Phosphatase alcaline tissulaire et sanguine Solarbio (AKP/ALP) Kit de test d'activité

Phosphatase alcaline tissulaire et sanguine (AKP/ALP) Kit de test d'activité

Note: Prenez deux ou trois échantillons différents pour la prédiction avant le test.

Équipement d'exploitation: Spectrophotomètre

Numéro de catalogue: BC2140

Taille: 50T/24S

Composants:

Réactif d'extraction: Liquide 30 mL×1 bouteille, stockage à 4℃.

Réactif 1: Liquide 10 mL×1 bouteille, stockage à 4℃ et à l’abri de la lumière.

Réactif 2: Liquide 10 mL×1 bouteille, stockage à 4℃ et à l’abri de la lumière.

Réactif 3: Liquide 30 mL×1 bouteille, stockage à 4℃ et à l’abri de la lumière. Il ne peut pas être utilisé s'il devient bleu-vert.

Standard: Liquide 1 mL×1 bouteille, 10 Solution étalon de phénol μmol/mL, stockage à 4℃. Diluer avec de l'eau distillée pour obtenir 2.5 µmol/mL avant utilisation.

Description du produit:

AKP/ALP est une glycoprotéase contenant du zinc, qui hydrolyse divers composés monoesters phospholipidiques naturels et synthétiques dans des conditions alcalines. AKP / Les ALP sont largement distribuées dans les organes humains, principalement dans le foie.

En condition alcaline, L'AKP/ALP catalyse l'hydrolyse du phénylphosphate disodique en phénol, et le phénol réagit avec la 4-aminoantipyrine et le ferricyanure de potassium pour former un dérivé de quinone rouge, qui peut être détectée en absorbance à 510 nm. L'activité AKP/ALP peut être calculée en mesurant le taux d'augmentation de l'absorbance à 510 nm.

Réactifs et équipements requis mais non fournis:

Spectrophotomètre, centrifugeuse de bureau, agent de transfert, 1 Cuvette en verre ml, glace et eau distillée.

Procédure:

je. Enzyme préparation:

Ajouter 1 mL Réactif d’extraction à 0.1 g de tissu, broyer soigneusement. Centrifuger à 4℃, 10000 tr/min pour 10 minutes. Prenez le surnageant sur la glace pour le tester. L'échantillon de sang peut être détecté directement. Diluer avec le réactif d'extraction si le concentré est élevé.

II. Détermination procédure:

1. Spectrophotomètre de préchauffage pour 30 minutes, ajuster la longueur d'onde à 510 nm, remettre le compteur à zéro avec du distillé
2. Ajouter des réactifs 1.5 Cuvette mL comme suit:

Nom du réactif (µL)	Test tube A3	Tube de commande A4	Tube vierge A2	Tube étalon A1
Eau distillée			20
Solution standard				20
Surnageant	20
Réactif 1	200	200	200	200
Réactif 2	200	200	200	200
Bien mélanger, rester à 37℃ pendant 15 minutes.
Réactif 3	600	600	600	600
Surnageant		20
Bien mélanger, détecter l'absorbance à 510 nm, enregistrer en A1, A2, A3, A4.

III. Calcul de l'activité AKP/ALP:

• Concentration en protéines:

Définition de l'unité: Une unité d’activité enzymatique est définie comme la quantité d’enzymes catalysant la génération de 1 μmol de phénol dans le système réactionnel par minute à 37 ℃ pour chaque mg de protéine.

AKP/ALP (U/mg prot) =[C×(A3-A4)÷(A1-A2)×Vs]÷(Cpr×Vs)÷T=0,167×(A3-A4)÷(A1-A2)÷Cpr

• Poids de l'échantillon:

Définition de l'unité: Une unité d’activité enzymatique est définie comme la quantité d’enzymes catalysant la génération de 1 μmol de phénol dans le système réactionnel par minute à 37 ℃ pour chaque g d'échantillon.

AKP/ALP (U/g poids) =[C×(A3-A4)÷(A1-A2)×Vs]÷(W÷Ve × Vs)÷T=0,167×(A3-A4)÷(A1-A2)÷W

• Sang:

Définition de l'unité: Une unité d’activité enzymatique est définie comme la quantité d’enzymes catalysant la génération de 1 µmol de phénol dans le système réactionnel par minute à 37 ℃ pour chaque ml de sérum.

AKP/ALP (U/mL) =[C×(A3-A4)÷(A1-A2)×Vs]÷Vs÷T=0,167×(A3-A4)÷(A1-A2)

C: Concentration standard, 2.5 µmol/mL;

Corde: Volume total de réaction, 1020 µL=1,02 mL; Contre: Volume surnageant, 0.02 ml;

Ve: Volume d'extraction, 1 ml; W: Poids de l'échantillon, g;

T: Temps de réaction, 15 minutes;

Cpr: Concentration de protéines de l'échantillon, mg/ml.

Note:

1. Réactif 1, Réactif 2 et réactif 3 devrait être protégé contre
2. Réactif 3 ne peut pas être utilisé s'il est devenu bleu-vert.
3. Mélanger soigneusement et rapidement après avoir ajouté le réactif 3 pour éviter d'être incomplet

Exemple expérimental:

1. Prendre 0,1 g de pancréas de souris et ajouter 1 mL de solution d'extrait pour homogénat. Après avoir pris le surnageant, fonctionner selon les étapes de détermination. Calculer AT = 0.324, CA = 0.037, AB = 0.022, COMME = 0.677. Calculer l'activité enzymatique en fonction de la masse de l'échantillon: Activité enzymatique AKP/ALP (U/g masse) = 0,167×(AT-AC)÷(AS-AB) ÷ W =0,167×(0.324-0.037)÷(0.677-0.022)÷0,1=0,732 U/g
2. Après avoir pris le sérum de lapin, l'opération est réalisée selon les étapes de détermination, et l'activité enzymatique est calculée comme suit: À = 0.190, CA = 0.015, AB = 0.022, COMME = 0.677. Selon le volume sanguin, l'activité enzymatique est calculée comme suit: Activité enzymatique AKP/ALP (U/mL) = 0,167×(AT-AC) ÷ (AS-AB) =0,167×(0.190-0.015)÷(0.677-0.022)=0,0446U/ml.

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