Komplet za ekstrakciju DNA bakterijskih genoma

• Komponente kompleta reagensa

• Skladištenje

Ovaj se komplet reagensa treba čuvati na sobnoj temperaturi (15-25℃) I u suhim uvjetima, s rokom trajanja 12 mjeseca. Stupovi za pročišćavanje DNK mogu se pohraniti za 1 godina u hladnom i suhom okruženju. Lizocim, Proteinaza K i RNase A sadrže konzervanse, omogućavajući prijevoz na sobnoj temperaturi, Ali za dugoročno skladištenje, Treba ih držati na -20 ℃.

• Upute za korištenje kompleta reagensa

3.1 Ovaj komplet reagensa namijenjen je istraživanju molekularne biologije i ne smije se koristiti za dijagnozu ili liječenje bolesti.

3.2 Neke komponente u kompletu reagensa sadrže iritante. Preporučuju se zaštitne mjere poput nošenja zaštitne odjeće i naočala.

3.3 Tijekom upotrebe ovog kompleta reagensa, brza centrifuga, vodena kupelji (metalna kupka), vrtlog miksera, bezvodni etanol, sterilna deionizirana voda, i EP epruvete treba pripremiti korisnik.

• Uvod u komplet reagensa

Ovaj komplet pruža brzu i učinkovitu metodu pročišćavanja za izolaciju DNK iz različitih tjelesnih tekućina i tekućine bakterijske kulture. Koristi silicijski stupac za pročišćavanje koji selektivno adsorbira nukleinske kiseline. Sa specifičnim tamponskim rješenjima, Uzorci bakterijskih DNK mogu se ekstrahirati unutar 30 minuta. Cijeli postupak pročišćavanja ne zahtijeva toksične reagense kao što je fenol-kloroform. Ekstrahirana DNK može se izravno koristiti za eksperimente nizvodno poput PCR, Južni blot, i drugi.

• Eksperimentalni principi i postupci

• Ekstrakcijski postupak

Prije početka eksperimenta:

1. Pufer reagensa b i c može se taložiti u uvjetima niske temperature. Preporučujemo grijanje na 65 ℃ za 5 minuta. Nakon što se talog otopi, Može se normalno koristiti.
2. Prije upotrebe, Dodajte navedenu količinu bezvodnog etanola u Pufer za pranje 1Kao što je naznačeno na etiketi boca. Označite ček na etiketi kako biste naznačili dodavanje bezvodnog etanola.
3. Buffer za eluciju je a0.1X TE otopinaSadrži minimalne količine EDTA. Ako EDTA može utjecati na naknadne eksperimente, Preporučljivo je zamijeniti pufer za eluciju sterilnom deioniziranom vodom.
4. Rukovanje uzorkom:
5. Primiti okolo 1 ML bakterijske kulture, centrifuga na 12,000 RPM za 1 minuta, aspiraj supernatantu koliko god je to moguće, dodati 200μl reagens pufera bdo otopine bakterijskih stanica. Općenito, Preostala RNA ima minimalan utjecaj na eksperimente nizvodno. Ako treba eliminirati smetnje RNA, dodati 10μl RNASEA (10mg/ml) na smjesu, inkubirati na 37 ° C za 2 minuta s vrtlogom tijekom razdoblja.
6. Ako uzorak prerađuje sadrže gram-pozitivne bakterije, dodati 10μl lizocima (10 mg/ml)i 200μl reagens pufera b. Općenito, Preostala RNA ima minimalan utjecaj na eksperimente nizvodno. Ako treba eliminirati smetnje RNA, dodati 10μl RNASEA (10mg/ml) na smjesu, inkubirati na 37 ° C za 15-30 minuta s vrtlogom tijekom razdoblja.
7. Dodati 10μl proteinaze k (10 mg/ml), Temeljito preokrenite i miješajte, probavite na 65 ° C za 2 minuta. Tijekom tog razdoblja, preokrenite i pomiješajte otopinu uzorka 6-7 puta dok otopina uzorka ne postane jasna nakon probave.
8. Dodati 200μl reagens pufera cdo lizata i miješajte. Ako se pojavi bijeli talog, može se ostaviti da se namire; To neće utjecati na naknadne eksperimente nakon što talog nestane.
9. Dodati 200μl etanola, Temeljito pomiješajte. Neke se oborine mogu dogoditi, ali neće utjecati na naknadne eksperimente.
10. Prebacite dobivenu tekućinu u stupac za pročišćavanje ekstrakcije DNA, Ostavite na sobnoj temperaturi za 2 minuta, centrifuga na 12,000 RPM za 30 sekundi. Odbacite prikupljeni otpad i ponovno umetnite cijev za prikupljanje u stupac za pročišćavanje za sljedeći korak.
11. Dodati 600μl pufera za pranje 1, centrifuga na 12,000 RPM za 30 sekundi, odbaciti otpad, i ponovno umetnite stupac za pročišćavanje DNK u držač.

(Bilješka: Osigurajte da je etanol dodan za praznine za pranje 1.)

7. Dodati 500μl pufera za pranje 1 na stupac za pročišćavanje DNK, centrifuga na 12,000 RPM za 2 minuta, produženje vremena centrifugiranja prema potrebi za sušiju membranu.
8. Postavite stupac za pročišćavanje ekstrakcije DNK (držač) u novu cijev za centrifugu, otvoriti, i zagrijati na 65 ° C za 2 minuta. Proširiti ovaj korak prema potrebi za isparavanje etanola, Sprječavanje da ostaci etanola utječu na eksperimente nizvodno.
9. Dodati 50-100μl pufera za elucijuna membranu stupaca, centrifuga na 12,000 RPM za 2 minuta.

(Bilješka: 1. Eluiranje DNK sa 50 μl pufera za eluciju može povećati koncentraciju DNK, ali smanjiti ukupni prinos DNK. 2. Eluirana DNK iz eluata može se ponovo primijeniti u stupac za pročišćavanje ekstrakcije DNK, ponovno centrifugiranje na 12,000 RPM za 2 minuta za poboljšanje prinosa DNK.)