Kit d’extraction d’ADN génomique de selles ou de sol

1. Composants du kit de réactifs

Caractéristiques	50T	100T
Chat. Non.	SN0241	SN0242
Colonnes d'extraction d'ADN (ensemble)	50 (ensemble)	100 (ensemble)
Réactif d'élimination de l'acide humique I	50ml	2x50 ml
Réactif d'élimination de l'acide humique II	50ml	2x50 ml
Tampon réactif ⅳ	30 ml	2×30 ml
Réactif tampon C Plus	30 ml	2×30 ml
Tampon d'élimination des inhibiteurs	30ml	2x30 ml
Lysozyme	1ml	2x1ml
Protéinase K	1ml	2x1ml
RNase A	1ml	2x1ml
Tampon de lavage 1	15 ml	2 × 15 ml
Tampon d'élution	20 ml	2 ×20ml
Manuel d'instructions	1	1

2. Stockage

Ce kit de réactifs doit être conservé à température ambiante (15-25℃) et dans des conditions sèches, avec une durée de conservation de 12 mois. Les colonnes de purification par extraction d'ADN peuvent être stockées pendant 1 année dans un environnement frais et sec. Lysozyme, Protéinase K, et RNase A contiennent des conservateurs, permettant le transport à température ambiante, mais pour un stockage à long terme, ils doivent être conservés à -20℃.

3. Instructions d'utilisation du kit de réactifs

3.1 Ce kit de réactifs est destiné à la recherche en biologie moléculaire et ne doit pas être utilisé pour le diagnostic ou le traitement de maladies..

3.2 Certains composants du kit de réactifs contiennent des irritants. Des mesures de protection telles que le port de vêtements et de lunettes de protection sont recommandées.

3.3 Pendant l'utilisation de ce kit de réactifs, une centrifugeuse à grande vitesse, bain d'eau (bain en métal), mélangeur de vortex, éthanol anhydre, eau déminéralisée stérile, et les tubes EP doivent être préparés par l'utilisateur.

4. Introduction au kit de réactifs

Ce kit fournit une méthode rapide et efficace pour purifier l'ADN génomique microbien du sol, excréments, et des échantillons de vomi. Il est largement utilisé pour l'extraction de l'ADN microbien du sol, excréments, et vomir.

 

Ce kit supprime efficacement les impuretés et les inhibiteurs de l'échantillon, réduire les réactions inhibiteurs dans les expériences en aval telles que RAP. L'ensemble du processus de purification ne nécessite pas de réactifs toxiques tels que le phénol-chloroforme. L'ADN extrait peut être directement utilisé pour la PCR, Southern Blot, et d'autres applications.

5. Principes et procédures expérimentaux

6. Processus d'extraction

Avant de commencer l'expérience:

UN. Tampon réactif Iv peut précipiter dans des conditions de basse température. Nous recommandons de chauffer à 65 ℃ pendant 5 minutes. Après dissolution du précipité, il peut être utilisé normalement.

B. Avant utilisation, ajouter la quantité spécifiée d'éthanol anhydre à Tampon de lavage 1 comme indiqué sur l'étiquette du flacon. Cochez l'étiquette pour indiquer l'ajout d'éthanol anhydre..

C. Le tampon d'élution est un 0.1x solution TE contenant des quantités minimales d'EDTA. Si l'EDTA peut affecter les expériences ultérieures, il est conseillé de remplacer le tampon d'élution par de l'eau déionisée stérile.

1. Traitement des échantillons (Élimination des inhibiteurs):

UN. Échantillons fécaux et vomissants: Ajouter environ 200 mg de l'échantillon à extraire, ajouter 1ML de réactif d'élimination de l'acide humique I, Vortex à fond pour 1-2 minutes, centrifuger à 12,000 tr/min pour 2 minutes, jeter le surnageant, ajouter 560μl de tampon IV à la pastille, inverser et mélanger, digérer à 85 ℃ pour 5 minutes, inverser et mélanger 6-7 fois pendant la digestion, alors passez à étape 2.

