Kit d'extraction d'ADN/ARN de tissus

1. Composants du kit de réactifs

Caractéristiques	50T	100T
Chat. Non.	SN0329	SN0330
Colonnes de nettoyage d'ADN (ensemble)	50 (ensemble)	100 (ensemble)
Colonnes d'extraction d'ARN (ensemble)	50 (ensemble)	100 (ensemble)
Extraction d'ARN Buffer I	30 ml	2×30 ml
Tampon d'extraction d'ARN IV	30 ml	2×30 ml
Tampon d'élimination des inhibiteurs	2×30 ml	4×30 ml
Tampon de lavage 1	2×15 ml	3×15 ml
Tampon d'élution	20 ml	20 ml
Protéinase K	1ml	2x1ml
Manuel d'instructions	1	1

 

2. Stockage

Ce kit de réactifs doit être conservé à température ambiante (15-25℃) à l'état sec et est stable pendant 12 mois. La protéinase K contient un stabilisant, permettant de le transporter à température ambiante; cependant, pour un stockage à long terme, il doit être maintenu à -20 ℃.

3. Instructions d'utilisation du kit de réactifs

3.1 Ce kit est destiné à des fins de recherche en biologie moléculaire et ne doit pas être utilisé pour le diagnostic ou le traitement de maladies..

3.2 Certains composants du kit contiennent des irritants; il est conseillé de prendre les précautions nécessaires (comme porter des vêtements de protection et des lunettes).

3.3 L'utilisation de ce kit nécessite un équipement supplémentaire tel qu'une centrifugeuse à grande vitesse, bain d'eau (bain en métal), mélangeur de vortex, éthanol anhydre, l'azote liquide, chloroforme, eau déminéralisée stérile, et tubes EP.

4. Introduction au kit de réactifs

Le kit d'isolement et de purification simultanés d'échantillons d'ADN/ARN fournit une solution de purification rapide et efficace pour les échantillons de tissus ADN/ARN.. Ce kit propose deux ensembles de systèmes de lyse, adapté à divers échantillons de tissus et de cellules, y compris la plupart des plantes, animaux, bactéries, etc..

Le kit de purification rapide ADN/ARN peut extraire l'ADN/ARN total des échantillons à l'intérieur 1 heure. L’ADN/ARN extrait peut être directement utilisé pour la RT-RAP, Transfert du Nord, etc.. L'ensemble du processus de purification ne nécessite pas de réactifs toxiques tels que le phénol-chloroforme.

5. Principes et procédures expérimentaux

6. Processus d'extraction

Précautions avant de commencer l'expérience:

UN. Avant usage, ajouter la quantité spécifiée d'éthanol absolu à LaverTampon 1 selon l'étiquette sur le flacon de réactif, et cocher l'étiquette pour indiquer l'ajout d'éthanol absolu.

B. Le tampon d'élution est un 0.1x solution TE avec une quantité minimale d'EDTA. Si l'EDTA a un impact sur les expériences ultérieures, il est recommandé d'utiliser de l'eau déminéralisée stérile comme substitut au tampon d'élution.

C. Le tampon d’extraction d’ARN I est conçu pour l’extraction d’échantillons de plantes et de champignons, tandis que le tampon d'extraction d'ARN IV est principalement utilisé pour les tissus animaux., sang, et autres échantillons de tissus.

1. Traitement des échantillons:
2. Matériaux en tissus végétaux/animaux: Recueillir des échantillons à l’aide d’azote liquide, broyer le matériau collecté directement dans l'azote liquide, et passez à l'étape 2 (recommandé d'utiliser le tampon d'extraction d'ARN I).
3. Tissus cellulaires: Centrifuger et collecter <107 cellules en suspension dans un 1.5 tube à centrifuger ml, passez rapidement à l'étape 2 (Il est recommandé d'utiliser le tampon d'extraction d'ARN III).
4. Ajouter 500µl Tampon d’extraction d’ARN I/Tampon d’extraction d’ARN IV, 10µl de protéinase K, vortexer et bien mélanger. Assurer un mélange doux à cette étape pour éviter la coupure mécanique de l’ADN tissulaire et réduire le rendement en ADN.
5. Transfer the lysate to a Purification de l'ADN colonne, centrifuger à 13,000 tr/min pour 2 minutes, récupérer le filtrat (L'ARN est présent dans le filtrat). À ce point, L'ADN est adsorbé sur la colonne d'ADN et peut être brièvement stocké à 4°C tout en collectant simultanément l'ARN lors des étapes suivantes..

