ili liječenje bolesti.

3.2 Neke komponente u kompletu reagensa sadrže iritante. Preporučuju se zaštitne mjere poput nošenja zaštitne odjeće i naočala.

3.3 Tijekom upotrebe ovog kompleta reagensa, brza centrifuga, vodena kupelji (metalna kupka), vrtlog miksera, bezvodni etanol, sterilna deionizirana voda, i EP epruvete treba pripremiti korisnik.

4. Uvod u komplet reagensa

Krv Pročišćavanje DNK Komplet reagensa nudi brzu i učinkovitu metodu za pročišćavanje DNK iz krvi i drugih tjelesnih tekućina. Liziranjem crvenih krvnih stanica puferom za lizu crvenih krvnih stanica, DNK se može učinkovito prikupiti.

 

Komplet za brzo pročišćavanje DNK krvi može izdvojiti ukupnu DNK iz cijele krvi (uključujući krv, serum, plazma, i druge tjelesne tekućine) unutar 30 minuta. Cijeli proces pročišćavanja ne zahtijeva toksične reagense kao što je fenol-kloroform. Ekstrahirana DNK može se izravno koristiti za PCR, Južni blot, i druge aplikacije.

5. Eksperimentalni principi i postupci

6. Ekstrakcijski postupak

Prije početka eksperimenta:

A. Pufer za lizu crvenih krvnih stanica 1x Priprema: Razrijedite 10x pufer za lizu crvenih krvnih stanica na 1x volumen koristeći vodu bez RNaze.

B. Pufer reagensa B i pufer reagensa C može precipitirati na niskim temperaturama. Preporuča se zagrijavanje na 65 ℃ za 5 minuta za otapanje taloga prije upotrebe.

C. Prije upotrebe Pufer za pranje 1, dodajte određenu količinu bezvodnog etanola kako je naznačeno na naljepnici boce reagensa, i označite kvačicu na naljepnici za označavanje dodatka etanola.

D. Buffer za eluciju je a 0.1X TE otopina s minimalnom EDTA. Ako EDTA može utjecati na naknadne eksperimente, predlaže se zamjena elucijskog pufera sterilnom deioniziranom vodom.

1. Rukovanje uzorkom: (Prikupiti 0.1-5 ml uzoraka krvi)

A. Dodati 2-3 puta volumen od 1x Pufer za lizu crvenih krvnih stanicau krv ili uzorak (Prije upotrebe razrijedite pufer za lizu crvenih krvnih stanica 10x do 1x), Temeljito pomiješajte, centrifuga na 12,000 RPM za 1 minuta, pažljivo uklonite supernatant. Talog bi teoretski trebao biti bijel ili blijedocrven. Dodajte reagens pufer B u talog (za uzorke krvi od 0,1-1 ml, dodati 200μLPufer reagensa b; za 1-2 ml uzoraka krvi, dodati 400μL Pufer reagensa b).

B. Ako se rukuje uzorcima iz organizama niske razine poput peradi ili ptica s crvenim krvnim stanicama s jezgrom, potreban je manji volumen uzorka. U takvim slučajevima, izostavite 1x pufer za lizu crvenih krvnih stanica i izravno dodajte 400μLreagensa pufer B i 20μL od RNAseA (10 mg/ml), Temeljito pomiješajte, i inkubirati na sobnoj temperaturi 5 minuta.

2. Dodati 10μLRNAseA (10 mg/ml), 20μL Proteinaza K (10 mg/ml), Temeljito pomiješajte, probaviti na 65 ℃ za 10 minuta. Tijekom tog razdoblja, preokrenite i promiješajte 2-3 puta do završetka probave.

3. Dodati 200μLpufera reagensa C na lizat, miješati pipetiranjem, dodati 200μL bezvodnog etanola, miješati pipetiranjem.

4. Dobivenu tekućinu nanesite na kolonu za pročišćavanje ekstrakcijom DNK (set) (otprilike 650~700μl svaki put), centrifuga na 12,000 RPM za 30 sekundi, odložiti prikupljeni otpad, i ponovno umetnite epruvetu za prikupljanje u kolonu za pročišćavanje ekstrakcijom DNA (set) za sljedeći korak.

5. Dodati 700μLpufera za uklanjanje inhibicije, centrifuga na 12,000 RPM za 30 sekundi, odbaciti otpad.

6. Postavite stupac za pročišćavanje ekstrakcije DNK (set) u novoj tubi za prikupljanje, dodati 500μLpufera za ispiranje 1, centrifuga na 12,000 RPM za 30 sekundi, odbaciti otpad, i ponovno umetnite kolonu za pročišćavanje ekstrakcijom DNA (set) u cijev za prikupljanje za sljedeći korak.

(Bilješka: Osigurajte da je bezvodni etanol dodan u pufer za ispiranje 1.)

7. Ponovi korak 6.

8. Postavite stupac za pročišćavanje ekstrakcije DNK (set) u novu cijev za centrifugu, otkriti, inkubirati na 65 ℃ u vodenoj kupelji 2 minuta. Proširite ovaj korak na odgovarajući način kako biste isparili etanol što je više moguće kako biste spriječili da ostatak etanola utječe na daljnje eksperimente.

9. Obustaviti 50-100μLelucijski pufer na membranu kolone, centrifuga na 12,000 RPM za 1 minuta, i prikupiti DNK.

(Bilješka: 1. Eluiranje DNK sa 50μL pufera za eluiranje može povećati koncentraciju DNA, ali smanjuje ukupni prinos DNA; 2. Isprani DNA ispiranje može se ponovno primijeniti na kolonu za pročišćavanje ekstrakcijom DNA. Centrifuga na 12,000 RPM za 1 minutu ponovno za povećanje prinosa DNKd.