B. Échantillons de sol: Peser environ 0,1 g-0.5g de sol tamisé, ajouter 500μL de tampon IV et 100 μl de réactif d'élimination de l'acide humique I, inverser et mélanger, digérer à 85 ℃ pour 5 minutes, inverser et mélanger 6-7 fois pendant la digestion, alors passez à étape 2.

(Note: Réactif d'élimination de l'acide humique réactif d'élimination de l'acide humique II est principalement utilisé pour les sols à forte teneur en acide humique, comme les sols forestiers et les sols sédimentaires. Ajouter 1ML de réactif d'élimination de l'acide humique I à l'échantillon, vortex, secouer 1-2 minutes, centrifuger à 8,000 tr/min pour 2 minutes, jeter le surnageant, puis ajouter 1ML de réactif d'élimination de l'acide humique II, vortex, centrifuger à 8,000 tr/min pour 2 minutes, jeter le surnageant. Cette étape peut réduire davantage les inhibiteurs de l'acide humique du sol mais réduire considérablement le rendement de l'ADN.)

2. Centrifuger à 12,000 tr/min pour 2 minutes, Transférer le surnageant dans un nouveau tube à centrifugeuse (Environ 500 μL de liquide transféré), ajouter 20 μl de protéinase k (10 mg/ml), 20μl de lysozyme, et 20 μl de rnase A, et incuber à 65 ℃ pour 2 minutes.
3. Ajoutez un volume égal de Réactif Tampon C Plus (Environ 560 μl de liquide transféré) au lysat, bien mélanger. Si un précipité blanc apparaît, Laisser s'installer; Cela n'affectera pas les expériences ultérieures après la disparition du précipité.
4. Ajouter un volume égal d'éthanol à Réactif Tampon C Plus (par exemple., ajouter 560µl de Réactif Tampon C Plus, puis ajouter 560 μl d'éthanol), bien mélanger. Il peut y avoir des précipitations, Mais cela n'affectera pas les expériences ultérieures.
5. Ajouter le liquide obtenu à la colonne de purification d'extraction d'ADN (manche) (environ 650-700μl à chaque fois), centrifuger à plus 8,000 tr/min pour 1 minute, jeter les déchets liquides collectés, et réinsérez le tube de collecte dans la colonne de purification d'extraction d'ADN (manche) pour la prochaine étape.
6. Ajouter 400μl de tampon d'élimination des inhibiteurs, centrifuger à plus 8,000 tr/min pour 1 minute, jeter les déchets liquides, et réinsérer le Purification de l'ADN colonne dans la manche pour l'étape suivante.
7. Ajouter 500µl de tampon de lavage 1 à la colonne de purification d'extraction d'ADN (manche), centrifuger à 14,000 tr/min (20,000×g) pour 1 minute.
8. Ajouter 300µl de tampon de lavage 1 encore à la colonne de purification d'extraction d'ADN (manche), centrifuger à 14,000 tr/min (20,000×g) pour 2 minutes.
9. Placer la colonne de purification d'extraction d'ADN (manche) dans un nouveau tube à centrifuger, ouvrir le couvercle, et incuber à 65 ℃ pour 2 minutes. Cette étape peut être étendue si nécessaire pour évaporer l'éthanol autant que possible pour empêcher les résidus d'éthanol d'affecter les expériences en aval.
10. Goutte 100µl de tampon d'élution sur la membrane, centrifuger à 12,000 tr/min pour 2 minutes.

(Note: 1. L'ADN éluant avec un tampon d'élution de 50 μl peut augmenter la concentration de l'ADN mais réduire le rendement total de l'ADN; 2. L'ADN élué peut être réappliqué à la colonne de purification d'extraction d'ADN, à nouveau centrifugé à 12,000 tr/min pour 2 minutes, et collecté pour augmenter le rendement de l'ADN.)