(Note: Si l'échantillon est un tissu végétal, centrifuger à 13,000 tr/min pour 10 minutes, et ajoutez le surnageant à la colonne de liaison à l'ADN.)

4. Estimer précisément le volume du filtrat, ajouter 5 fois le volume d'éthanol absolu, bien mélanger. En cas de précipitations, cela n'affecte pas les expériences ultérieures.
5. Ajouter le liquide obtenu à la colonne de purification d’extraction d’ARN (environ 650-700μl à chaque fois), centrifuger à plus 8,000 tr/min pour 1 minute, jeter les déchets liquides collectés, et réinsérez le tube de prélèvement dans la colonne de purification pour l'étape suivante.
6. Répétez l'étape 5, ajouter le liquide restant à la colonne de purification d'extraction d'ARN, centrifuger à plus 8,000 tr/min pour 1 minute, jeter les déchets liquides et le tube de collecte, placer la colonne de purification par extraction d'ARN dans un nouveau tube de prélèvement, et se préparer à la collecte simultanée d'ADN.
7. Ajouter 600μl de tampon d'élimination des inhibiteurs à la colonne de purification par extraction d'ADN et à la colonne de purification par extraction d'ARN, centrifuger à plus 8,000 tr/min pour 1 minute, jeter les déchets liquides, et réinsérez la colonne de purification ADN/ARN dans le tube de prélèvement pour l'étape suivante.
8. Ajouter 700µl de tampon de lavage 1 à la colonne de purification par extraction d'ADN et à la colonne de purification par extraction d'ARN, centrifuger à 14,000 tr/min (20,000×g) pour 2 minutes. Prolongez le temps de centrifugation de manière appropriée pour garantir que la membrane est complètement séchée.

(Note: Confirmez que de l'éthanol absolu a été ajouté au tampon de lavage. 1. La présence d'éthanol a un impact significatif sur les expériences ultérieures, le séchage par membrane est donc crucial. Après centrifugation, s'assurer qu'aucun éthanol n'est présent avant l'élution, puis jetez les déchets liquides et le tube de collecte.

Après lavage avec Wash Buffer 1, la membrane de la colonne de purification d'ARN ne doit avoir qu'une légère couleur. Après centrifugation, retirer délicatement la colonne de purification d'ARN, assurer aucun contact avec le tube de prélèvement pour éviter les interférences de l'éthanol.)

9. Placez la colonne de purification ADN/ARN dans un nouveau tube à centrifuger, goutte 50-100 µl de tampon d'élution sur la membrane, incuber à température ambiante pendant 5 minutes (15°C-25°C), centrifuger à plus 8,000 tr/min pour 1 minute.

(Note: Élution des acides nucléiques avec 50 µl de tampon d'élution peut augmenter la concentration d'acide nucléique mais diminuer le rendement total en acide nucléique.)

• Note:

1. En général, des volumes d'élution plus importants entraînent une efficacité d'élution plus élevée, mais pour augmenter la concentration d'acide nucléique, le volume d'élution peut être réduit, mais pas en dessous 50 µl.
2. ARN, en présence de tampon d’extraction d’ARN I/tampon d’extraction d’ARN III, n'est pas dégradé par la RNAse mais doit être distingué de l'ADN dans les expériences ultérieures. Utilisez des consommables sans RNAse pour la séparation de l'ARN autant que possible.